苏云金芽胞杆菌新菌株S184 cry1Ab基因的克隆

通过对ＧｅｎＢａｎｋ中ｃｒｙ１类基因序列的保守区进行分析,设计一对针对其保守区的引物Ｙ５－１（ＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＧＡＧＧ）和Ｙ３－１（ＧＣＴＧＴＧＡＣＡＣ ＧＡＡＧＧＡＴＡＴＡＧＣＣＡＣ）,对苏云金芽胞杆菌（Ｂａｘｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ）新菌株Ｓ１８４质粒ＤＮＡ进行扩增,得到一大小为１．５ｋｂ的ＤＮＡ片段,序列分析显示该片段与ｃｒｙ１因基因高度同源。以此片段为     

苏云金杆菌10亚种的质粒DNA图谱分析和杀蚊晶体毒素蛋白基因在质粒上的定位

对苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称B.t.)血清型H_1-H_9和H_(14)10个亚种的12个菌株质粒DNA图谱作了琼脂糖凝胶电泳分析。质粒DNA分子量在3.3～150MD之间,其中苏云金亚种(B.t.subsp.thuringiensis)HD-2菌株、戈尔斯德亚种(subsp.kurstaki)HD-1菌株和鲇泽亚种(subsp.aizawai)含有质粒10个;以色列亚种(subsp.israelensis)质粒6个;苏云金亚种berliner菌株和莫里逊亚种(subsp.morrisoni)质粒6个;质粒5个的有戈尔斯德亚种的HD-73菌株和多窝亚种(subsp.tolworthi);猝倒亚种(Subsp.sotto)和有蜡螟亚种(subsp.galleriae)分别有3和4个;而幕虫亚种(subsp.finitimus)和亚毒亚种(subsp.subtoxicus)有质粒2个。以色列和莫里逊亚种编码的杀蚊毒素蛋白基因分别定位于75MD和98MD的质粒上,它们与苏云金杆菌PG-14的cryIVD基因的同源性大于85％。     

苏云金芽孢杆菌新分离株S_(18-4) δ-内毒素基因在Btk·BE_(20)中的克隆和表达

选用土壤新分离株Ｓ１８－４为供体菌,以ＰＨＴ３１０１穿梭质粒为载体,载体和供体ＤＮＡ用Ｐｓｔｌ酶切后进行连接,用电激法将重组质粒转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ·ＢＥ２０中。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察,证明δ－内毒素基因得到了表达,并具有很高的表达量。生物测定结果显示,重组株对夜蛾科幼虫具有比野生株Ｓ１８－４更强的杀虫毒性。     

苏云金芽孢杆菌Cry1Aa和Cry3A结构域编码区的融合

苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt)毒素蛋白由3个不连续的结构域（domains)组成，其中结构域I为膜跨越区，与膜孔道形成有关，结构域Ⅱ，Ⅲ与受体结合有关。利用基因重组技术以鳞翅目昆虫具专一活性的毒素蛋白Cry1Aa与专一性有关的结构域编码区与对鞘翅目昆虫具专一活性的毒素蛋白Cry3A编码基因融合，构建成融合表达载体，为进一步构建Bt工程菌和Bt转基因植物奠定基础。