甘油浓度和平衡时间对藏獒精液冷冻效果的影响

以藏獒精液为研究对象,观察甘油浓度和平衡时间对对藏獒精液冷冻-解冻后品质的影响.试验表明,甘油浓度为2%和3%时,冷冻-解冻后精子在活力、精子畸形率和顶体完整率方面都显著优于甘油浓度1%和4%(P＜0.05),但2%和3%浓度之间无显著差异(P＞0.05);精子于甘油中经不同时间平衡后,冷冻-解冻后精子活力和顶体完整率以15 min和30 min显著优于其他平衡时间(P＜0.05),但2者之间无显著差异(P＞0.05).精液在甘油浓度为3%、甘油平衡时间为15 min时冷冻效果较好.     

除去精浆、添加维生素E及水浴平衡对莎能奶山羊精液冷冻效果的影响

主要探讨精液离心、添加VE及平衡方法对山羊细管冻精冷冻-解冻后活力、顶体完整率等的影响,为提高山羊精液冷冻保存效果提供依据.试验1:将鲜精稀释后分为3组,第1组为稀释精液1 000 r/min离心6 min,去掉一半的上清液;第2组用相同的方法反复离心3次,完全去掉精浆;第3组不离心,做为对照.试验2:在稀释液中添加15 g/L VE,以不添加组作为对照.试验3:采用纱布包裹和水浴平衡两种方法.试验结果表明,离心去掉部分精浆组和离心去精浆组精子冷冻-解冻后的活力比不离心组高,差异显著(P＜0.05).精子顶体完整率和畸形率有所下降,但与对照组相比较差异不显著(P＞0.05).离心去掉部分精浆组和离心完全去精浆组相比,精子冷冻一解冻后的活力、顶体完整率和畸形率差异不显著(P＞0.05).冷冻稀释液中添加VE组的顶体完整率显著提高(P＜0.05),畸形率变化与对照组无差异(P＞0.05),精子活力提高效果也不明显(P＞0.05).精液冷冻前平衡方法以水浴法为好,与纱布包裹平衡组相比,水浴平衡组的活力和顶体完整率高(P＜0.05),精子畸形率较低(P＜0.05).可见,精液离心后去掉适量精浆可显著提高冷冻后精子的活力;添加VE可显著提高精液冷冻后精子的顶体完整率;与纱布包裹平衡法相比,水浴平衡法可显著提高精液冷冻后精子的品质.     

抗冻剂对鸡精液冷冻效果的影响

通过添加不同浓度的甘油、乙二醇、二甲基亚砜(DMSO)和N,N-二甲基乙酰胺(DMA)作为抗冻剂,研究单一抗冻剂和联合抗冻剂对鸡精液冷冻的影响.每个抗冻剂设置4个浓度梯度进行添加--甘油、DMSO和乙二醇为2%、4%、6%、8%;DMA为6%、8%、10%、12%,然后将冷冻效果较好的抗冻剂组合,研究联合抗冻剂对鸡精液冷冻的影响.试验结果表明,这4种抗冻剂中以浓度为6%的甘油对冷冻过程中鸡精子的保护效果最好,其冻后活力达到0.68,精子复苏率达到97.5%,极显著地高于其他各组(P<0.01);抗冻剂组合甘油+DMSO、甘油+乙二醇和甘油+DMA中,甘油+DMSO组精子的冻后活力和复苏率比其他2组略好一些,但差异不显著(P>0.05).     

