重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗免疫抗体监测与分析

用重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)进行免疫,按照国家标准采用血凝抑制试验,对江苏省2008年12月—2009年12月所抽检的16个种鸡场、204个规模鸡场、953个散养户的3 984份鸡血清样品进行H5亚型高致病性禽流感免疫抗体监测,分析疫苗实际免疫效果。结果表明:江苏省H5亚型高致病性禽流感Re-5株平均免疫抗体合格率为94.90%,Re-4株平均免疫抗体合格率为91.25%,均超过国家和我省规定的免疫要求。各市的免疫效果存在差异,Re-5和Re-4株平均免疫抗体合格率均以徐州市最高,分别达到99.29%和98.93%。2个年度的样品检测结果也存在差异,Re-5株的平均免疫抗体合格率2008年比2009年高,Re-4株的平均免疫抗体合格率2009年比2008年高。在种鸡场、规模鸡场和散养户中,种鸡场的整体免疫效果最好。     

重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)免疫抗体监测与分析

为评估我省使用重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)以来的鸡群免疫效果,笔者对2016年全省春防、秋防、定点监测及日常监测所采集的规模养鸡场及散养户样品进行了免疫抗体检测与分析.检测结果表明,江苏省H5亚型高致病性禽流感Re-6株平均免疫抗体合格率为96.39%;Re-7株平均免疫抗体合格率为95.75%;Re-8株平均免疫抗体合格率为95.56%,均超过国家和我省规定的免疫要求.大部分地区的免疫抗体合格率呈现较高的一致性.在种鸡场、商品代饲养场(户)、散养户中,种鸡场的免疫效果最好.     

H5亚型禽流感Re-4毒株疫苗免疫效果调查与分析

为了解H5亚型禽流感Re-4毒株疫苗免疫效果,采用血凝-血凝抑制试验(HA-HI)方法对16个县区102个规模场/散养户送检的1621份鸡血清,进行H5亚型禽流感Re-4毒株免疫抗体检测。结果:Re-4毒株免疫血清抗体合格率为72.9%(抗体滴度≥5log2),Re-4毒株免疫抗体合格率高于50%的蛋鸡场户占80.4%,免疫抗体滴度≥7log2的血清份数占合格数的76.2%;发生过H5亚型禽流感疫情和疑似H5亚型禽流感疫情地区的17个养鸡场户,鸡群抗体滴度≥7log2的血清比例占到免疫合格数90%以上。     

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株)免疫抗体监测分析

为评估我省使用重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株)后的鸡群免疫效果,更好的开展禽流感防控工作,笔者对2014-2015年全省春、秋防及日常监测所采集的规模养鸡场及散养户样品进行了免疫抗体检测与分析.检测结果表明,江苏省H5亚型高致病性禽流感Re-6株平均免疫抗体合格率为96.84%;Re-7株平均免疫抗体合格率为95.95%.大部分地区的免疫抗体效价呈现较高的一致性.种鸡场的H5亚型禽流感免疫效果整体最好.2015年H5亚型高致病性禽流感Re-6株和Re-7株的免疫效果均高于2014年.     

陕西省渭南市高致病性禽流感免疫抗体监测与分析

为了解渭南市H5亚型和H7亚型高致病性禽流感(HPAI)免疫情况,2020—2022年,随机抽取规模养鸡场和散养户采集血清样品,采用血凝和血凝抑制试验进行禽流感病毒免疫抗体检测,并对检测数据进行统计分析。结果显示:H5亚型HPAI免疫抗体合格率为96.28%,H7亚型HPAI为92.24%;2020年H5亚型HPAI抗体合格率极显著高于H7亚型(P<0.001),2022年H5亚型HPAI抗体合格率显著高于H7亚型(P<0.05);12个区域的H5亚型HPAI抗体合格率为85.00%～100%,H7亚型HPAI抗体合格率为70.48%～98.80%;规模养鸡场、散养户的H5亚型、H7亚型HPAI平均抗体合格率均存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,渭南市H5亚型和H7亚型HPAI抗体水平较高,免疫效果较好。建议规模化养鸡场持续做好免疫效果评估,散养户加强免疫主体责任意识,以进一步提升禽流感整体防控水平。     

