奶牛孕酮—卵清蛋白交联物、孕酮—牛血清白蛋白交联物的制备

采用碳二亚胺法合成孕酮—卵清蛋白交联物(P4-OVA)、孕酮—牛血清白蛋白交联物(P4-BSA);用孕酮—卵清蛋白(P4-OVA)交联物作为抗原免疫兔子,获得高效价抗体;用孕酮—牛血清白蛋白交联物(P4-BSA)作为包被抗原,通过牛血清白蛋白将抗原牢固地连接在酶标板上,包被后的抗原在4℃保存一年使用效果良好。为奶牛孕酮检测ELISA试剂盒的研制奠定了基础。     

促孕散对持久黄体和卵巢静止奶牛血清生殖激素的影响

【目的】研究促孕散对持久黄体和卵巢静止奶牛雌二醇（E2）、促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）和孕酮（P4）4种生殖激素的影响,探讨促孕散治疗奶牛持久黄体和卵巢静止的作用机理。【方法】用促孕散治疗奶牛持久黄体和卵巢静止,统计发情率,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测奶牛血清中的E2、FSH、LH和P4 4种生殖激素,并与正常奶牛对比。【结果】促孕散治疗持久黄体牛发情有效率为91.67%,治疗卵巢静止牛发情有效率为88.89%。促孕散处理前,持久黄体P4水平极显著高于正常组（P＜0.01）,卵巢静止P4极显著低于正常组（P＜0.01）,而两种病型在处理前E2、FSH、LH水平与正常组差异不显著（P＞0.05）。持久黄体患牛在促孕散处理后血清中E2和FSH水平不断升高,与正常组比较差异不显著（P＞0.05）,LH水平在促孕散处理后也逐渐上升,与正常组同时达到峰值,其变化规律与正常组相似,P4水平逐渐降低,与正常组水平差异不显著（P＞0.05）。卵巢静止组在促孕散处理后血清中E2、FSH和LH水平均升高,其变化规律与正常组相似,P4水平出现先升高后降低的变化,变化规律与正常组相似,差异不显著（P＞0.05）。【结论】促孕散对持久黄体和卵巢静止奶牛血清生殖激素具有显著调节和诱导发情的作用。     

采食水平对初产母猪妊娠早期孕酮分泌、胚胎存活及相关基因表达的影响

 【目的】研究采食水平对初产母猪妊娠早期孕酮分泌、胚胎存活和胚胎成纤维细胞生长因子受体-2 （FGFR2）、孕酮受体（PGR）及胚胎和子宫内膜视黄醇结合蛋白4（RBP4）、叶酸结合蛋白（FBP）、子宫转铁蛋白（UF）基因表达的影响。【方法】母猪配种后随机分到3个组,按2.0倍、1.2倍和0.6倍维持需要供给饲粮（分别为采食高、中、低水平）,妊娠12、25和35 d屠宰母猪,收集血清、子宫液和胚胎、子宫组织,运用ELISA测定血清和子宫液中孕酮浓度,用RT- PCR测定目的基因在胚胎和子宫内膜中的表达。【结果】妊娠12、25和35 d,血清孕酮浓度在采食高水平组极显著低于采食中、低水平组（P＜0.01）。子宫分泌液孕酮浓度在妊娠12 d,采食低水平组极显著高于采食高水平组（P＜0.01）,采食中水平组显著高于采食高水平组（P＜0.05）,妊娠25 d各组差异不显著（P＞0.05）。妊娠12 d采食中水平组的活胚数显著高于采食高水平组（P＜0.05）,采食高、低水平间差异不显著（P＞0.05）。妊娠各阶段,采食中水平组的胚胎FGFR2、RBP4以及子宫内膜RBP4、FBP、UF mRNA 的相对表达量显著升高（P＜0.05）。【结论】妊娠35 d,以中水平采食量饲喂初产母猪,具有较高的活胚数,采食高水平或者严重限饲,引起孕酮分泌过高或过低,降低胚胎FGFR2、RBP4及子宫内膜RBP4、FBP、UF mRNA的表达,降低活胚数。     

