刺五加形态发生方式的研究

以刺五加愈伤组织为试材,研究了器官发生途径和体细胞胚胎发生途径获得再生植株的发生机制。结果表明:移栽成活率分别达到47%和86%;刺五加不定芽诱导最适培养基组成为:MS+NAA 0.2 mg/L+BA 3.0 mg/L;体胚诱导的最适培养基组成为:MS+蔗糖20g/L+葡萄糖20g/L;细胞学观察发现刺五加不定芽大多发生在愈伤组织表面;刺五加体胚发生与合子胚发育过程相似,发生途径为单细胞起源、内部发生。     

Study on the Morphogenesis Way of Acanthopanax senticosus

以刺五加愈伤组织为试材,研究了器官发生途径和体细胞胚胎发生途径获得再生植株的发生机制.结果表明:移栽成活率分别达到47％和86％;刺五加不定芽诱导最适培养基组成为:MS+NAA 0.2 mg/L +BA 3.0 mg/L;体胚诱导的最适培养基组成为:MS+蔗糖20 g/L+葡萄糖20 g/L;细胞学观察发现刺五加不定芽大多发生在愈伤组织表面;刺五加体胚发生与合子胚发育过程相似,发生途径为单细胞起源、内部发生.     

菠萝非胚性愈伤组织的类型及其器官发生

以菠萝[Ananas comosus(L.)Merr.]非胚性愈伤组织为材料,利用离体培养及组织细胞学等方法研究了其在增殖、分化过程中的特性和再生规律。在增殖培养基上经过3次以上继代培养后,非胚性愈伤组织形态上逐渐表现出一定差异。根据其形态结构、分化能力和组织细胞学特征,可把非胚性愈伤组织分为节瘤状组织、薄壁组织团、致密深层愈伤组织和表面疏松愈伤组织4种类型;在增殖培养基MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA上,一种类型的非胚性愈伤组织通常只会生长出同类型的非胚性愈伤组织,但通过改变培养基配方等方法可使不同类型之间发生转换。同时,增殖继代过程中的器官发生现象很常见,通常是在薄壁愈伤组织表面细胞分化成具有分生能力的细胞,然后进行不定芽的分化。4类非胚性愈伤组织都可以通过拟原球茎、多芽体以及不定芽的形式进行器官发生;也可以经胚性诱导由体细胞胚发生途径再生成植株,其中拟原球茎产生体细胞胚的能力最强,多芽体其次。生长素及细胞分裂素对非胚性愈伤组织的形态结构、分化途径以及增殖能力有很大的影响。     

花烛不同愈伤组织解剖结构的观察

 以花烛(Anthurium andraeanum ) ‘Jolanba’8种不同培养时期或不同激素处理的愈伤组织为材料, 通过显微观察研究了花烛离体形态发生途径和8种愈伤组织离体形态差异的解剖学特点。结果表明,花烛离体形态发生途径以间接器官(不定芽) 发生为主, 且发生于愈伤组织近表层; 同时也存在体细胞胚途径, 发生于愈伤组织表面或内部。8种愈伤组织在结节( nodule) 的类型、分生细胞的数量及分布等方面存在差异。分生细胞的数量和分布与芽的分化有较好的相关性, 愈伤组织表层分生细胞分布较多, 分化的芽也较多, 而愈伤组织内部分生细胞分布较少, 分化的芽也较少。噻二唑苯基脲( TDZ) 对分生细胞和体细胞胚有较好的诱导作用。愈伤组织的表面划痕和再次切割有利于再生芽的分化。     

利用未成熟种子建立野生阿宽蕉胚性细胞悬浮系和植株再生的研究

以纵切的野生阿宽蕉60d龄未成熟种子为外植体,在MI1愈伤组织诱导培养基(MS大量和微量元素及铁盐+MorelandWetmore维生素+0.1mmol/LKH2PO4+87mmol/L蔗糖+4.5μmol/L2,4-D+1g/LGelrite)中培养60d后开始出现浅黄色松散的胚性愈伤组织,150d后愈伤组织诱导率为(15.11±1.95)%。该类愈伤组织被转移到含18μmol/L2,4-D的MI2培养基中继代60d后,可获得状态均一的理想的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织悬浮培养后,通过2个月的筛选和继代培养,可得到均质的胚性细胞悬浮系。理想的胚性愈伤组织在体细胞胚诱导培养基中培养10d后可见到白色半透明体细胞胚的发生,体细胞胚诱导率为7.70×105个/gFW。成熟体细胞胚的萌发率为(33.33±3.37)%,植株再生率为(20.83±1.68)%。     