奶牛场O型口蹄疫免疫抗体水平的检测与分析

疫病监测是动物免疫工作的重要内容,准确监测是防控口蹄疫的重要环节。采集某地区9个奶牛养殖场及散养户的牛血清,采用正向间接血凝试验进行O型口蹄疫免疫抗体水平的检测。结果显示,该地区牛口蹄疫疫苗免疫合格率平均为71.5%,规模化养殖场高达76.7%,而个体散养户只有51.7%,比个体散养户高25%。由此表明,规模化养殖场免疫效果较好。     

宁夏禽流感免疫抗体血清学调查

为了解宁夏地区禽流感的免疫接种效果,采用HI试验对全区监测地点35个种禽场、365个商品代养殖场户、484个散养户和32个活禽市场送检的19 571份血清样本进行禽流感抗体水平检测。结果表明,全区禽流感免疫抗体的平均合格率为96.46%(18 879/19 571)。其中种禽场禽流感免疫抗体的平均合格率为99.58%(1 680/1 673),商品代养殖场户为96.93%(12 000/11 631),散养户为94.43%(5 461/5 157),活禽市场为97.21%(430/418),免疫抗体合格率的总体趋势为种禽场活禽市场商品代养殖场户散养户。     

黔南州2018-2020年H5亚型禽流感免疫抗体检测与分析

为评估2018-2020年贵州省黔南州H5亚型禽流感疫苗强制免疫效果,每年随机采集黔南州种禽场、商品场和散养户的鸡、鸭、鹅等家禽血清样品,通过禽流感血凝及血凝抑制试验方法,进行免疫抗体检测。检测结果为:2018-2020年全州H5亚型禽流感群体免疫抗体合格率都在85%以上,表明近3年黔南州H5亚型禽流感强制免疫效果较好。在不同养殖规模上,每年种禽场、商品场和散养户群体免疫抗体合格率都在85%以上,每年鸡、鸭、鹅等4类家禽群体免疫抗体合格率都在80%以上。建议部分中小规模养殖场结合实际情况优化免疫程序。     

贵州省禽流感免疫抗体监测结果分析

为切实了解贵州省禽流感的免疫接种效果,采用HI试验对全省3个地区种禽场、8个地区规模养殖场、4个地区农村散养户和2个地区活禽市场送检的17 616份血清样本进行禽流感抗体水平检测。结果表明:全省禽流感免疫抗体的平均合格率为75.7%(13338/17616),达到农业部的要求。其中种禽场禽流感免疫抗体的平均合格率为74.2%(1211/1632),规模养殖场为83.9%(10528/12552),农村散养户为57.6%(1434/2489),活禽市场为17.5%(165/943),免疫抗体合格率的总体趋势为规模场>种禽场>散养户>活禽市场。     

2017年西藏拉萨市家禽禽流感抗体水平检测

为了解西藏拉萨市家禽禽流感抗体水平,2017年8月随机选择免疫过H5禽流感疫苗的8个规模养殖场、2个散养户、3个活禽交易市场,共13个群体,采集1 041份家禽血清样品进行H5、H7、H9亚型禽流感HI抗体检测。结果显示：H5亚型禽流感免疫抗体合格率为45.73%,H7、H9亚型抗体阳性率分别为21.13%、52.64%;养殖场、散养户和活禽交易市场的不同亚型抗体水平存在较大差异,规模化养殖场的H7亚型抗体阳性率最高（29.92%）,活禽市场的H5、H9亚型阳性率最高（78.16%、79.31%）,散养户的所有亚型抗体阳性率均最低。结果表明,拉萨市H5亚型禽流感疫苗免疫效果较差,特别是散养户,疫病发生风险较高,H7、H9亚型疑似自然感染率较高,应进一步查明原因,及时采取相应的措施,防止疫情发生。     

Serologic surveillance of swine H1 and H3 and avian H5 and H9 influenza A virus infections in swine population in Korea