奶牛孕酮间接竞争ELISA检测方法的建立

[目的]为孕酮检测试剂盒的研制奠定基础。[方法]采用二环己基碳化二亚胺法制备检测抗原,建立了检测奶牛孕酮含量的间接竞争ELISA方法。[结果]检测奶牛孕酮的间接竞争ELISA的最佳反应条件确定为:最佳包被浓度为100 ng/ml,碳酸盐缓冲液的包被效果较好,以4℃过夜+37℃2 h佳,最佳封闭液为2%山羊血清,酶标抗体的工作浓度为0.13μg/ml。建立的标准曲线方程为y=-1.844 4x-0.140 1(R2=0.981 7),检测范围为0~20 ng/ml,最低检测限为0.58 ng/ml。该标准曲线的批内变异系数和批间变异系数分别为2.22%和2.37%。[结论]该研究建立了定量检测奶牛孕酮的间接竞争ELISA方法。     

吉林地方特色肉牛发情周期内生殖激素变化规律研究

[目的]研究吉林地方特色肉牛发情周期体内生殖激素的变化规律,为提高国产特色肉牛繁殖效率提供理论依据。[方法]以吉林地区优质的草原红牛和延边黄牛,以及西门塔尔为试验对象,对发情周期内3个品种牛的血清与尿样中的孕酮、雌二醇,促卵泡素、促黄体素的变化进行测定和对比。[结果]发情第21天已孕与未孕肉牛的孕酮和雌二醇含量均存在极显著差异（P〈0.01）,促黄体素含量在发情当天与其他天相比有显著差异（P〈0.05）。[结论]通过检测肉牛发情早期血液中孕酮含量对发情鉴定及早期妊娠的诊断是切实可行的。     

奶牛孕酮单克隆抗体的制备及其酶免疫测定方法的初步建立

[目的]制备奶牛孕酮McAb,建立孕酮酶免疫检测方法,为研制检测试剂盒奠定基础。[方法]用琥珀酰亚胺法将孕酮与钥孔血蓝蛋白(KLH)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备完全抗原,免疫BalB/c小鼠,建立杂交瘤细胞株制备McAb,对McAb特异性、亚类、交叉反应性及相对亲和力等进行鉴定,筛选最佳McAb,建立酶免疫检测方法。[结果]获得3株杂交瘤1F6、2G6和2A11,腹水效价依次为1∶1×106、1∶1×105和1∶8×104,其中1F6为IgG2b亚型,2G6和2A11为IgM亚型,3株McAb都能和游离孕酮发生特异性反应,相对亲和力1F6>2G6>2A11,其中1F6对雌二醇的交叉反应率小于0.01%。选用1F6与酶标孕酮建立ELISA检测方法,制作标准曲线,检测范围为0.5~100.0ng/ml。[结论]该研究制备的单克隆抗体,可用于建立孕酮酶免疫检测方法,为奶牛孕酮水平的定量监测提供了较实用的方法。     

天津白和长白成年母猪在发情期间和妊娠早期的生殖激素变化规律

用放免法测定了天津白和长白各6头成年母猪从发情-2 d到妊娠30 d之间外周血清中促黄体素(LH)、促卵泡素(FSH)、雌二醇和孕酮浓度的动态变化。结果显示,整个试验期内天津白猪血清中平均LH,FSH与孕酮浓度均一直高于长白猪。其中,在妊娠早期的LH浓度、发情后的FSH浓度与其二次峰值、妊娠4,9,12,16 d的孕酮浓度及其最大峰值,天津白猪都显著高于长白猪(P<0.05)。血清雌二醇浓度,仅在发情-1 d时呈现出品种差异,天津白猪显著高于长白猪。结果表明,在发情前后与妊娠早期,成年天津白与长白母猪血清中4种生殖激素浓度的变化规律都基本相似,但在浓度值变化方面存在明显差异。     

