卵丘细胞在卵母细胞体外成熟培养过程中的作用

介绍了卵丘细胞在卵母细胞体外成熟培养过程中的作用,主要从卵丘细胞与卵母细胞的结构与功能联系,卵丘扩展对卵母细胞体外成熟的影响及卵丘细胞层数对卵母细胞体外成熟的影响三个方面加以阐述。     

无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟方法的初步探讨

主要探讨无卵丘水牛卵母细胞体外成熟的可行性,以便为研究卵母细胞成熟机理提供模型。无卵丘的水牛卵母细胞随机分为5组,然后分别进行直接成熟培养（M1）,与卵丘细胞单层共培养（M2）,用未扩展的卵丘细胞块包围培养（M3）,与扩展的卵丘细胞团共培养（M4）和用卵巢组织包围培养（M5）。无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟培养24 h后检查第一极体（PB1）排出率,随后对这些卵母细胞进行孤雌激活,评定其成熟质量。结果发现,M4组的第一极体排出率明显高于M1组和M5组,其它各组间没有显著差异（P〉0.05）;M5组的孤雌激活卵裂率显著低于M1组和M4组（P〈0.05）,而与M2组和M3组没有显著差异（P〉0.05）,但M3和M4两组的囊胚发育率显著高于M1组和M5组（P〈0.05）。这些研究结果表明：（1）未扩展卵丘细胞包围法和扩展卵丘细胞团支撑法可促进无卵丘水牛卵母细胞的体外成熟,但与卵丘细胞单层共培养没有作用;（2）卵巢组织包围培养不利于水牛卵母细胞的体外成熟。     

哺乳动物卵母细胞的体外成熟

哺乳动物卵母细胞的体外成熟刘红林（南京农业大学动物科技学院，２１００９５）范必勤（江苏省农科院牧医所）１引言哺乳动物卵母细胞移离卵泡环境，在体外能够不依赖激素自发成熟。卵母细胞的成熟过程至少需要经过周围卵丘细胞、卵母细胞核以及核外细胞质等方面的变化。...     

牛卵丘细胞对卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响

试验以牛卵泡内卵丘-卵母细胞复合体(COCs)为材料,探讨了牛卵丘细胞包裹程度对卵母细胞体外成熟(IVM)和孤雌胚胎(PAEs)发育的影响。试验1,将COCs随机分为2组,在开展IVM前,将其中一组COCs的卵丘细胞机械吹打去除成为机械裸卵(DOs),研究卵丘细胞层存在与否对卵母细胞体外核成熟(排出第一极体)和孤雌激活后发育能力的影响;试验2,根据COCs卵丘细胞包裹层数将COCs分为3组,即卵丘细胞层少(1～4层)的COCs为A组、卵丘细胞层多(5层以上)的COCs为B组及包裹5层以上卵丘细胞且附带卵泡壁颗粒细胞层(FSP)的COCs为C组,研究卵丘细胞层包裹程度对卵母细胞的体外核成熟和孤雌激活后胚胎发育能力的影响。结果表明:卵丘细胞的存在更有利于卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎发育;COCs中卵丘细胞包裹层数对卵母细胞体外核成熟率没有显著影响,但包裹卵丘细胞层数多且附带FSP的卵母细胞,其PAEs的囊胚率显著高于包裹卵丘细胞少的卵母细胞PAEs。     

卵丘细胞对辽宁绒山羊卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响

为了进一步探索辽宁绒山羊卵母细胞体外成熟的方法,本试验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用抽吸法收集直径大于2 mm卵泡的卵母细胞,研究卵丘细胞对卵母细胞体外成熟和孤雌发育的影响。试验1,将一部分COCs经机械吹打脱除卵丘细胞成为机械裸卵(DOs),然后以4种方式培养,即COCs单独培养、DOs与COCs共培养(DOs(COCs))、DOs与卵丘颗粒细胞共培养(DOs(CCs)),以及DOs单独培养。试验2,根据包裹卵母细胞的卵丘细胞的完整性分为3组,有3层卵丘细胞紧密包围的卵母细胞复合体COCs3,有1-3层卵丘细胞包围的卵母细胞COCs1-3,无卵丘细胞包围的裸露卵母细胞NOs,3组各自单独培养。结果表明:COCs组的成熟率、孤雌卵裂率和囊胚率最高,分别为83.25%、41.75%和29.25%,卵丘细胞的存在有利于卵母细胞体外成熟和随后的发育,COCs3组成熟率、孤雌卵裂率和囊胚率分别为83.25%、42.50%和29.75%,显著高于COCs1-3和NOs组,卵丘细胞的完整性也影响着卵母细胞的体外发育,自然裸卵已失去体外发育能力。     