朱顶红体细胞胚胎发生及植株再生研究

 通过诱导朱顶红（Hippeastrum hybridum）小鳞茎形成胚性愈伤组织,建立间接的体细胞胚胎发生途径和植株再生的无性繁殖体系。试验结果表明,0.5  mg · L^-1的2,4-D附加0.5 mg ·  L^-1 6-BA对试管小鳞茎外植体初代胚性愈伤组织的诱导和继代增殖有明显的促进作用,初培养松脆愈伤组织诱导率可达83.3%。2.5 ~ 5.0 mg · L^-1 的6-BA对体细胞胚胎的发育有显著的促进作用,培养50 d大于20个体细胞胚发生的愈伤组织约为50%;相同浓度6-BA附加不同浓度NAA的试验组间体细胞胚发育无明显差异。     

香榧体细胞胚发生的研究

 以香榧胚为外植体进行体细胞胚的诱导, 在SH + 6-BA 0.1 mg/ L + 2,4-D 0.5 mg/ L 的培养基上愈伤组织诱导率可达到69.8 %; 愈伤组织经过数次继代后转移至1/ 2 SH + 6-BA 0.1 mg/ L + NAA 0.1mg/ L 培养基上可诱导体细胞胚的形成, 诱导率可达70.3 % , 体细胞胚在合适的培养基上可继续生长和增殖。这是国内外首次通过组织培养成功获得香榧体细胞胚的报道。     

AtWUS过表达诱导分蘖洋葱体细胞胚高频发生

以分蘖洋葱茎尖外植体诱导的愈伤组织为试材,采用农杆菌介导法,将外源基因AtWUS导入分蘖洋葱愈伤组织中,研究AtWUS对分蘖洋葱愈伤组织诱导体细胞胚发生的影响,以期建立分蘖洋葱体细胞胚高频发生体系。结果表明：过表达AtWUS可以显著促进分蘖洋葱愈伤组织的体细胞胚发生率(大约6倍),91%的双极性体细胞胚具有发育形成完整植株能力。RT-PCR分析结果表明,AtWUS在体细胞胚和转基因植株中高丰度表达。     

朱顶红‘Red Lion’胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生

以‘Red Lion’朱顶红(Hippeastrum vittatum)的鳞片为外植体进行体细胞胚诱导和形态学与组织学的胚性鉴定。结果表明,鳞片在MS+2 mg·L~(-1) BA+1 mg·L~(-1) NAA+2 mg·L~(-1) TDZ+30 g·L~(-1)蔗糖培养基上胚性愈伤组织诱导率可达90.63%,而不添加TDZ的培养基上胚性愈伤组织诱导率为0。胚性愈伤组织可呈白色松散、透明膨松、透明致密、微棕色松脆和翠绿色松脆等类型;非胚性愈伤组织呈微棕色致密状。胚性愈伤组织中可明显观察到球形胚、心形胚和棒状胚3个发育时期。体细胞胚在不添加植物生长调节剂的MS培养基上可发育形成芽和根,长成完整小植株。     

中国樱桃‘对樱桃’不定根离体再生植株的研究

 采用中国樱桃‘对樱桃’( Prunus pseudocerasus) 无菌生根苗的不定根作为外植体, 成功诱导了胚性愈伤组织, 实现了通过分化不定芽和诱导初生体细胞胚两种方式再生植株。根切段在MS + NAA1.0 mg/L + BA 0.05 mg/L + IBA 0.05 mg/L 培养基诱导获得胚性愈伤组织, 诱导频率达54.2 % , 该愈伤组织在MS + NAA 1.0 mg/L + BA 0.5 mg/L 培养基上不定芽分化率为100 % , 不定芽在MS + BA 0.5 mg/L + IBA 0.1mg/L 培养基上生长发育良好, 转入MS + NAA 0.02 mg/L + IBA 0.02 mg/L 生根培养基生根率达100 %; 整体不定根系统在MS 附加2 ,4-D 1.0～3.0 mg/L 和BA 0.5 mg/L 的培养基上同时诱导初生体细胞胚发生和单极不定芽发生, 每外植体上平均体细胞胚数5～25 个, 不定芽3～22 个。体细胞胚转到MS + BA 0.5 mg/L +IBA 0.1 mg/L 培养基上发育为完整植株, 植株再生率100 %。     