一种新的抗多环芳烃多克隆抗体的制备（英文）

为实现环境中多环芳烃(PAHs)污染物的快速检测,制备了抗多环芳烃多克隆抗体,用于多环芳烃免疫学检测试剂盒的研制。采用活性酯法将半抗原芘丁酸(1-PBA)分别于牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,获得PBA-BSA和PBA-OVA偶联物,以PBA-BSA偶联物免疫新西兰大白兔,获得针对多环芳烃的抗血清。以PBA-OVA偶联物为包被原,间接ELISA法检测抗血清,效价为102 400,经纯化后得到多克隆抗体。采用间接竞争ELISA法绘制了针对芘的标准曲线,得到该方法的IC50值为0.06 mg/L,检出限为0.01 mg/L。与16种多环芳烃的交叉反应实验结果表明该抗体对高环PAHs的亲和力较高。反应体系中添加低于40%的甲醇对ELISA结果无影响。该抗体的制备及特性鉴定对后续多环芳烃酶联免疫试剂盒的开发奠定了技术基础。     

特定电磁波对激发产后奶牛发情、配种效果及有关性腺激素变化的观察

 特定电磁波（TDP）辐射器，通过电热激发，可产生2-25μm红外光谱，其峰值为9μm，具有对生物体有益的特异生物效应，目前在中国已广泛地应用。奶牛产后乏情达3个月以上且无卵泡发育者，用特定电磁波（TDP）居髎穴区照射，照射组（30头）在照射的21天内16头发情，对照组（30头）在此期间仅1头发情，两者比较，差异极显著；经3个情期配种，照射组16头发情牛中15头妊娠（第一情期配种8头妊娠），对照组1头发情牛经3个情期配种没有妊娠，两者比较，差异极显著。用放射免疫方法测定经照射发情16头奶样中雌二醇（E#-2）和孕酮（P#-4）含量变化曲线与正常发情牛周期中两种性腺激素含量变化规律一致，对照组牛奶样中雌二醇（E#-2）和孕酮（P#-4）没有规律性变化。     

牛奶孕酮的酶免疫分析法及其临床应用

本试验用混合酸酐法合成孕酮-11-半琥珀酸-辣根过氧化物酶结合物(酶标物),以3,3′,5,5′-四甲基联苯胺作为酶底物,建立了一种快速简便的牛奶孕酮的固相微滴板酶免疫分析法。该法经方法学鉴定证明灵敏、可靠,适合于任何实验室和牧场应用。 采用这种方法测定101头奶牛配种期0～2天和配种后18～24天的乳汁孕酮含量,建立了牧场进行奶牛的发情检查和早期妊娠诊断的可行方案。有11头配种期乳汁孕酮含量皆大于3ng/ml,判未受孕,经配种后有无出现转发情及两个月摸胎核实,确诊率为100％。配种后第20～22天,乳汁孕酮含量皆大于3ng/ml者,为妊娠;连续两次小于3ng/ml者,为空怀;间或有一次小于3ng/ml者,为可疑;以这些为标准并结合配种期的结果进行判定,则诊断为妊娠和空怀的确诊率分别为92％和97％,可疑率为4％,总确诊率为90％。     

生物菌剂对玉米秸秆堆沤过程水热状况及酶活性的影响

为解决内蒙古西辽河平原地区还田玉米秸秆腐解困难及腐解周期长等问题,于2020年采用田间秸秆动态堆沤快速腐解试验,分别设置秸秆腐熟剂+秸秆（SRT）、新鲜牛粪+秸秆（SRN）、秸秆腐熟剂+新鲜牛粪+秸秆（SRW）、单一秸秆（CK）4种处理,研究不同外源生物菌剂对堆沤玉米秸秆温度、水分、纤维素酶、脲酶和木质素过氧化氢酶的影响。结果表明,添加秸秆腐熟剂和新鲜牛粪均可提高秸秆腐解速率,并缩短腐解时间。与单一秸秆堆沤相比,添加新鲜牛粪和秸秆腐熟剂均能显著提高堆体秸秆温度和含水率;SRW、SRT和SRN处理纤维素酶活性较CK分别提高15.64%、4.87%和7.96%,脲酶活性分别提高10.29%、3.43%和6.86%,木质素过氧化氢酶活性分别提高71.43%、48.05%和53.25%。因此,添加秸秆腐熟剂和新鲜牛粪可改善堆沤秸秆水热条件和提高秸秆水解酶活性,进而加快秸秆堆沤腐解进程,两者耦合使用效果更佳,可作为一种高效秸秆堆沤方式在内蒙古西辽河平原地区推广应用。     

猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅡ主要抗原表位区原核表达及其间接 ELISA 方法的建立

[目的]以原核表达的重组蛋白作为检测抗原,建立间接 ELISA方法用来检测猪血清中APP抗体。[方法]将猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅡ主要抗原表位区基因片段克隆至原核表达载体 pET-28a（＋）,构建重组质粒 pET-ApxⅡA1。将重组质粒转化至宿主菌 BL21（DE3）中进行表达。通过 Western-blot分析重组蛋白免疫原性。用纯化的重组蛋白作为包被抗原建立检测猪 APP抗体的间接 ELISA方法,并优化反应条件,确定抗原的最佳包被量和血清的最佳稀释度。[结果]经 PCR双酶切及测序鉴定,重组质粒构建成功,诱导表达纯化后,重组蛋白可被 APP阳性血清特异性的识别,表明表达产物具有良好的免疫原性。用纯化的重组蛋白初步建立了检测 APP抗体的间接ELISA方法,用该方法与商品化 ApxⅣ抗体检测试剂盒分别对94份临床非免疫血清样品进行检测,结果两者的符合率为90.4%。[结论]所建立的间接 ELISA 方法具有良好的特异性和敏感性,为流行病学调查和疫苗免疫效果评估提供了技术手段。     

蚯蚓对设施番木瓜土壤生态环境的影响

以番木瓜品种穗中红为试材,进行不同处理（树盘覆盖牛粪接种蚯蚓、树盘覆盖牛粪和常规施肥）设施栽培番木瓜试验,探讨蚯蚓对设施番木瓜土壤生态环境的影响。结果表明,牛粪接种蚯蚓处理的土壤有机质、碱解氮、速效磷、速效钾含量分别比牛粪处理和常规施肥处理提高30.16%、23.58%、12.95%、12.55%和71.55%、45.20%、66.95%、48.80%;牛粪接种蚯蚓处理的土壤重金属Pb、Cu、Zn、Cd、Cr含量分别比牛粪处理和常规施肥处理低39.789%、43.881%、41.222%、34.821%、26.360%和49.018%、55.014%、55.624%、52.443%、40.502%。可见,树盘覆盖牛粪接种蚯蚓处理能够有效提高土壤养分含量,降低土壤中的重金属含量,是一种值得在番木瓜产区大力推广的生产模式。     

不同配比基质在山区蔬菜育苗上的优选研究

为了筛选出适宜张家口山区蔬菜育苗的基质种类,以当地农业有机废弃物玉米秸秆、菇料、酒糟和牛粪为主要原料,按照不同体积比复配成4种育苗基质,以草炭50％＋珍珠岩25％＋蛭石25％复配成的基质为对照（ CK）,研究了不同育苗基质对黄瓜出苗率、生长势指标（株高、茎粗、叶面积、植株鲜重、植株干重）和壮苗指标（根鲜重、 G值、壮苗指数）的影响。结果表明：在酒糟70％＋牛粪15％＋蛭石15％复配成的基质上黄瓜幼苗生长效果最好,在菇料70％＋牛粪15％＋蛭石15％复配成的基质上幼苗生长效果次之,二者指标差异以及与CK指标差异均不显著。在黄瓜育苗中,可用酒糟和菇料替代草炭进行基质复配。     

增氧和施有机肥对土壤肥效及水稻生长的影响

研究土壤增氧条件下施加绿肥(紫云英)和施加农家肥(干牛粪)对水稻生长和产量的影响。于水稻生长过程中不同时期采集处理组土壤样品,分析其碱解氮含量、速效磷含量和速效钾含量的变化;于水稻成熟后测定各处理组水稻的分蘖数、叶面积指数和产量等农艺性状指标。结果表明:增氧处理能够促进有机肥肥效元素的释放,提高土壤有效态肥效元素含量;增氧条件下,施加绿肥和农家肥均可促进水稻的分蘖生长,OAF(增氧施绿肥)和OCF(增氧施农家肥)处理的总分蘖数分别为51.34和50.16,对照组总分蘖数为36.93;增氧施农家肥处理比单施农家肥处理组的叶面积指数显著提高,增氧施绿肥处理与不增氧施绿肥处理组叶面积指数的差异无统计学意义;增氧施加有机肥处理组水稻的稻穗长度、穗结实粒数、每株谷粒质量均显著大于单施有机肥处理组,大于对照组。增氧与施有机肥相结合可有效提高土壤的肥效,促进作物生长。     