猪卵母细胞体外成熟的研究

本试验主要探讨了促性腺激素(FSH LH)和17-β-雌二醇(E_2)对猪卵母细胞体外成熟的作用以及卵丘细胞群状态与卵核成熟之间的关系.结果表明:FSH LH对猪卵母细胞的卵丘扩展和核成熟有明显的促进作用,17-β-雌二醇不影响卵丘细胞群的扩展,但能促进卵母细胞的核成熟.卵丘扩展的A、B、C级卵母细胞,其核发育到中期Ⅱ的比例分别为93.75%、83.58%、63.64%,卵丘未扩展的卵母细胞,其核发育到中期Ⅱ阶段的比例极低.     

山羊卵母细胞的体外成熟和受精

在有颗粒细胞，促卵泡素，促黄体素及１７β雌二醇存在的情况下，裹着卵泡卵丘细胞的山羊卵母细胞的体外成熟。从直径２－６ｍｍ的卵泡中获得的卵母细胞，有８６％成熟分裂；而直径为１－２ｍｍ的留言簿包，只有２４％的卵母细胞达到中期Ⅱ。卵泡卵丘母细胞复合体，培养前在２０℃下处理，结果有１１．５％的卵母细胞出现不正常的减数分裂的纺缍体。     

影响绵羊体外受精技术因素的研究

作者对影响卵母细胞体外成熟和体外受精的因素进行研究。结果表明,激素FSH和LH明显促进卵母细胞的体外成熟,且10、20和40μg/m l组成熟率高于5μg/m l组,差异显著;运输温度在28~32℃的成熟率高于22~24℃和35~37℃,差异显著;用BO受精体系卵子卵裂率高于TALP受精体系,差异显著;用绵羊冻精进行体外受精,受精前除去大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞卵裂率高于保留大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞。     

血清和促性腺激素对山羊卵母细胞核体外成熟的影响

试验研究了清和促性腺激素对山羊卵丘扩展和卵母细胞核成熟的,卵母细胞与卵丘扩展的关系以及卵丘扩展与卵母细胞核成熟的关系。结果表明：（1）培养24h，添加PMSG组卵母细胞核成熟率显著高于不加激素组（P＜0．05），而培养到27h，2者成熟率之间差异变得不显著，说明添加PMSG卵母细胞核的最终成熟率没有明显影响，但加速了卵母细胞核的成熟进程；（2）M199＋BSA培养27h，卵母细胞核成熟率显著高于培养24h，而M199＋FCS培养27h与培养24h的成熟差异不显著，说明添加BSA时，卵母细胞核体外成熟速度比添加FCS的慢；（3）卵丘扩展良好与扩展不好的卵母细胞核成熟率以及第1极体形态无统计学差异，说明山羊卵母细胞的核成熟可能不依赖于卵丘扩展；（4）山羊的卵丘扩展产不依赖于卵母细胞；（5）将带壁颗粒细胞与不带壁颗粒细胞的COC分开培养发现，2者卵母细胞核成熟度无明显差异，带有壁颗粒细胞的COC卵丘扩展情况明显优于一般COC。     

间隙连接对牛卵母细胞体外成熟的影响

该试验通过对牛卵母细胞不同形式的处理,讨论细胞间隙连接对于其体外成熟的影响作用.在最适于卵母细胞体外成熟的浓度(1.2 IU/mL)条件下,发现卵母--卵丘细胞之间的间隙连接对卵母细胞的成熟有着直接的影响,并且是体外成熟的一个有利条件.     

