巴戟天胚乳诱导愈伤组织及三倍体再生

目的:利用巴戟天种子内胚乳为外植体进行离体培养获得三倍体。方法:选取未成熟巴戟天种子内胚乳,置于不同培养基上诱导愈伤组织和分化再生植株,并对植株倍性进行根尖染色体鉴定。结果:在MS+2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)2.0 mg/L+6-BA(6-苄基嘌呤)1.0 mg/L培养基上诱导获得愈伤组织,诱导频率达58.9%。愈伤组织在MS+6-BA1.0~2.0 mg/L+IBA 0.1~0.5 mg/L分化培养基上分化出不定芽。不定芽在1/2 MS+IBA 0.5 mg/L上诱导生根,生根率100%。再生植株根尖细胞染色体数目为2 n=3 x=33。结论:利用巴戟天胚乳培养获得三倍体是创造多倍体新种质的有效途径。     

二乔刺槐愈伤组织诱导及植株再生研究

以二乔刺槐的幼嫩茎段为外植体进行愈伤组织诱导及植株再生研究。结果表明：二乔刺槐茎段诱导愈伤组织的最适培养基为MS+IBA0.2mg/L+BA3.0mg/L,愈伤组织芽诱导的最适培养基为MS+IBA 0.1 mg/L+BA 5.0 mg/L,根诱导培养基为1/2MS+ IBA 0.4mg/L。     

百脉根离体再生体系的优化

本研究以百脉根叶片、叶柄、茎段、花柄和根组织为外植体,比较了它们在不同激素配比培养基中的愈伤组织、不定芽及不定根的分化情况,优化并建立百脉根组织培养再生体系。研究结果显示:除根外,其它组织均可通过组织培养获得再生植株;外植体类型是影响愈伤组织、不定芽及不定根诱导的主要因素,叶片外植体的诱导效果最好。优化的百脉根组织培养再生体系为:使用叶片外植体,愈伤组织诱导培养基为MS+3.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA、芽分化培养基为MS+0.3 mg/L KT、生根培养基为1/2 MS+0.4 mg/L IBA。通过该体系60~75 d可获得百脉根再生植株,约为无性繁殖周期的1/3~1/2。     

白魔芋快繁体系研究

以优良白魔芋新品种——大青秆不同组织为外植体,进行愈伤组织的诱导和植株再生,试验结果表明：以叶柄为外植体,污染率低,愈伤诱导率达85.71%,继代培养中以MS+BA2mg/L+NAA0.01mg/L作为芽分化增殖的最佳培养基,将芽转接到MS+NAA0.5mg/L生根培养基上诱导生根,生根率达100%。     

灵发素(LFS)直接诱导建成巴西人参再生植株的研究

目的:建立简单高效生产巴西人参再生植株的技术。方法:以单节茎段作外植体,MS固体培养基为基本培养基,分别添加LFS 0.1～1.0 mg/L,以添加常用浓度的BA和NAA作对照。结果:(1)MS+LFS 0.1～1.0 mg/L均可迅速诱导外植体腋芽萌发和不定根发生,直接建成根、苗齐全的再生植株。(2)MS+LFS 0.3 mg/L效果最好,培养15 d外植体发芽率与发根率皆达100%。用该培养基继代培养20 d,增殖倍数达17.8,相当对照的2～3倍,几乎无愈伤组织。这些再生植株可继续扩繁,亦可直接出瓶移栽。(3)MS+BA和MS+BA+NAA常用培养基无论是对外植体诱导培养,还是继代培养,都只能得到无根苗,并形成大量愈伤组织,必须增加"生根"程序诱导生根才能移栽。结论:MS+LFS 0.1～1.0 mg/L的单一培养基都可以直接诱导并建成完整的巴西人参再生植株,显著简化培养基的配制和再生植株的生产程序,以MS+LFS 0.3 mg/L生产效率最高。     