桔青霉素人工抗原合成及偶联比测定(摘要)(英文)

[目的]建立一种快速准确鉴定和测定人工抗原偶联比的方法。[方法]通过载体蛋白BSA合成桔青霉素人工抗原,用SDSPAGE电泳法、紫外吸收法、质谱法对其进行鉴定和测定。[结果]经过3种方法的鉴定,桔青霉素人工抗原偶联成功,紫外吸收法测得其偶联比是8.4,质谱法测得其偶联比是6。[结论]对3种供试方法比较发现,质谱法能够快速鉴定人工抗原而且能够准确测定人工抗原的偶联比。     

甘蔗渣与牛粪不同配比对烤烟产质量的影响

为探明甘蔗渣与牛粪不同配比在烤烟生产上的应用效果,以云烟87为试验材料,设置甘蔗渣与牛粪干重比(5∶5、6∶4、7∶3)3个有机肥配方,研究其对烤烟生长、经济效益、常规化学成分和评吸质量的影响。结果表明:与只施用烤烟专用复合肥相比,施用有机肥能改善烟叶化学成分的协调性,甘蔗渣与牛粪配比有机肥的效果好于玉米秸秆与牛粪配比(6∶4),且高比例甘蔗渣有机肥处理烟叶的协调性较好,但其产量和产值较低。综合看,甘蔗渣与牛粪干重比为5∶5时烤烟的综合评价排名较高,为3.5分,其产量为116.33kg/667m2,产值为3 261.21元/667m~2,上等烟比例达81.2%。     

NMF菌群腐熟牛粪对植物病害及土壤微生物的影响

采用盆栽试验研究了NMF菌群腐熟牛粪对植物病害以及土壤微生物的影响。结果表明,NMF菌群腐熟牛粪能明显降低小麦纹枯病和番茄灰霉病的发病率,对水稻恶苗病的抑制效果不明显。另外,腐熟牛粪可以促进土壤中细菌和放线菌的生长,抑制土壤中真菌的生长。     

无机肥与有机肥配施对烟株农艺性状及烟叶产质量的影响

为了解无机肥与商品牛粪配施对烟叶产质量的影响,采用田间试验方法,研究了商品牛粪与无机肥配合施用对烤烟植株农艺性状及烟叶产值量的影响。结果表明:商品牛粪与无机肥不同用量配合施用对烟株农艺性状的影响不明显,无机肥750kg/hm2+商品牛粪2 250kg/hm2能获得较好的经济效益,无机肥750kg/hm2+商品牛粪1 500kg/hm2对上部烟叶化学品质有一定的改善作用。烤烟大田生产中施用无机肥750kg/hm2配施商品牛粪1 500～2 250kg/hm2有利于提高烟叶的产质量和经济效益。     

利用蚯蚓处理农业废弃物及其肥效研究

为了探究蚯蚓处理农业废弃物（鲜菌糠、鲜牛粪）的作用以及对肥效的影响,分别采用鲜牛粪、鲜菌糠及鲜牛粪＋鲜菌糠（干重比1∶1）作为原料饲养蚯蚓,测定了处理前后物料中重要养分（氮、磷、钾和有机质）的含量变化,利用T检验判断各成分在处理前后含量的差异显著性,并分析了变化的原因。结果表明：基于蚯蚓的生物作用,经蚯蚓处理后所得的有机肥料中速效氮、全磷、速效磷和速效钾含量均显著提高,全氮和有机质含量显著下降。农业废弃物饲养蚯蚓后增强了肥效,并为低成本高效饲养蚯蚓提供了原料,可实现资源的循环利用。