Rejuvenation influences indirect organogenesis from leaf explants of Pomegranate (Punica granatum L.) ‘Kandhari Kabuli’

Sequential subculturing leads to a gradual physiological change in cells that may be termed ‘rejuvenation’. The effect of repetitive subculturing on callus induction and shoot regeneration from leaf explants of Punica granatum L. ‘Kandhari Kabuli’ were investigated. Surface-sterilised leaves were cultured on 1.0× Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 4.0 mg l^–1 α-naphthaleneacetic acid (NAA) and 2.0 mg l^–1 6-benzyladenine (BA) for callus induction. Shoots were regenerated from callus on 1.0× MS medium supplemented with 1.5 mg l^–1 BA, 0.5 mg l^–1 kinetin, and 0.25 mg l^–1 NAA. Subculturing of callus onto fresh medium maintained the rate of shoot formation and substantially increased the production of shoot buds up to the second subculture. Following further subculture passages, a lower shoot regeneration potential from callus was observed. A maximum shoot bud induction from callus of 63.9% was observed at the second subculture passage. The rate of multiplication of in vitro shoots increased until the fourth subculture, then became constant. Similarly, in vitro rooting of micro-shoots increased up to the third subculture, followed by a decline during further subculturing.     

辣椒花药培养影响因素的研究

以6种基因型辣椒的花蕾为材料,比较了不同基因型辣椒花蕾的消毒效果,辣椒基因型及花药接种量对花药培养的影响。研究结果表明,本试验的消毒方法获得了较好的消毒效果,3个基因型材料均未受污染,其他最高的污染率为23.08%;50%的基因型能诱导出胚状体,出胚率1.18%～1.38%,小果型的辣椒不能诱导出胚状体;所有基因型均能诱导出愈伤组织,出愈率17.65%～69.44%;花药接种量对花药愈伤组织诱导有影响,增大接种量,出愈率上升0.77%～13.67%,但对胚状体诱导影响不明显;在愈伤组织的继代培养中,接种量对其生长的影响因基因型不同而不同,所有基因型的愈伤组织在第一次继代培养中均不能分化出胚状体或不定芽。     

结缕草种子愈伤组织诱导及植株再生研究

以结缕草成熟种子为外植体,研究了不同的种子处理方法和基本培养基、生长调节剂与壳聚糖的添加量对愈伤组织诱导的影响,以及愈伤组织的继代次数对植株分化的影响。结果表明:剥去外壳、划破种皮的结缕草种子在N6培养基中,2,4-D浓度为4 mg/L,添加4 g/L壳聚糖时,出愈率最高,达到100%,胚性愈伤的发生率也达到最高,为84.4%;用含0.1 mg/L 2,4-D的1/2MS分化培养基,经1次继代的浅黄色稍致密愈伤组织分化率最高,达到81.7%。     

Embryogenesis in vitro of several Citrus species and cultivars

Summary

A number of experiments were performed to obtain somatic embryos and embryogenie cell lines from several species and cultivars of citrus by in vitro ovule culture. The source of ovules (pre-anthesis and post-anthesis), incubation conditions (light and darkness) and several modifications of the culture medium were evaluated. All the species and cultivars assayed produced somatic embryos and “pseudobulbi”, but production of friable embryogenie callus was species dependent. The small proliferation of callus and globular bodies recovered from the primary cultures were suitable for recovering embryogenie callus lines by periodical subculturing into fresh medium. After several monthly subcultures discarding embryos and “pseudobulbi”, cell lines virtually devoid of organized structures were obtained from three cultivars of sweet orange, sour orange and Cleopatra mandarin. In all these species, embryogenesis was restored spontaneously and/or by substitution of sucrose by maltose or lactose in the culture medium. The embryos germinated and produced phenotypically normal plants.     