章丘大葱子叶再生体系建立及再生株倍性鉴定

以章丘大葱子叶为材料,研究了不同激素配比对愈伤组织诱导和继代、芽分化、芽点的伸长及根诱导的影响,并对获得的再生植株进行了鉴定。结果表明,诱导章丘大葱子叶产生愈伤组织、愈伤组织的继代培养、愈伤组织芽分化、芽点的伸长及诱导生根的最佳培养基及激素配比分别为：MS+2,4-D 2.0mg/L+KT 0.5mg/L、MS＋2,4-D 2.5mg/L＋KT 0.5mg/L、MS+2,4-D 0+KT 1.0mg/L、MS+KT 0.5mg/L和MS基本培养基;试管苗经驯化移栽后,共有22株成活,成活率为92%,对成活的再生植株进行形态学、叶片气孔及根尖染色体鉴定表明,共有3株发生变异,其中2株为外部形态上的变异,而另一株为染色体的加倍变异。     

甘草愈伤组织再分化的研究

以多年野生乌拉尔甘草的不同营养器官为外植体进行愈伤组织诱导,试验结果表明:适宜的愈伤组织诱导培养基为:MS+BA2mg/L+2,4D0·5mg/L;分化培养基为:MS+BA2mg/L+NAA1·0mg/L;以甘草芽做外植体愈伤组织分化率达到100%。利用愈伤组织进行再分化是较为理想的增殖途径,其繁殖系数达20~40倍。比芽的增殖系数高2·5倍。     

香茶藨子茎尖愈伤组织诱导及植株再生

试验以香茶藨子茎尖为外植体,建立了愈伤组织诱导及植株再生体系。结果表明,诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.8 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,诱导率为87.0%,愈伤呈紧密块状,生长良好;愈伤组织分化最佳培养基为MS+KT 1.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L,愈伤分化率为55.53%;以1/2MS基本培养基添加IBA 0.5 mg/L,最利于生根培养。该体系的建立为香茶藨子规模化生产及遗传转化提供了技术平台。     

冬小麦遗传再生体系及根癌农杆菌介导的转化研究

摘要:以冬小麦品种临优145的幼胚为外植体,消毒后用解剖刀挑取幼胚,盾片朝上接种于MS+2,4-D 2 mg/L+肌醇100 mg/L＋MES 400 mg/L＋CH 100 mg/L[7]＋40g/L麦芽糖＋8g/L琼脂的培养基中诱导愈伤组织, 每两周继代一次,将诱导出的淡黄色、颗粒状Ⅱ型胚性愈伤组织接种于分化培养基（MS+ZT 1 mg/L+IAA 1mg/L+ MES 400 mg/L＋CH 100 mg/L+麦芽糖40g/L+gelrite 2.6g/L,PH5.8）上培养2－3周,然后转接到再生培养基(1/10MS+NAA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+蔗糖30g/L+ gelrite 2.6g/L,PH5.8)中进行再生成苗。接种1229块幼胚,得到987块愈伤组织, Hyg抗性愈伤组织123块,抗性再生植株34株。在建立了再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入幼胚愈伤组织,抗性植株的PCR检测呈阳性。X－gluc染色表明, 少部分愈伤组织出现肉眼可见的蓝色晕斑,说明GUS基因已经在小麦幼胚愈伤组织中表达。     

连香树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生

本试验以连香树授粉120 d后未成熟种子子叶胚为外植体,开展胚性愈伤诱导增殖和悬浮培养体系的研究,初步建立了连香树胚性细胞悬浮系与植株再生体系。将连香树未成熟子叶胚接种在添加0.5 mg/L6-BA+1.0 mg/L NAA+1.0 g/L AC的1/2 MS基本培养基上,进行胚性愈伤组织诱导,获得的愈伤组织在0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 g/L AC的1/2 MS固体培养基上进一步增殖培养。将得到的胚性愈伤组织置于添加5%聚乙二醇6000的1/2 MS的悬浮培养液中进行振荡培养,建立起细胞均一、增殖较快、稳定性较强的细胞悬浮系;将悬浮培养获得的胚性材料接种到添加5%香蕉汁的0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 g/L AC的MS固体培养基中进行培养,可分化出的子叶期体胚,将获得的子叶胚转接到添加1.0 mg/L IBA的WPM固体培养基中,体胚萌发再生成植株。     

