球形芽孢杆菌杀蚊毒素的作用方式和蚊虫的抗性特征

球形芽孢杆菌（Bacillussphaericus）是一种对蚊幼虫有毒杀作用的好气芽孢杆菌。高毒力菌株在芽孢形成过程中能产生有51．4和41．9kDa蛋白组成的伴孢晶体。蚊幼虫取食芽孢／晶体混合物后,晶体蛋白被降解形成活性蛋白而结合到中肠上皮细胞的特异性结合位点上,最后导致蚊幼虫死亡;低毒力菌株和部分高毒力菌株在其营养体生长阶段可产生可溶性的100、30．5和38．5kDa的Mix毒素（Mtx1、Mtx2和Mix3）。该毒素同晶体毒素和其它杀虫毒素无同源性,其杀蚊作用机理不详。在实验室和野外长期高选择性压力下,蚊幼虫会通过中肠上皮细胞二元毒素特异性结合位点的改变而对球形芽孢杆菌产生不同水平的抗性,其抗性特性是由位于染色体上的单一隐性基因决定的。本文简述了球形芽孢杆菌的杀蚊毒素的作用方式及抗性蚊虫的抗性特性。     

粘虫幼虫对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体低度敏感的机理探讨

比较了粘虫和家蚕对苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种菌株ＨＤ┐１的伴孢晶体在幼虫中肠液中的体外活化过程。ＳＤＳ┐ＰＡＧＥ结果表明,伴孢晶体或溶解的１３０ｋＤａ原毒素在粘虫中肠液中活化后形成的毒性肽的浓度比家蚕低,原因是１３０ｋＤａ原毒素在粘虫中肠液中发生了过度降解。蛋白酶活性检测结果表明,粘虫中肠液中含有较高的蛋白酶活性。     

球形芽孢杆菌在死蚊幼体内的再循环及其对持效期的影响

球形芽孢杆菌Ｃ３┐４１杀蚊幼实验制剂对３～４龄致倦库蚊和大劣按蚊幼虫有较强的毒性,其４８小时的ＬＣ５０值分别为０．００７９５和０．９８５００ｍｇ／Ｌ。蚊幼虫死亡后,球形芽孢杆菌芽孢能在死蚊幼体内正常萌发、繁殖和发育,并产生有杀蚊活性的芽孢和晶体混合物。在含有死蚊幼虫的处理组,两种蚊幼虫的死亡率２０天内一直维持在９５％以上;在无死蚊幼的对照组,大劣按蚊幼虫１４天后的死亡率下降为０,致倦库蚊幼虫２０天后的死亡率下降到１０％以下。证明经球形芽孢杆菌处理致死的蚊幼尸体可以延长制剂在水体中的持效期     

球形芽胞杆菌Cry48Aa/Cry49Aa毒素在苏云金芽胞杆菌中的共表达及杀蚊活性

球形芽胞杆菌Cry48Aa/Cry49Aa复合杀蚊毒素对库蚊有高毒力,并能杀死二元毒素BinA/BinB抗性蚊虫,是一种比较有潜力的新型杀蚊毒素蛋白,但Cry48Aa在野生菌株中表达量较低限制了该毒素的开发与应用。本文将cry48Aa基因启动子置换,并将cry48Aa和cry49Aa在苏云金芽胞杆菌中进行共表达。SDS-PAGE检测重组蛋白表达,可见120 kD左右的Cry48Aa蛋白带和53 kD的Cry49Aa蛋白带,cry48Aa在自身启动子下表达量偏低,在置换强启动子Pcry1Aa后表达量明显提高,但Cry48Aa仍低于Cry49Aa的表达量。重组菌株BMB171-pBU-cry48Aa-cry49Aa和BMB171-pBU-Pcry1Aa-cry48Aa-cry49Aa产生典型的双锥型和方形2种晶体。两菌株发酵液对实验室饲养的二元毒素敏感(CqSL)和抗性致倦库蚊(CqRL/C3-41)品系4龄幼虫都表现出高毒力,LC₅₀分别为3.05和3.45以及0.65和0.82 μL/mL。     