N,N-二甲基甲酰胺（DMF）对猪精液冷冻效果的影响

【目的】研究N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Di methylformamide,DMF)与甘油配制的混合保护剂对猪冷冻精子的保护效果。【方法】以DMF和甘油配制成混合冷冻保护剂对猪精液进行冷冻,试验共设对照组(30mL/L甘油)、A组(10mL/L DMF+20mL/L甘油)、B组(20mL/L DMF+10mL/L甘油)、C组(30mL/L DMF)和D组(50mL/L DMF)5个处理组,以活动精子百分率、精子活率、精子直线运动速率、精子顶体完整率以及精子质膜完整率为检测指标,对猪精子冷冻效果进行评价。【结果】20mL/L DMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂对猪精子有较好的冷冻保护作用,与其他处理组相比,除精子直线运动速率和质膜完整率与10mL/L DMF+20mL/L甘油组无显著差异外,其他各项指标均优于其他组及甘油对照组。30mL/L DMF对猪精子的毒性强于同浓度甘油,但20mL/LDMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂的毒性与甘油对照组无显著差异(P>0.05)。【结论】20mL/L DMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂比单一使用甘油或DMF能起到更好的冷冻保护作用。     

山羊精液冷冻保存技术研究

[目的]探索山羊精液的冷冻方法。[方法]以甘油为冷冻保护剂,采用细管法冷冻保存山羊精液,探讨甘油浓度和添加时间、冻结方法和解冻温度对山羊精液冷冻效果的影响。[结果]在稀释液中添加6%和7%甘油的处理组中,冻后精子活率与复苏率均显著高于添加3%、5%甘油的处理组。配液时添加6%甘油的处理组中冻后精子活率与复苏率均显著低于在4℃平衡后添加的处理组。把平衡的山羊精液分别在离液氮面3 cm处熏蒸9 min和-80℃冰箱中冻结9 min,前者的精子复苏率显著低于后者。在解冻温度分别为40、45和50℃的处理组中精子冻后活率与复苏率显著高于解冻温度为55和60℃的处理组,说明解冻温度以40～50℃为宜。[结论]在山羊精液冷冻保存中,甘油的最佳添加时间为4℃平衡后冻结前。     

冷冻稀释液渗透压、抗冻剂和平衡时间对鸡颗粒冻精冻后活率的影响

4个不同渗透压水平(280、320、360、400 mOsm)的鸡精冷冻稀释液,以甘油(GL)、二甲基亚砜(DMSO)和N,N二甲基乙酰胺(DMA)分别作为抗冻剂进行了冷冻试验.结果表明,添加8%甘油、4%DMSO和11%DMA的冷冻稀释液,4个不同渗透压间冻后精子活率均有显著差异(P<0.05),而且精子活率随冷冻稀释液渗透压的升高而升高;添加5%和10%甘油的冷冻稀释液,渗透压对解冻精子活率影响不显著;在400 mOsm渗透压条件下,8%甘油组冷冻后精子活率高于其他抗冻剂组;3种抗冻剂4个渗透压水平冷冻,平衡时间长短(30 min和90 min)对解冻后精子活率没有影响.     

不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨体外受精时不同精子浓度对精子穿入成熟卵母细胞及后续发育的影响。[方法]以冷冻-解冻精子为材料,以1×106、1×107个/ml 2种精子浓度进行体外受精,研究不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响。[结果]当精子浓度为1×106、1×107个/ml时,精子穿入率分别为83.18%、88.23%,单精入卵率分别为40.55%、9.02%,多精入卵率分别为59.45%、90.98%,平均每个卵母细胞中的精子数分别为2.03、3.26个,雄原核形成率分别为84.10%、86.40%,单精入卵率、多精入卵率有显著差异(P<0.05),其他指标无显著差异(P>0.05)。[结论]该研究为应用冷冻-解冻精子建立猪卵母细胞的体外生产系统提供了依据。     

家兔精液冷冻保存的研究

以家兔为试验动物,通过精液在4℃保存时间来筛选合适的基础液,并从精液解冻后的精子活率和活力2个指标筛选出最佳的平衡时间和抗冻剂（甘油）浓度．冷冻保护液中渗透性抗冻剂（甘油）的3种浓度为3％,4％和5％．4℃平衡时间分别为2,3,4h．将3种甘油浓度的冷冻保护液与3种平衡时间相配伍,共9组进行冷冻试验,筛选出稀释液为：Tris3．03g,柠檬酸1．30g,果糖1．50g,卵黄20%,青、链霉素各1×10^5U,双蒸水100mL．冷冻后结果表明,3％的甘油浓度平衡3h,解冻后精子活力在0．3以上,达到人工授精的要求．     

