大西洋牙鲆雄鱼与漠斑牙鲆雌鱼杂交的初步研究

从山东引进全长3-5cm的美国大西洋牙鲆和漠斑牙鲆幼鱼到宁德市飞鸾镇海鑫育苗场,经2年6个月养殖后,从养殖群体中挑选出大西洋牙鲆雄鱼为父本,漠斑牙鲆雌鱼2为母本,在生殖季节通过埋植激素和人工调控环境条件催熟亲鱼,采用人工受精方法,获得杂交受精卵478．6g,受精率为62．9％,孵化率为75．3％,获得初孵仔鱼36万尾。经过65d的培育,育出平均全长4．20cm的杂交鱼苗22万尾,育苗成活率61．1％。鱼苗生长迅速,初步表现出杂交子代的优势性状。     

温度、盐度对褐牙鲆（♀）×犬齿牙鲆（♂）杂交子一代胚胎发育和仔鱼存活的影响

探讨了温度、盐度对褐牙鲆（♀）×犬齿牙鲆（♂）杂交子一代（杂交F1）胚胎和初孵仔鱼发育的影响。结果表明，杂交F1受精卵孵化适宜温度范围和最适温度分别为15～21℃和18℃，在适宜温度范围内胚胎发育时间随温度的升高而缩短，二者符合乘幂函数关系式N=115．99T^-0.768.8（R^2=0．9769）。胚胎发育的生物学零度和有效积温分别是7．54℃和540．1℃·h，积算温度（A）与试验水温间呈乘幂函数相关，表达式：A=1328．1T^-0.3149。（R^2=0．9624）。胚胎发育的最低盐度界限为10，孵化的适宜盐度范围和最适盐度范围分别为10～45、25～35；初孵仔鱼生存发育的适宜盐度范围、最适盐唐范围分别为10～40和10～20。     

温度、盐度对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交子一代胚胎发育和仔鱼存活的影响

探讨了温度、盐度对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交子一代(杂交F1)胚胎和初孵仔鱼发育的影响。结果表明,杂交F1受精卵孵化适宜温度范围和最适温度分别为15～21℃和18℃,在适宜温度范围内胚胎发育时间随温度的升高而缩短,二者符合乘幂函数关系式N=115.99T-0.7668(R2=0.9769)。胚胎发育的生物学零度和有效积温分别是7.54℃和540.1℃.h,积算温度(A)与试验水温间呈乘幂函数相关,表达式:A=1328.1T-0.3149(R2=0.9624)。胚胎发育的最低盐度界限为10,孵化的适宜盐度范围和最适盐度范围分别为10～45、25～35;初孵仔鱼生存发育的适宜盐度范围、最适盐度范围分别为10～40和10～20。     

铅污染对牙鲆GSH-PX酶活性的影响

将牙鲆置于浓度为0.5mg/L的Pb溶液中18d,测定其鳃、肌肉、全部内脏中谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-PX)的活性。结果表明,最初8d,各组织的GSH-PX的酶活性表现为抑制,随后各组织GSH-PX的酶活性表现为诱导;10d时,诱导幅度最大,而后表现为抑制。紧接着放入清洁海水,各组织的酶活性又恢复到对照组的水平。结果提示,对于低浓度铅的长期暴露,GSH-PX能明显指示牙鲆受海洋铅的早期污染。     

鳗弧菌感染牙鲆药物代谢动力学模型的初步建立

用鳗弧菌腹腔注射牙鲆进行人工感染实验,对感染牙鲆进行血液生理生化指标的测定,并观察描述患病牙鲆的外观症状及有关组织器官的病理变化,以高效液相色谱(HPLC)法为定量手段研究达氟沙星在健康和感染牙鲆体内的药动学特征。结果表明,(1)每公斤体重腹腔注射鳗弧菌2.0×107~3.0×107cells可复制出疾病模型;(2)与健康鱼相比,患病鱼的红细胞数、血红蛋白、血小板数、Cl-、Na 等显著下降,而白细胞数、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌苷(Cr)、K 极显著增加,说明经鳗弧菌感染后,牙鲆在药物吸收、代谢等方面的生理功能受到严重损害;(3)患病鱼的肝、肾、脾等组织细胞均发生实质性病变,而对照组外观正常,组织器官未见病理变化;(4)达氟沙星在感染牙鲆体内的吸收、分布和消除均减慢,生物利用度降低。鳗弧菌感染必将影响药物在体内的分布和血浆蛋白结合率,改变药物及其代谢物从体内消除的速度和程度,进而影响药物的疗效。该模型复制的方法可靠且具有可重复性,它对探讨药物在患病鱼体内的动力学规律,揭示疾病对药动学的影响机理和指导临床合理用药等具有理论和实践意义。     

褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交子代及亲本群体形态和外周血红细胞DNA含量

2006～2007年进行了犬齿牙鲆Paralichthys dentatus(♂)×褐牙鲆P.olivaceus(♀)杂交,获得杂交子代苗种养殖至全长27～33cm时随机取样,测定形态学特征。与父、母本相同规格成鱼相比,杂交子代的有眼侧体色和花纹与父、母本都存在较大差异,是区分杂交子代最突出的特征。杂交子代的多数可比、可量性状同父、母本相近,但在体长/总高比等方面表现出较明显的杂交优势。聚类分析表明,杂交子代的表型与犬齿牙鲆更为接近。尾静脉采血,使用流式细胞仪检测杂交子代和父、母本外周血红细胞的DNA含量,发现杂交子代、犬齿牙鲆和褐牙鲆的DNA含量分别为1.51±0.02、1.50±0.04、1.43±0.16pg,杂交子代的DNA含量与犬齿牙鲆接近,较褐牙鲆略高,表明杂交子代为二倍体。     

漠斑牙鲆染色体组型研究

以体长6cm左右的漠斑牙鲆幼鱼为材料,采用秋水仙素浸泡的方法,取鳃和鳍经低渗处理,空气干燥制片法制作染色体标本,最后经Giemsa染液染色进行核型分析。结果表明,漠斑牙鲆的染色体核型为2n=48,48t,染色体臂数为NF=48,未发现有多倍体的现象,也未发现性染色体和随体。     

杂交鲆(牙鲆♀×夏鲆♂)网箱养殖技术研究

引进杂交鲆苗种在宁德市三都海区,经过385d的网箱养殖,达到商品规格,平均全长36.3cm,平均体重606g,成活率达71%,饵料系数为8.3.研究表明,杂交鲆在生长速度、抗逆性、适应性等方面有较明显的优越性,能适应闽东海域夏季高温和冬季持续的低温.以Keys氏公式W=aLb,拟合养殖13个月杂交鲆的平均全长L(cm)...     

牙鲆室内人工养殖试验

报道了室内养殖牙鲆的试验结果,１９９２年－１９９５年进行的小规模试验。将受精卵培育至鱼苗、成鱼直至成熟亲鱼。在水温为２－２５℃范围内,经过３６个月将全长为５．３ｃｍ鱼苗培育至全长为４６．８ｃｍ、体重为１７８０ｇ的商品鱼,成活率为５０．６％。１９９７年－１９９８年进行的生产性养殖试验,在水温为１０－３３℃范围内。经过１０个月将全长为５．４ｃｍ鱼苗养至全长为３３．４ｃｍ、体篝为３５６ｇ的商品鱼、成活率     

漠斑牙鲆引进群体子一代遗传多样性的RAPD分析

运用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对引进群体漠斑牙鲆Paralichthys lethostigma 子一代48个个体的遗传多样性进行了分析,筛选的40个10bp的随机引物中,25个引物产生了稳定性好,可重复性强的谱带。共检测到154个位点,其中多态位点有122个,多态位点的比例为79．22％,有效等位基因数为1．5629±0．3631,Nei＇s基因多样性指数为0．3184±0．1843,Shannon信息指数是0．4651±0．2574。结果表明,漠斑牙鲆处于较高的遗传多样性水平。     

牙鲆的胚胎发育

在牙鲆胚胎玻璃化冷冻中,为了准确选择胚胎的冷冻时期,掌握胚胎发育进程,同时为牙鲆苗种培育提供一定的依据,对海水工厂化养殖牙鲆的胚胎发育进行了研究。牙鲆受精卵培养在14-16℃、盐度29．9的海水中,利用Olympus显微镜对牙鲆胚胎发育过程连续观察,对各个胚胎时期的发育时间进行了记录,并对每一时期的特征用Olympus照像机进行了拍摄。实验记录了从受精卵到出膜后5d的29个具体发育时期的特征和发育时间,拍摄了30张具有代表性的胚胎和鱼苗图片,将牙鲆胚胎发育划分为卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、肌节期、尾芽期、心跳期、胚体转动期、出膜前期、出膜期10个连续的典型时期。在此培养条件下牙鲆胚胎历时93h完成整个胚胎发育,孵化出膜,再经96h的胚后发育卵黄囊完全吸收,之后进入变态期,向成鱼转化。     