银杏成熟胚乳培养的细胞组织学观察

诱导银杏（GinkgobilobaL．）成熟胚乳产生愈伤组织时无需胚的存在。单独使用生长素或在细胞分裂素／生长素为0．5～0．9的范围内均能诱导部分胚乳切块产生愈伤组织。并且在White＋Kt2．7mg·l-1＋2,4－D1．0mg·l-1＋NAA2．0mg·l-1的培养基上,愈伤组织的诱导率最高,达到83．3％。胚乳细胞脱分化进行有丝分裂和无丝分裂,其中无丝分裂可以观察到劈裂和缢裂两种类型。愈伤组织起源于胚乳表皮及其下方2～3层细胞,且愈伤组织的形成需经历一个“假愈伤组织化”阶段。     

Propagation of Lilium hybrids. II. Production of plantlets from bulb-scale callus cultures for increased propagation rates

A method has been developed for the large-scale propagation of lilies from callus cultures. Bulb scales, being available at all times, are an ideal source of explants. Callus was induced throughout the annual cycle of all the 12 Oriental hybrid cultivars tested, by treating the bulb scales with a combination of 5 μM BA and 5 μM 2,4-D. Once initiated, this callus grew vigorously on media lacking exogenous growth substances. Callus induction by BA and 2,4-D, and the subsequent growth of such callus in the absence of exogenous growth substances, occurs within a broad range of cultivars and species within the genus. The callus could be maintained on a medium lacking ammonium salts, but the maximum growth rate was obtained at 10 mM NH₄NO₃. At low (0.2 mM) or zero levels of NH₄NO₃, light as compared with darkness was inhibitory to growth.The callus maintained its capacity for organogenesis. Maximum production of plantlets was obtained in continuous light on agar medium with 0.5 μM NAA.Potentially, the successive use of liquid and agar cultures can produce 6 × 10¹² plants per year from 1 g (dry wt.) of callus. Plantlets derived from callus were consistently diploid and could be readily transferred to soil.     

TDZ对诱导大蒜愈伤组织形成的影响

TDZ是一种新型植物生长调节剂,具有很强的细胞分裂素活性(CTK).研究了不同浓度TDZ对大蒜愈伤组织培养和大蒜鳞茎分化的影响.试验结果表明,15%浓度的TDZ对大蒜愈伤组织培养的促进作用最明显.诱导率达到75%;而在MS+15%TDZ的培养基上,愈伤组织增殖最快,诱导出黄色致密愈伤组织分化能力最强,质量最好.     

茉莉花愈伤组织诱导及悬浮细胞培养

以茉莉花（Jasminum sambac）花瓣为外植体在不同培养基上诱导出愈伤组织,通过对其类型的筛选从中选择疏松愈伤组织进行悬浮培养后,初步建立悬浮细胞培养系。结果表明,不同激素可诱导出疏松型（CA）、泥状型（CB）和绿色块状型（CC）愈伤组织,其分化方向也不同。用CA型和CB型愈伤组织均能建立悬浮细胞培养系,其中以泥状愈伤组织为起始材料较佳,大约11 d可建立初步的悬浮细胞培养系。     

石榴2种外植体再生方法在遗传转化研究中的优势比较

【目的】为了利用‘突尼斯软籽’石榴开展遗传转化研究,【方法】分别以叶片和茎段为外植体,探讨了不同灭菌时间和不同植物生长调节物质对2种外植体再生的影响,并对2种愈伤组织再生体系进行了比较。【结果】结果表明,茎段比叶片更容易灭菌,但叶片更容易长出绿色致密愈伤组织并分化更多的不定芽,而茎段分化的愈伤相对较为疏松,分化的不定芽也相对较少;来自茎段愈伤组织的不定芽比来自叶片的更容易长高;叶片比茎段再生体系建立所需时间要短;少量翠绿的叶片刀口处可以直接产生不定芽,可以直接利用叶片进行遗传转化的侵染,简化愈伤形成这一步骤,而茎段未发现此现象。在遗传转化试验中,茎段和叶片2种外植体愈伤组织抗生素敏感性试验结果均无显著性差异。【结论】研究结果认为,2者相比,叶片愈伤组织再生体系更适宜于石榴的遗传转化研究。