苏云金杆菌高毒力菌株4．0718的快速选育

从湖南省不同生态区域的旱作地，果园和稻园采集的858份土样中，分离筛选出苏云金杆菌30株。选取一株具典型苏云金杆菌菌落特征和较高杀虫毒力的菌株701^2c为出发菌株，经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合诱变，显微涂片染色镜检，发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数量及芽孢与伴孢晶体的比例与杀虫菌株4．0718。该突变株杀虫毒力与原始菌株相比提高了7．5倍，在6、12和24h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达20％、97％和100％。此菌株的高效速效杀虫毒力经连续10代培养能稳定遗传。     

苏云金素与苏云金杆菌芽孢晶体混剂对小菜蛾的增效作用

将苏云金素和苏云金杆菌的孢晶制剂分别作为单一制剂，用混和饲料感染法在室内测定苏云金素分别与苏云金杆菌ＨＤ－１、ＣＴ－４３、８１－６、ＷＰ－２等４个菌株孢晶制剂的混剂对小菜蛾幼虫的协同作用。按Ｓｕｎ－Ｊｏｈｎｓｏｎ毒力指数法计算结果表明，苏云金素对所有供试菌的孢晶制剂都有增效作用，共毒系数从１２７．４３至４１５．６２不等。当混剂以芽孢晶体为主要活性组分，苏云金素占全部活性组分的１６．７％情况下增效作     

苏云金杆菌芽孢与晶体不同配比对亚洲玉米螟的毒效

苏云金杆菌3个变种的芽孢与晶体按重量百分比混合,以亚洲玉米螟1龄和2龄幼虫测定毒力。对1龄幼虫主要致病因素是晶体。对2龄幼虫,“HD—1”以晶体为主;SB—14菌株当芽孢与晶体1:1时,杀虫效果最好;E743—4菌株以芽孢为主。     

苏云金杆菌杀虫剂新进展

苏云金杆菌杀虫剂新进展苏云金杆菌简称Ｂ．Ｔ．，是一类产晶体芽孢杆菌，属好气性蜡状芽孢杆菌群，在芽孢囊内产生晶体，有１２个血清型，１７个变种。可用于防治直翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目，特别是鳞翅目的多种害虫。苏云金杆菌可产生两大类毒素：内毒素（即伴孢晶...     

两株球形芽孢杆菌的生物学和对致乏库蚊的毒力

我们证明了球形芽孢杆菌Bacillus sphaericus Neide(简称B·s)1593和MR—4菌株的生化特性和酯酶型相同,但其血清型分别属于球形芽孢杆菌血清型H5a5b和H25。这两个菌株在(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ)种培养基中的生长曲线。用致乏库蚊Culex fatigans 2龄幼虫进行生物测定,结果1593和MR-4菌株对致乏库蚊幼虫的毒杀作用强于苏芸金杆菌以色列变种1897;于Ⅲ号培养基上的细菌制剂毒力高于其它培养基上的制剂,我们还证明这两个制剂能持续二天以上的杀蚊效果。本文还讨论了幼虫虫龄、喂食和冻融作用对B·s.毒力的影响。蚊类是疟疾、丝虫病、病毒性脑炎、黄热病和登革热等病的媒介,给人类的健康造成了严重的威胁。为有效地消灭或控制蚊类,开展微生物防治是很重要的。蚊类的病原菌——球形芽孢杆菌B·s.分布于世界各地(士山彬,1980;Singer,1980;Davidson等1981)。目前有关它的形态和生物学特性、对各种蚊幼虫的毒力及引起蚊幼虫的病理变化均有研究。有的学者根据DNA同源现象将B.s.分为遗传学上的5个群。按噬菌体分型,有病原性的B.s.可分为4群。de Barjac证实鞭毛抗原分型与噬菌体分型有平行关系(Singer,1980;Davidson等,1981)。十余年来对B.s.1593菌株研究较多,但对B.s.MR—4菌株仅有零星报道,且所涉及的蚊种也很有限。我国蚊类为害严重,而对蚊类这一病原几乎未作系统的研究。作者对B.s.1593和MR—4菌株的生物学特性、两菌在三种培养基中的发酵性能及其对致乏库蚊幼虫的毒力进行了对比,还观察了不同虫龄的敏感性和生物测定中添加饵料与否对其药效的影响。在我国蚊类的微生物防治中,对高毒力菌株及获得高毒效制剂的培养基的选择,对野外试验中某些应用技术的确立有所裨益。     