影响猪卵母细胞体外成熟的因素

就影响猪卵母细胞体外成熟的因素, 如卵巢获取、卵母细胞来源、卵丘细胞、培养时间、培养条件基础培养基、激素、血清和卵泡液等, 及其研究进展进行了综述。     

卵丘细胞与卵母细胞解离对小鼠卵子体外成熟及受精的影响

卵丘细胞与卵母细胞的解离会降低小鼠卵母细胞的成熟质量,该研究将解离所得裸卵用不同种成分明确的成熟培养液进行体外成熟、体外受精、体外发育,从而确定卵丘细胞与卵母细胞的解离对小鼠卵母细胞成熟、受精、发育的影响,并通过筛选建立起最优的试验体系,为去除卵丘细胞的卵母细胞体外成熟质量的提高及后续研究提供参考依据。结果显示,裸卵的成熟率与成熟培养液的选择密切相关,TYH组、HTF组极显著优于M199组、α-MEM组;卵丘细胞与卵母细胞的解离与否对受精率的影响是巨大的,解离后(10%～28%)与解离前(48%～76%)差异极为显著(P<0.01);卵丘细胞与卵母细胞的解离与否对发育率的影响未发现显著差别(P>0.05)。因此,卵丘细胞与卵母细胞的解离主要影响了小鼠卵母细胞的体外受精率,通过选用适当的培养液可以相对改善该情况。     

不同级别绵羊卵母细胞在春季体外培养条件下的成熟率比较

为了对在春季屠宰场所采绵羊卵母细胞的分布及不同分布的成熟率有明确的认识．2003年3月至4月共进行15次试验，收集卵母细胞1485枚。按卵母细胞外层所含卵丘细胞及完整程度分戍A、B、C、D、E5个级别。A级：卵丘细胞层完整且紧密，一般为4层以上；B级：卵丘细胞层完整，一般为1～3层；C级：有卵丘细胞包被，但不完全；D级：裸卵，但细胞质均匀，细胞形态完好；E级：退化裸卵，胞质不均匀，细胞形态消失。选择A，B，C，D级卵母细胞单独进行体外成熟培养，培养液为TCM-199 5％FCS 5μg/mL LH 5μg／mL FSH 1μg／mL β-estradiol 2％penstrep，培养奈件为5％CO2,38．5℃,饱和湿度。结果显示：A，B，C,D级的分布分别为19．8％、28．1％、19．6％和32．4％．成熟率分别为81．3％、65．3％、61．5％和17．0％。总体成熟率为52．1％,卵丘一卵母细胞复合体(COCs)的成熟率为68．9％。     

甘氨酸对猪卵母细胞体外成熟质量及卵丘细胞的影响

本实验旨在研究甘氨酸对卵丘细胞及卵母细胞体外成熟质量的影响,优化猪卵母细胞体外成熟(IVM)培养体系。在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加6 mmol/L甘氨酸,体外培养至44 h后,通过倒置显微镜测量卵丘细胞扩散直径,结合流式细胞术与qPCR检测卵丘细胞凋亡情况;进一步检测成熟卵母细胞中谷胱甘肽(GSH)、细胞成熟促进因子(MPF)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)水平及细胞成熟相关基因表达。结果表明:甘氨酸能显著提高卵丘细胞扩散直径,减少卵丘细胞的总凋亡率,并能显著提高卵丘细胞中Bcl-2的mRNA表达;甘氨酸能显著增加成熟卵母细胞中的GSH、MPF和MAPK水平以及成熟相关基因BMP15、GDF9、CyclinB1、CDK1、C-MOS的mRNA表达。综上可知,甘氨酸可提高猪卵母细胞体外成熟质量,降低卵丘细胞凋亡率。     

不同促性腺激素添加方式对猪卵母细胞生发泡染色质构型和卵母细胞成熟能力的影响

在卵母细胞体外成熟培养过程中,培养基中添加激素与否及其激素添加的先后顺序是影响猪卵母细胞核成熟和质成熟的一个重要因素.本试验将猪卵母细胞分别在FSH→不含激素、FSH→LH、FSH LH不含激素中培养48 h(培养第20～22 h后换液),并于成熟培养的第24 h(未换液)、48 h将卵母细胞进行荧光染色,观察其生发泡内染色质构型及卵母细胞核成熟情况.实验表明:(1)在IVM的前24 h,添加FSH LH组的GVIV期卵母细胞比例低于只添加FSH组,但差异不显著(8.99%比17.19%,P＞0.05);(2)在FSH存在的情况下,IVM的前期和后期添加LH能促进卵母细胞发生GVBD;(3)FSH LH培养24 h后转入不含激素培养基组,卵母细胞的核成熟比率显著高于添加FSH组和先添加FSH培养24 h后转入添加LH组(P＜0.05).     

卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及发育的影响

本实验旨在研究有无卵丘细胞对卵母细胞成熟及其胚胎发育能力的影响。实验分别设裸卵组、卵丘细胞与卵母细胞共培养组、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)组(对照组),检测猪成熟卵母细胞的存活率、极体率、孤雌激活后的卵裂率、囊胚率及各组卵母细胞的谷胱甘肽合成相关基因的表达。结果表明:COCs组卵母细胞经体外培养42 h后其存活率最高(95.76%),高于裸卵组(P<0.05)和共培养组(P>0.05);COCs组第一极体排出率为71.77%,高于共培养组和裸卵组(P<0.05);COCs组在后期发育中卵裂率与囊胚率高于共培养组和裸卵组(P<0.05),而共培养组的卵裂率及囊胚率高于裸卵组(P<0.05);与COCs组相比,裸卵组显著下调了GCLM、GCLC的表达(P<0.05),共培养组中GCLM的表达与COCs组无显著差异。研究结果显示,卵丘细胞对卵母细胞的成熟及发育均有显著影响,在卵母细胞成熟过程中,卵母细胞与卵丘细胞的缝隙连接受损会对卵母细胞的成熟效率产生影响,并且在卵母细胞后期发育中,缝隙连接的完整性与否会影响后期发育能力,并可推论出随着卵丘细胞的减少和缝隙连接的破坏,会造成谷胱甘肽合成基因表达降低,从而影响卵母细胞内的谷胱甘肽合成。     

山羊GDF9基因在卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的表达

本研究采用实时荧光定量PCR技术,从mRNA水平探讨了山羊卵丘卵母细胞复合体体外成熟(IVM)过程中(0、6、12、18、24和27h)GDF9基因的相对表达变化,分析其与卵丘细胞扩散之间的关系。结果表明,GDF9 mRNA在山羊卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中均有表达,且在成熟培养初期表达量较低,其表达峰值出现在IVM12h,与卵丘细胞开始扩散的时间一致,之后又有所下降。由此推测,GDF9基因在山羊卵丘扩散和卵母细胞体外成熟过程中起着重要的作用。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展

论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精的最新研究进展，包括卵丘母细胞复合体、卵母细胞的体内、体外成熟、以及体内、体外的异常成熟和卵母细胞的体外成熟方法，无蛋白质、无血清系统的限定性培养液的研究进展，卵母细胞全外成熟与标志的某些理论上的突破性；体外受精中精子供体的选择、精子活力和正常形态的选择冷冻解冻精液的体外获能、精了的体外受精力，以及体外的异常受精，还论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术在家畜育种     

激素对卵母细胞体外成熟的影响

激素对卵母细胞体外成熟的影响赵伟黄夺先（江苏省农科院牧医所２１００１４）近年来，随着商业化胚胎移植的发展，卵母细胞体外成熟和体外受精作为胚胎来源的主要途径已受到关注，而直接影响胚胎数量和质量的卵母细胞体外成熟显得尤为重要。影响卵母细胞体外成熟的因素很...     

新鲜和冷冻猪卵子体外成熟培养对纤溶酶原激活物存在的影响

对体外成熟培养不同时间段猪的新鲜和冷冻的卵子中是否能够释放纤溶酶原激活物(PAs)的情况进行了研究。被卵丘细胞包裹的卵子取自于囊状卵泡,用NUSU-23培养液进行体外培养。OPS冷冻法冷冻卵子。在成熟培养液的卵丘细胞通过用细管不断地吸吐的方法去除。用SDS和酶谱法对猪的卵丘卵母细胞和裸卵里的纤溶酶原激活物进行密度测定。结果显示:在猪新鲜的卵丘卵母细胞中能够检测出Upa、tPA和tPA-PAI。体外培养24h后,在裸卵中也可以检测出uPA的活性;体外成熟培养48h后,在卵丘卵母细胞中能够检测出tPA和tPA-PAI,但在裸卵中没有检测出PAs。在所有冷冻组的试验中,没有检测出PAs活性。