牙鲆属主要经济鱼类的生物学及养殖研究概况

综合介绍了世界牙鲆属鱼类的主要特征及种类,主要介绍了养殖品种褐牙鲆、犬齿牙鲆、漠斑牙鲆以及实验研究品种北美牙鲆、多耙牙鲆、小眼牙鲆、黑斑牙鲆、巴南牙鲆和巴塔戈尼牙鲆的生物学及养殖研究概况。简要介绍了热带牙鲆、四斑牙鲆、河口牙鲆和伍氏牙鲆等生物学有关知识。     

褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆( ♂)杂交子一代胚胎发育及仔稚鱼形态学观察

杂交是目前水产育种中应用最为广泛、最有成效的育种途径,为了选育一个能够促进中国海水鱼类养殖业发展,改善目前养殖褐牙鲆发病严重的现状的牙鲆类养殖新品种,对褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)(♀)×犬齿牙鲆(P.dentatus)(♂)的杂交进行了研究。在Nikon MS800解剖镜下对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)人工杂交子一代的胚胎及胚后发育进行观察,并使用Nikon数码相机拍摄其发育特征,描述了各发育时期的发育时序和形态特征。杂交子一代胚胎发育可分为卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官发生期、尾芽期、肌肉效应期、脱膜孵化期共9个时期,除克氏泡出现时期以及胚体开始扭动时期具有相对特异性外,胚胎发育过程与褐牙鲆相比无显著差异。在水温(16.5±0.5)℃,盐度32~33的条件下,受精卵历时67 h完成孵化。(19±0.5)℃水温下,仔鱼3 d以前营内源性营养(卵黄囊仔鱼),3 d开口摄食营外源性营养(前弯曲期仔鱼),20 d左右进入变态期(弯曲期仔鱼),40 d后基本完成变态进入稚鱼阶段,生活方式由浮游转为底栖生活,50 d左右全身被鳞。同时观察了自胚胎发育时期至幼鱼期体表色素的分布及形态变化过程,描述了仔鱼变态期冠状鳍条、眼位置和尾部的发育、变化过程。早期生活史无鳔器官发生。     

HPLC法测定牙鲆肌肉中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星

利用高效液相色谱-荧光检测器分析了牙鲆肌肉中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的含量。样品前处理方法为:以磷酸盐缓冲液作为提取液,样品经均质、离心后,用正己烷除去脂肪,再用ODS(C18)固相萃取柱净化,洗脱液蒸发浓缩后,乙腈溶解残渣。其色谱条件为:色谱柱XDB-C18柱(250mm×4.6mm);流动相0.01mol/L四丁基溴化铵(pH3.0)∶乙腈=94∶6(v/v);流速1.5ml/min;进样量10μl;柱温40℃;荧光检测器激发波长280nm、发射波长450nm。结果表明,在牙鲆肌肉中添加50、100和200μg/kg3个水平的恩诺沙星和环丙沙星混合物标准后,其回收率均大于80%,相对标准偏差小于10%。恩诺沙星与环丙沙星检出限均为10μg/kg。     

牙鲆的养殖与饲料

介绍了牙鲆亲鱼、苗种及养成各阶段的养殖方式、养殖条件发展情况，讨论了微颗粒饲料、硬颗粒饲料、膨化颗粒饲料、软湿颗粒饲料、鲜杂鱼生鲜料、粉末饲料等多种饲料在牙鲆的全养殖过程的应用情况，总结了牙鲆配合饲料及营养研究的进展情况，列出了行业标准中的牙鲆饲料的营养要求。     

牙鲆人工育苗试验

2000年12月20日至2001年2月15日在日本静冈栽培中心进行牙鲆人工育苗试验。4.3万粒受精卵经50多h后，共计孵出仔鱼2.9万尾。在水温17-18℃，pH8.0-8.2，海水比重1.021的条件下，经55d培育，共育出平均全长25mm的鱼苗1.6万尾，育苗成活率的55%。     