夜蛾科昆虫高毒力苏云金杆菌菌株的分离和筛选

从山东省采集的750份土样中分离出苏云金芽孢杆菌菌株57株,这些菌株的晶体形态主要有菱形、圆形等。以夜蛾科害虫粘虫和甜菜夜蛾初孵幼虫为试虫,通过生测筛选出一株高毒力菌株QCL-1。菌株QCL-1对甜菜夜蛾的毒力显著高于标准菌株HD-1,对粘虫的毒力与HD-1相当。     

苏云金杆菌SD—5菌剂防治大豆银纹夜蛾的研究

试验结果表明ＢｔＳＤ－５对银纹夜蛾幼虫具有高毒力、纯化晶体的毒力比孢昌混合物高，毒杀速度也较快；ＳＤ－５对银纹蛾化蛹和羽化均有明显影响；田间小区药效试验表明ＳＤ－５ ０．２×１０＾８、０．５×１０＾８、１×１０＾８活芽孢／ｍＬ６天的防效分别为９０．１％、９６．９％和９７．８％；示范推广１２３．６ｈｍ＾２，平均防效为９１．８５％；ＳＤ－５处理区天敌种类和数量明显高于化防区；ＳＤ－５田间喷施后第８天毒     

对夜蛾科幼虫高毒力的苏云金芽孢杆菌菌株及其晶体蛋白特性

本文对自德国土壤中分离的８株苏云金芽孢杆菌进行毒力测定和晶体蛋白特性的研究。生物测定结果表明，８株Ｂｔ中除Ｓ２１－１、Ｓ２１－１３对甜菜夜蛾无毒性外，对夜蛾科的４种供试昆虫均有很高的毒效，４８小时校正死亡率高达８０％～１００％；扫描电镜观察和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ晶体蛋白电泳结果可知，Ｓ１１－６和Ｓ２１－１３２个菌株只有一种菱形晶体和一条相应的１３５ＫＤａ主带，其余６个菌株均有菱形和方形两种晶体，以及两条相应的１３５ＫＤａ和６５ＫＤａ主带。另对晶体的特性与其毒力的关系进行了讨论。     

两种鳞翅目幼虫对Bt敏感性的差异及其机理的探讨

本文用生物鉴定和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等方法研究了两种鳞翅目昆虫家蚕与菜粉蝶幼虫对４株苏云金杆菌的敏感性差异及其机理。生物鉴定结果表明菜粉蝶幼虫对Ｂｔ的敏感性比家蚕低。用两种昆虫的胃液体外活化伴孢晶体，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，菜粉蝶幼虫胃液对伴孢晶体的活化能力低，不能将无杀虫活性的原毒素在短时间内转化为毒性肽。将伴孢晶体称经家蚕胃液化再饲喂菜粉蝶幼虫，同样条件下死亡率提高３－５倍。当菜粉蝶幼虫胃液的ｐ     

三株产晶体芽孢杆菌的分离及对蚊幼虫的致病性

苏云金杆菌Bacillus thuringiensis早已作为一种微生物杀虫剂广泛地应用。我们从广州地区蚊幼虫孳生地的土壤中分离到三株产晶体的芽孢杆菌,属苏云金杆菌,代号分别为009、18—1、42—2。我们对其对蚊幼虫的致病性作了测定,并对这三个菌株的生理生化及鞭毛抗原特性作了分析,现将结果报道如下。材料与方法 (一)菌种来源 42—2,009,18—1从市郊蚊幼虫孳生地土壤中分离得到,参考菌株来源见表一。     