主动免疫抑制素提高奶牛超数排卵胚胎产量的研究

 【目的】研究免疫抑制素提高奶牛超数排卵的效率以提高胚胎产量。【方法】免疫组首次免疫抑制素α亚基融合蛋白（1 mg?头-1）与白油佐剂混合乳液,首免后第28、56 d分别进行2次加强免疫,剂量为0.5 mg?头-1。对照组同时注射生理盐水与白油佐剂的混合乳液。在第二次加强免疫后10 d,采用FSH四日递减法进行超排处理,并根据母牛发情表现进行人工授精,试验一使用常规冷冻精液输精,试验二使用分离的雌性精子输精,输精后第7天进行冲胚。【结果】主动免疫抑制素能够有效提高血液抗抑制素抗体效价。试验一,免疫抑制素组头均获胚/卵总数为（15.8±2.8）枚,显著高于对照组（8.3±1.5）枚（P＜0.05）;头均可移植胚胎数为（9.6±3.1）枚,稍高于对照组的（5.8±1.6）枚（P＞0.05）。试验二,免疫抑制素组发情时间早于对照组(P＜0.05);输精后第7天血液孕酮浓度显著高于对照组（P＜0.05）;头均获胚胎总数和头均可移植胚胎数分别为（15.4±1.9）枚和（5.7±0.7）枚,显著高于对照组的（9.1±1.2）枚和（3.1±0.5）枚(P＜0.05);免疫组获得的一级胚胎为（3.8±1.0）枚,占总可移植胚数的58%,显著高于对照组的（0.6±0.2）枚或19.8%(P＜0.05)。【结论】主动免疫抑制素能够促进牛卵泡发育、提高超排效率和胚胎产量,在使用性控精液输精时不仅大幅提高雌性胚胎数量,同时大幅提高胚胎质量。     

稀释液中卵黄浓度对猪精液冷冻保存效果的影响

为探索卵黄在猪精液冷冻中的应用效果,筛选出猪精液冷冻稀释液中卵黄的最佳浓度,分别在猪精液冷冻稀释液中添加不同比例（20%、25%、30%）的卵黄,并以精子活率、活力、路径速率（VAP）、轨迹速率（VCL）、直线运动速率（VSL）等为指标,对猪精液稀释后、平衡后和冷冻后3个阶段的精液质量进行比较分析。结果表明,将猪精液冷冻稀释液中卵黄的添加量提高5～10个百分点,其稀释后、平衡后及解冻后3个阶段精子的5个运动参数与常规添加量相比均无显著差异（P〉0.05）。可见,提高猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度未能显著改善猪精液冷冻后的质量,综合考虑,猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度仍以20%（v/v）为宜。     

猪精液冷冻保存的初步研究

采用液氮熏蒸法制作猪冻精颗粒 ,对稀释液及冷冻保护剂进行优化筛选。结果表明 ,在 5种稀释液中 ,5号稀释液优于其他 4种 (P<0 .0 5 ) ;甘油的冷冻保护性能优于乙二醇和二甲基亚砜 (P<0 .0 1) ,其适宜浓度为2 m L/ L;稀释液中添加安钠咖可有效延长精子的冻后存活时间 (P<0 .0 1)。猪精液冷冻效果的关键因素是冷冻温度、冷冻速度和解冻温度 ,通过对不同温度情况的研究 ,初步制定了猪精液冷冻温度曲线。     

