猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅡ主要抗原表位区原核表达及其间接 ELISA 方法的建立

目的]以原核表达的重组蛋白作为检测抗原，建立间接 ELISA方法用来检测猪血清中APP抗体。方法]将猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅡ主要抗原表位区基因片段克隆至原核表达载体 pET-28a（＋），构建重组质粒 pET-ApxⅡA1。将重组质粒转化至宿主菌 BL21（DE3）中进行表达。通过 Western-blot分析重组蛋白免疫原性。用纯化的重组蛋白作为包被抗原建立检测猪 APP抗体的间接 ELISA方法，并优化反应条件，确定抗原的最佳包被量和血清的最佳稀释度。结果]经 PCR双酶切及测序鉴定，重组质粒构建成功，诱导表达纯化后，重组蛋白可被 APP阳性血清特异性的识别，表明表达产物具有良好的免疫原性。用纯化的重组蛋白初步建立了检测 APP抗体的间接ELISA方法，用该方法与商品化 ApxⅣ抗体检测试剂盒分别对94份临床非免疫血清样品进行检测，结果两者的符合率为90.4%。结论]所建立的间接 ELISA 方法具有良好的特异性和敏感性，为流行病学调查和疫苗免疫效果评估提供了技术手段。