Influenza A is a respiratory disease common in the swine industry. Three subtypes, H1N1, H1N2 and H3N2 influenza A viruses, are currently co-circulating in swine populations in Korea. An outbreak of the highly pathogenic avian influenza H5N1 virus occurred in domestic bird farms in Korea during the winter season of 2003. Pigs can serve as hosts for avian influenza viruses, enabling passage of the virus to other mammals and recombination of mammalian and avian influenza viruses, which are more readily transmissible to humans. This study reports the current seroprevalence of swine H1 and H3 influenza in swine populations in Korea by hemagglutination inhibition (HI) assay. We also investigated whether avian H5 and H9 influenza transmission occurred in pigs from Korea using both the HI and neutralization (NT) tests. 51.2% (380/742) of serum samples tested were positive against the swine H1 virus and 43.7% (324/742) were positive against the swine H3 virus by HI assay. The incidence of seropositivity against both the swine H1 virus and the swine H3 virus was 25.3% (188/742). On the other hand, none of the samples tested showed seropositivity against either the avian H5 virus or the avian H9 virus by the HI and NT tests. Therefore, we report the high current seroprevalence and co-infectivity of swine H1 and H3 influenza viruses in swine populations and the lack of seroepidemiological evidence of avian H5 and H9 influenza transmission to Korean pigs.     

广东部分地区H1和H3亚型猪流感抗体监测和病毒分离

从广东省17个未免疫猪流感病毒(SIV)疫苗的规模化猪场和3个肉联厂的待屠宰猪群中采集2 155份血清样品,采用ELISA方法进行猪流感的血清学调查。结果发现,种猪和肉猪H1亚型猪流感抗体阳性率分别为39.6%(329/830)和37.6%(498/1325),H3亚型抗体阳性率分别为10.8%(90/830)和4.6%(61/1325),H1+H3阳性率分别为5.2%(43/830)和1.8%(25/1325)。从281份猪鼻拭样品和肺样品中分离并鉴定出5株猪流感病毒,其中H1N1亚型3株,H3N2亚型和H1N2亚型各1株。     

禽流感病毒H5HA、H7HA、H9HA亚型夹心ELISA方法的建立

将禽流感病毒(AIV)H5、H7、H9血凝素亚型标准血清中的IgG作为包被抗体,H5、H7、H9血凝素亚型单克隆抗体作为第二抗体,建立了双抗体夹心ELISA(AC-ELISA)方法,并优化了反应条件.结果表明:单抗和标准血清最适工作质量浓度分别为5、10 mg/L,标准阳性血清于4℃包被12 h,二抗作用条件为37℃作用1 h,封闭条件为37℃作用1 h,酶标抗体工作条件为1∶5 000稀释后,37℃作用1 h,底物作用条件为37℃作用10 min.阴阳性抗原临界值为0.274～0.332.本方法具有很高的特异性和敏感性.     

部分猪场H1和H3亚型猪流感的血清学调查

为了解中国部分省市规模化猪场H1和H3亚型猪流感病毒的流行情况,采用血凝抑制试验对采集于广东、湖南、河南省12个市县28个规模化猪场的799份血清进行H1和H3亚型猪流感病毒的抗体检测。结果表明,H1亚型抗体阳性率在0~83.33%之间,猪抗体总阳性率为46.18%(369/799),猪场阳性率为89.29%(25/28)。H3亚型抗体阳性率在0~100.00%之间,猪抗体总阳性率为61.33%(490/799),猪场阳性率为85.71%(24/28)。广东、湖南和河南地区H1亚型抗体阳性率分别为48.91%、40.26%和50.67%,H3亚型抗体阳性率分别为58.55%、70.78%和78.67%。在被调查的上述3个地区的猪群中,H1和H3亚型猪流感病毒的感染较为普遍,其中H3亚型感染率高于H1亚型,且各地区猪流感病毒的流行情况存在地域性差异。     

Seroepidemiological evidence of avian H4, H5, and H9 influenza A virus transmission to pigs in southeastern China

Pig serum samples collected in southeastern China were examined for antibodies to influenza A viruses. Since the hemagglutination inhibition (HI) test does not accurately detect antibodies to the hemagglutinins (HAs) of "avian" influenza viruses, we utilized the neutralization (NT) test to detect subtype-specific antibodies to the HA of avian viruses in pig sera. Neutralizing antibodies to H1, H3, H4, and H5 influenza viruses were detected in the serum samples collected in 1977-1982 and 1998, suggesting that pigs in China have been sporadically infected with avian H4 and H5 viruses in addition to swine and human H1 and H3 viruses. Antibodies to H9 virus, on the other hand, were found only in the sera collected in 1998, not in those collected in 1977-1982, correlating with the recent spread in poultry and subsequent isolation of H9N2 viruses from pigs and humans in 1998. The present results indicate that avian influenza viruses have been transmitted to pig populations in southeastern China.     