兔胚胎玻璃化冷冻的研究

探讨用玻璃化冷冻法保存兔胚胎的效果．结果表明,兔早期囊胚在0．5M海藻糖（93．8％）溶液中的存活率显著高于0．5M蔗糖组（70．0％,P〈0．05）．对照组与不同浓度甘油处理间兔胚胎存活率均差异不显著（P〉0．05）．分别用不同浓度乙二醇玻璃化冷冻兔胚胎,解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率,对照组与10％,20%EG组之间均差异不显著（P〉0．05）,但对照组,10％,20％EG组均显著高于30％EG组（P〈0．05）．解冻回收后正常胚胎数体内胚胎组（79．4％）显著高于体外胚胎（54．1％,P〈0．05）,囊胚孵化率2组之间差异不显著（P〉0．05）．缓慢冷冻法与玻璃化冷冻法之间胚胎解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率均差异不显著（P〉0．05）．     

双糖对冻融后猪精子质量的影响

在传统的Tris—柠檬酸—葡萄糖(TCG)稀释液基础上,分别添加0.1 mol/L乳糖、蔗糖、海藻糖,并采用细管法对精液进行冷冻,研究不同双糖对冻融后猪精液质量的影响。结果表明:0.1 mol/L的海藻糖和蔗糖相对于对照组和0.1 mol/L的乳糖TCG稀释液能够显著改善冻融后猪精子质量,其冻融后精子的活率、顶体完整率、低渗膨胀率、平均路径速度、运动线速度、平均侧摆幅度和平均鞭打频率均明显提高(P0.05),分别达到42.14%和40.56%,51.48%和49.84%,46.20%和43.01%,32.8μm/s和33.2μm/s,60.80%和59.00%,1.70μm和1.62μm,7.68 Hz和7.62 Hz。TCG稀释液中添加0.1 mol/L海藻糖和蔗糖的猪冷冻精液体外受精的受精能力明显高于0.1 mol/L乳糖组和对照组,其卵裂率分别为41%和38%。     

稀释液·清洁剂·冷冻程序对猪精液冷冻效果的影响

探讨了稀释液、清洁剂及冷冻程序对猪精液冷冻保存效果的影响。结果显示:①稀释液Ⅳ保存鲜精,精子活率明显低于其他组(P<0.05);但其作为冻精的解冻稀释液时,效果最佳(P<0.05),说明猪精液冷冻保存时可采用第Ⅰ～Ⅲ组稀释液,而解冻时采用第Ⅳ组较佳。②稀释液中于不同阶段添加SDS(Sodiumlaurylsulfate,十二烷基硫酸钠)或OEP(OrvusESPaste,清洁剂)均能显著提高冷冻精子活率(P<0.05),SDS与OEP对冻精活率的影响无显著差异(P>0.05)。③精液冷冻程序采用-70℃、液氮熏蒸与直接液氮熏蒸在对解冻后冻精精子活率上无显著差异(P>0.05)。添加咖啡因能有效提高冻精的解冻后活率。     

6种鸡精液冷冻稀释液以及冻后保存条件比较

为探究不同稀释液对鸡精液冷冻保存效果的影响,选择LR、Lake’s、BPSE、Modified Sasaki、Beltsville和Nabi共6种稀释液对霞烟鸡精液进行冷冻,解冻后分别在37或4 ℃条件下短时间保存,分析不同冷冻稀释液和保存条件对精子活率、活力、功能完整性和抗氧化指标的影响。结果表明,6种稀释液中Lake’s稀释液的冻后活率、活力和顶体完整性最高,分别为48.20%、45.70%和45.26%;LR稀释液虽然获得了48.16%的冻后活率,但其活力显著低于Lake’s稀释液。解冻后4 ℃保存更适合鸡精子的短时间保存,Lake’s和Nabi稀释液在4 ℃条件下保存45 min后活力仍达30 %以上。虽然Nabi稀释液解冻初始时的精子活率和活力低于LR和Lake’s稀释液,但随着保存时间的延长,其冻后精子存活能力表现最佳。随着冻后保存时间的延长,LR、Lake’s和Nabi稀释液冻后精子的线粒体活性、质膜完整性和抗氧化能力均呈现下降趋势,且37 ℃保存时下降更为明显,同时LR稀释液在这些指标上表现出较差的耐受性。综上所述,Lake’s和Nabi冷冻稀释液对鸡精子冷冻保存的效果最佳;解冻后4 ℃保存可延长冻精的体外存活时间;LR稀释液虽获得了较高的冻后活率,但其活力和冻后耐保存性能较差。     