牙鲆脑垂体早期发育的组织学观察

垂体作为鱼类最重要的内分泌器官之一,在生长、发育、生殖以及其他一些内分泌相关生理活动中起重要作用。作者采用组织学方法观察了牙鲆的脑垂体发生,对不同发育时期的腺垂体细胞进行了初步鉴定。结果表明,孵化后1d仔鱼的间脑下方可见一实心细胞团,于孵化后3d迁移至间脑后方的漏斗体下,与来自漏斗体的神经内分泌细胞及其神经纤维结合共同形成脑垂体,前者形成腺垂体,后者则主要形成神经垂体。孵化后8d腺垂体分为中间部(Pars intermedia,PI)和外侧部(Pars distalis,PD)两部分。孵化后14d腺垂体分化为前外侧部(Rostral pars distalis,RPD)、中外侧部(Proximal pars distalis,PPD)和PI共3部分,为"前后型"脑垂体。稚鱼变态期间及变态完成后的幼鱼,各部分从"前后型"排列开始向"背腹型"排列转变。孵化后14d的牙鲆仔鱼中,PPD细胞多呈强嗜酸性,至变态完成后一直是PPD的主要细胞;PI靠近神经纤维的细胞呈强嗜碱性。孵化后42d的牙鲆幼鱼RPD中,与神经垂体相邻的少量细胞呈嗜碱性,而其下方细胞则呈嗜酸性。根据成体牙鲆激素分泌细胞的染色特征对上述各细胞类型进行了推测。     

T型标志牌标记牙鲆苗种

摘要以牙鲆为实验对象,研究了4种不同规格的T型标志牌（T-A、T-B、T-C和T-D）对全长5、7、9和11cm苗种的标记效果,确立了适宜标志的牙鲆苗种规格,筛选了适宜于不同规格牙鲆苗种标记用的T型标志牌。全长5cm的苗种不宜使用这4种规格的标志牌标记;T-A和T-B标志牌适宜于全长7～11cm的牙鲆苗种,标记后脱牌率为2％～8％,存活率为90％～100％;T-C标志牌适宜于标记全长11cm的苗种,成活率为94％,脱牌率为5％,对全长7～9cm苗种的标志效果不佳,成活率为85％～87％,脱牌率为9％～11％;T-D标志牌不适宜于全长11cm以下牙鲆苗种的标记,脱牌率为11％～26％,成活率为51％～89％。2011～2012年,利用T-B标志牌在北戴河开展了牙鲆大规模标志放流试验,取得了良好的标记效果。     

我国漠斑牙鲆养殖研究现状及展望

漠斑牙鲆Paralichthys lethostigma是一种广温广盐的海水鱼,可以在淡水中进行养殖。文章综述了我国自2001年引进漠斑牙鲆以来的研究现状,对比了国内外的研究方向,对漠斑牙鲆的广温广盐特性进行重点阐述,指出今后推广养殖过程中需要注意的问题,提出了一些参考建议,并对其在我国的养殖前景进行了展望。     

漠斑牙鲆引进种群同工酶的遗传多态性分析

采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直板电泳技术对引进种漠斑牙鲆（Paralichthys lethostigma）子一代的同工酶进行检测。分析了48个样本的15种同工酶在漠斑牙鲆肌肉和肝脏两种组织或器官中的表达情况，以期为其种质资源的保护和开发以及遗传育种方面的研究提供基础资料。15种同工酶共记录了33个基因座位，其中Me-1、Adh—1、Sdh—1、Sdh-2、Gdh—1、G6pd-1、Pgm—I1ldh—1、Cat—1、Pod—1和Pgi—1共11个座位呈多态，多态座位百分数是33．3％。平均每个座位的等位基因有效数值Ae为1．2196，预期杂合度He为0．1219，实际杂合度Ho为0．1547。同时还分析了漠斑牙鲆各个多态座位的Hardy-Weinberg遗传偏离指数d。这些数据说明，漠斑牙鲆群体拥有较高的遗传变异水平，还处于种质资源维持较好的状态，有利于对其资源进行开发以及对其遗传育种工作的展开。