芽孢杆菌剂与苏脲1号对家蝇幼虫的协同作用和持效

实验室研究结果表明,苏云金杆菌CT—43和YBT—127菌株的孢晶素粉对家蝇幼虫的效果分别为65％和40％,明显高于森田芽孢杆菌的效果(5％),在多种混合应用的组合中,只有CT—43菌株的孢晶粉与苏脲Ⅰ号混合应用有明显的协同作用。苏云金素混入家蝇饲料中在培养室保存15天,对蝇幼虫的毒力没有下降,其他菌剂和苏脲Ⅰ号的毒效均明显下降。改进苏云金杆菌的孢晶素制剂,用于防治家蛹幼虫是有效可行的。     

苏云金芽孢杆菌晶体毒素感染敏感昆虫离体与活体细胞的病理学比较研究

用苏云金芽孢杆菌蜡螟变种81—6菌株的晶体毒素感染菜青虫幼虫和家蚕离体细胞 感染早期两类细胞的线粒体都发生内脊膨大鼓起,随后细胞质内出现较大的空泡,感染后期线粒体膜和细胞质膜都发生溶解和破裂,细胞解体死亡。研究结果表明:离体细胞和活体细胞在感染苏云金芽孢杆菌晶体毒素后,细胞的病变过程相同。     

提高Bt农药的防治效果

提高Ｂｔ农药的防治效果（湖南省农科院植保所长沙４１０１２５）谭荫初Ｂｔ是苏芸金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）的简称。这是一种能在细胞内形成菱形伴孢晶体的芽孢杆菌。伴孢晶体是能毒害昆虫的肠道而使之瘫痪致死的强毒性蛋白质结晶。芽孢...     

苏云金素高产菌株的选育

用硫酸二乙酯(DES)处理苏云金杆菌CT-43菌株,得到了菌落形态、菌形和产生褐色素三种类型的突变株。光滑型(S-型)菌落自发突变的比例依亚种的不同而不同,CT-43菌株高达13.0％,苏云金亚种为10.6％,以色列亚种为3.9％,库斯塔克亚种不产生S-型菌落,S-型菌落依DES处理CT-43菌株芽孢时间的延长而增加,处理90分钟达49.0％。除个别S-型菌落外,均不产生苏云金素。诱变产褐色素菌落的频率为1.4％,它们都不产苏云金素。菌形变异株有仅芽孢,仅伴孢晶体,芽孢和伴孢晶体,营养体和芽孢,营养体和伴孢晶体,营养体、芽孢和伴孢晶体发生变异六种类型,它们产生苏云金素的水平各不相同。还获得了苏云金素产量比出发菌株明显提高的二个菌株。     

青霉素影响甜菜夜蛾幼虫耐受几种苏云金杆菌晶体蛋白的能力

本文评估了Cry1Ab、Cry1Ba和Cry1Ca蛋白对甜菜夜蛾2龄幼虫的毒力,其LC50分别为0.442 5、0.675 7 μg/cm2和0.150 2 μg/cm2,Cry1Ba毒力最低,其次是Cry1Ab,而Cry1Ca毒力最高。青霉素影响幼虫对晶体毒素的耐受能力;一次添加高剂量(500 μg/cm2)青霉素于饲料中显著提高幼虫的耐受能力,以含低剂量(60 μg/cm2)青霉素的饲料饲养幼虫多代也能达到相似的效果。     

东北地区高毒力苏云金芽孢杆菌HB-3菌株生物学特性研究

从自然死亡的玉米螟幼虫体内分离获得一株对玉米螟高毒的苏云金芽孢杆菌,编号为HB-3。该菌株产生菱形和方形两种晶体蛋白。纯化晶体及孢晶混合物的毒力测定结果表明,该菌株对玉米螟具有较高毒力,LC₅₀分别为5.82μg/mL和5.94μg/mL,对尖音库蚊也有一定毒力,LC₅₀分别为16.59μg/mL和17.50μg/mL。生理生化特性研究结果表明,HB-3与已知的蜡螟亚种(Bacillus thuringiensissubsp.galleriae)基本一致,血清型为H5ab。晶体蛋白的SDS-PAGE分析表明,HB-3菌株晶体蛋白至少由分子量为133 kDa、65 kDa4、5 kDa和23 kDa的4种多肽组成。