不同抗氧化剂对金华猪精液冷冻保存效果的影响

为了观察冷冻稀释液中添加不同浓度的抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)、绿茶多酚(GTPs)、维生素E(VE)和超氧化物歧化酶(SOD)对金华猪精液冷冻保存效果的影响,分别在冷冻稀释液中添加0.125、0.25、0.5 mmol.L-1的GSH,10、15、20 mmol.L-1的GTPs,1、2、4 mg.mL-1的VE和1 000、2 000、4 000 I U的SOD,采集活率较高的金华猪精液,用上述含抗氧化剂的冷冻稀释液稀释后进行冷冻保存,分别检测4个处理组精子4℃平衡后的活率和解冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率。结果表明,在金华猪精液的冷冻稀释液中分别添加15 mmol.L-1GTPs、2 mg.mL-1VE、4 000 I U SOD可显著提高猪精子4℃平衡后的活率、解冻后精子活率和质膜完整率(P0.05)。     

氯、锌离子对猪精子钙通道和若干酶活调控作用的研究

为了研究了氯离子、锌离子等对猪精子钙通道的调控作用及其机理。将由健康公猪采得的精液经纱布过滤后分为三组,每组6个重复。第一组精液不加任何物质,第二三组精液分别加氯化钠液和硫酸锌液,混匀并静置2.5 h后,观测精子活力和精子、精清中离子含量与酶活。结果表明：（1）在猪精液中分别加适量的氯离子、锌离子,能刺激精清中钙离子向精子中转移,使得精子内钙离子含量显著地(P＜0.05)增加,精清中钙离子有一定程度的(P＞0.05)减少;（2）加锌或加氯离子,精子活力极显著(P＜0.01)地增强;（3）加锌离子组,精子内碱性磷酸酶、碳酸酐酶、腺苷酸环化酶活性极显著地(P＜0.01)提高,cAMP含量极显著地(P＜0.01)增多;精清内碱性磷酸酶、腺苷酸环化酶活性极显著地(P＜0.01)提高,cAMP含量显著地(P＜0.05)增多;（4）加氯离子组,精清内碱性磷酸酶、腺苷酸环化酶活性极显著地(P＜0.01)提高,精清内cAMP含量显著地(P＜0.05)增多;但精子内碳酸酐酶、腺苷酸环化酶活性和cAMP含量都无显著的(P＞0.05)变化。上述结果表明：猪精液加适量锌离子或氯离子,对精子细胞钙通道功能可能都有上调作用,并能提高精液中碱性磷酸酶、腺苷酸环化酶、碳酸酐酶活性,增加精液中cAMP含量,增强精子活力。     

季节、品种对种公猪精液量及精子活力的影响

[目的]研究季节、品种两大因素对成年公猪精液量及精子活力的影响效应。[方法]对21头长白猪和26头大白猪在一年内不同季节的精液量和精子活力进行观察和测定,并对这些精液品质进行统计学分析。[结果]季节对成年公猪精液量的影响达到显著水平（P〈0．05）,但2个品种对精液量的影响没有显著差异（P〉O．05）,其中长白猪的精液量在春季最多,秋、冬、夏依次减少,而大白猪的精液量在秋季最多,夏、春、冬三季则依次减少;季节和品种对成年公猪精子活力的影响均不显著（P〉O．05）,但是长白猪和大白猪的精子活力均在春季最高,而夏季最低,此外一年四季长白猪的精子活力明显高于大白猪。[结论]结果为提高猪场的繁殖效率和生产水平奠定基础。