大叶黄杨幼茎愈伤组织诱导的研究初报

以大叶黄杨的幼茎段为外植体,在添加BA和NAA、IBA、2,4-D不同激素组合的MS培养基上培养,对其愈伤组织进行诱导试验。结果表明：①生长素对愈伤组织诱导的效应为2,4-D >NAA>IBA;②在不同激素组合培养基上均可诱导出愈伤组织,其中MS+BA1.0~2.0 mg/L+NAA 1.0~1.5 mg/L、MS+BA1.5~2.0 mg/L+IBA1.0~1.5 mg/L、MS+BA0.5~1.0 mg/L+2,4-D 0.5~1.5 mg/L等对愈伤组织的诱导效果最好,其诱导率分别为74.3%、65.3%、81.1%。因此,通过科学配制不同激素组合的MS培养基,就能有效地诱导出大叶黄杨幼茎的愈伤组织。     

玉米自交系高频率再生因素研究

以玉米自交系幼胚为外植体，就不同基因型、不同激素对其愈伤组织诱导和植株再生的影响进行了研究，并建立了玉米自交系高频率再生系统。方差分析表明：玉米自交系的高频率再生受基因型、激素以及二者间的互作影响。其中基因型是最重要的影响因素。同时，再生植株的分化还受到诱愈培养基、分化培养基、诱愈培养基与分化培养基     

金边阔叶麦冬的组培快繁技术研究

旨在研究金边阔叶麦冬的组织培养与快速繁殖技术。分析了植物生长调节剂对金边阔叶麦冬地下茎芽和叶片愈伤组织诱导、芽分化及试管苗生根的影响。结果表明:MS+BA 1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L为地下茎芽诱导愈伤组织最佳的培养基,诱导率达100%;MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L为叶片诱导愈伤组织较为理想的培养基,诱导率为52%。地下茎芽形成的愈伤组织其芽诱导率、芽增殖倍数明显高于叶片,诱导率高者达100%,增殖倍数高者为4.6。金边阔叶麦冬试管苗生根的较为合适的培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg/L和1/2MS+IAA 0.25 mg/L,生根率达100%,平均生根数量在5根以上。试管苗移栽苗成活率达90%以上。     

降香黄檀愈伤组织培养与植株再生研究

为了实现降香黄檀工厂化快速繁殖和扩大栽培,并为降香黄檀抗寒基因导入打下一定的基础,以降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖为外植体,MS为基本培养基,对各器官愈伤组织诱导与分化的最适培养基成分进行了研究。结果表明,可从降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖成功地进行愈伤组织培养和植株再生。茎段、叶片、根尖诱导愈伤组织的最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L、1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L和1/4MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L;茎段、叶片、根尖的愈伤组织诱导丛生芽最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 4.0 mg/L、1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L和1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L;茎段、叶片、根尖来源的单芽,其最佳生根培养基分别为MS+NAA 1.5 mg/L、MS+NAA 1.0 mg/L和MS+NAA 2.0 mg/L。比较茎段、叶片与根尖的愈伤组织诱导率、丛生芽诱导率和单芽生根率,得出以无菌实生苗根尖作为外植体是降香黄檀愈伤组织培养和植株再生的最佳选择。     

In vitro tetraploid induction via colchicine treatment from diploid somatic embryos in grapevine (Vitis vinifera L.)