Development of vaccine strains of H5 and H7 influenza viruses

To establish vaccine strains of H5 and H7 influenza viruses, A/duck/Hokkaido/Vac-1/04 (H5N1) [Vac-1/04 (H5N1)], A/duck/Hokkaido/Vac-3/07 (H5N1) [Vac-3/07 (H5N1)], and A/duck/Hokkaido/ Vac-2/04 (H7N7) [Vac-2/04 (H7N7)] were generated from non-pathogenic avian influenza viruses isolated from migratory ducks. Vac-1/04 (H5N1) and Vac-3/07 (H5N1) were generated by genetic reassortment between H5N2 or H5N3 virus as an HA gene provider and H7N1 or H6N1 viruses as an NA gene provider. Vac-2/04 (H7N7) was a genetic reassortant obtained using H7N7 and H9 N2 viruses to give high growth character of the H9N2 virus in chicken embryonated eggs. The results of sequence analyses and experimental infections revealed that these H5N1 and H7N7 reassortant viruses were non-pathogenic in chickens and embryos, and had good growth potential in embryonated eggs. These viruses should be useful to develop vaccines against H5 and H7 highly pathogenic avian influenza viruses.     

我国家禽H7N9和H9N2亚型流感流行病学调查

为调查我国家禽H7N9和H9N2亚型流感流行状况,2018年3—5月,在我国11个省份67个场点,随机采集4 792份咽喉/泄殖腔拭子样品,通过RT-PCR进行流感病毒检测。结果显示:所检测的4 792份样品中,H7N9亚型阳性率为0,H9N2亚型阳性率为25.21%;场点阳性率为80.60%,其中活禽市场场点阳性率(96.30%)显著高于其他场所(15.38%)。与历年流行病学调查数据相比,2018上半年H9N2亚型病毒阳性率显著高于往年同期检测值(P0.05),达到近年来最高点。病毒核酸序列分析显示,检出的H9N2亚型病毒属于2007年以来我国H9亚型主要流行分支,即h9.4.2.5分支。本次调查结果表明,我国实施的H7N9疫苗免疫政策有效遏制了H7N9亚型流感的蔓延,而H9N2亚型流感病毒在我国持续流行多年,感染范围广,感染率有增高趋势,需要采取新的防控策略。     

禽流感H5、H7和H9亚型多重PCR方法的建立

为了建立能够同时检测禽流感H5、H7和H9亚型的多重PCR检测方法,本文分别针对各病毒亚型的HA基因高度保守序列设计了3对特异性引物。通过对反应条件的优化,成功建立了在一个反应中同时检测禽流感H5、H7和H9亚型的多重PCR诊断方法。根据其敏感性的结果可知,该方法对这3种亚型病毒的最低核酸检测量均为1×10~4拷贝/μL,且该方法特异性良好,具有灵敏、快速、成本低等优点,对禽流感病毒的流行病学调查具有指导意义。     

重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗对鸡和鸭的免疫效果观察

H7N9流感变异毒株的出现给我国家禽养殖业造成了严重的疫情风险。为了解和评估新型重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)的免疫效果和抗体消长规律,我们开展了鸡、鸭现场免疫试验。监测结果表明,该疫苗对蛋鸡和蛋鸭都具有良好的免疫效果,H5和H7亚型免疫抗体水平在免疫后2周均能达到100%的免疫合格率。对雏鸡也具有较好的免疫效果,免疫一次时H5和H7亚型抗体合格率分别在一免后3周和2周达到70%以上,并维持到一免后13周;进行二次免疫后,H5和H7亚型抗体合格率在二免后1周都达到100%。对雏鸭的免疫效果相对较差,一次免疫的H5亚型抗体水平不能达到70%的免疫合格标准,二免后1周H5和H7亚型抗体合格率均能达到80%以上,必须加强免疫一次才能达到满意的免疫效果。