A protocol for in vitro induction of tetraploids via colchicine-treated somatic embryos from immature zygotic embryos of diploid grapevine (Vitis vinifera L.) is reported. Embryogenic callus was initiated from immature zygotic embryos cultured on Nitsch and Nitsch (NN) medium supplemented with 1.0 mg/l 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). The callus was transferred to NN medium containing 1.0 mg/l α-naphthalene acetic acid (NAA) and 0.5 mg/l benzyladenine (BA) to establish somatic embryogenesis. The vigorously growing globular embryos were selected and treated by 0, 10 or 20 mg/l colchicine for 1, 2 or 3 days, and then immediately transferred to NN medium supplemented with 0.03 mg/l NAA and 0.5 mg/l BA, for somatic embryo conversion and plant regeneration. The number of surviving embryos and regenerated plantlets following colchicine treatment decreased with increasing colchicine concentration and treatment time. Among 29 randomly investigated plantlets regenerated from colchicine-treated somatic embryos, five solid tetraploids (2n = 4× = 76) were identified by chromosome counting analysis; all others were diploid (2n = 2× = 38). Ploidy level of plant regenerated was also determined from leaves using flow cytometry. No chimeras with both 2C and 4C nuclei was produced from colchicine-treated somatic embryos. Significant differences in leaf stomata parameters were observed between diploid and induced tetraploid plantlets.     

濒危植物太行菊组织培养及快繁技术研究

研究旨在建立一种珍惜濒危植物太行菊的高效再生方法,为工厂化生产提供理论基础。以MS为基本培养基,用不同激素组合对太行菊无菌苗的叶片和茎段离体培养及植株再生、炼苗移栽等过程进行研究。结果表明,太行菊的叶片分化不定芽比茎段难,茎段最适合作为外植体进行愈伤组织的诱导及不定芽分化;筛选出了最佳培养基MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,在此培养基中,茎段外植体可一步成苗,不需转换培养基即可完成愈伤组织的诱导分化及不定芽增殖过程;最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L;再生苗在花园土中移栽成活率可达80%。研究简化了培养流程,建立了太行菊一步式高效再生体系。     

钩藤愈伤组织的诱导与植株再生

为了建立钩藤愈伤组织诱导与植株再生体系。以药用植物钩藤[Uncaria rhynchophyllai (Mip.)Jack]嫩茎、嫩枝、嫩叶为外植体,通过优化激素组合,进行愈伤组织诱导和分化、幼苗生根和移栽,初步建立了钩藤愈伤组织诱导和植株再生体系。结果表明,以钩藤嫩枝作为外植体出愈情况较好,污染率低,继代后愈伤组织生长快。培养基成分为WPM+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA较适宜愈伤组织的诱导和增殖,诱导率可达83.3%。培养基成分为WPM+2.0 mg/L KT+0.2 mg/L NAA能分化出芽,愈伤组织率分化率达到82.3%;而1/2WPM+1.0 mg/L IBA适宜于试管苗生根,生根率达92.0%。以钩藤嫩枝为外植体诱导获得了质量良好的愈伤组织,并成功再生成植株,结果的获得可为解决钩藤人工栽培过程的资源和品质问题以及进行细胞培养和分子遗传改良奠定基础。     

非洲紫罗兰叶片外植体再生技术体系的建立

以三种叶型的非洲紫罗兰（Saintpaulia ionantha）叶片作为外植体材料,研究了叶片外植体再生技术体系。结果表明：非洲紫罗兰叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L和MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5mg/L,培养4周左右,诱导率达100%,绝大多数愈伤组织上都有芽的分化。采用培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L继代一次后,每个愈伤组织上分化产生的芽可达30余个,3个品种的愈伤组织诱导、成芽能力差异不大。非洲紫罗兰品种A和C适宜的生根培养基为1/2MS+0.2mg?L－1NAA,品种B适宜的生根培养基为1/2MS+0.5mg?L－1IBA。生根苗转入纯蛭石栽培时,用1/4MS大量与微量元素进行叶片追肥,成活率90%以上。移栽至腐殖土栽培成活率95%以上,3个月栽培后栽培苗成花。本研究为非洲紫罗兰试管苗的工厂化生产提供了科学依据。