生长调节剂对巴西橡胶树愈伤组织多胺含量及过氧化物酶活性的影响

以巴西橡胶种子为外植体；以浓度为９μｍ的３，４—二氯苯氧乙酸（３，４—Ｄ）、苄基氨基嘌呤（ＢＡＰ）培养基为对照，与浓度为４．５、２．２５、０．４５μｍ的培养基作诱导愈伤组织发生和胚胎发生能力的比较。与对照培养基相比，在培养的最初２０天内，浓度为４．５μｍ的培养基可以提高胚胎发生的潜力（ＥＬＨａｄｒａｍｉ等，１９９１，ＡｎｎａｌｓｏｆＢｏｔａｎｙ６７、５１１—５１５），并使腐胺、亚精胺及精胺在培养期间（第４０－７０天）保持在一个较高的水平上，同时使过氧化物酶活性维持在一个低的水平上。在对照培养基中，愈伤组织胚胎发生不良可以认为是组织迅速老化的结果，它具有如下特点：①提早和加速能促进胚胎发生能力的多胺类物质的暂时性的产生；②提早出现过氧化物酶活性的高峰，这与愈伤组织褐化呈正相关，而褐化是胚胎发生的限制因素之一。     

群众杨悬浮细胞系的建立和耐盐体细胞变异体的初步筛选

对群众杨首次进行了悬浮细胞培养，对悬浮细胞系的生长进行测定，同时对耐盐体细胞变异体进行了初步筛选，获得了耐３．０‰－４．０‰不同ＮａＣＬ水平的不定芽。获得适宜悬浮、松脆、易分散的愈伤组织是悬浮的关键，对不同供试脱分化激素配比的试验结果表明，诱导愈伤组织的ＭＳ＋２，４－Ｄ（０．４５ｍｇ／Ｌ）＋ＮＡＡ（０．３ｍｇ／Ｌ）＋Ｋｉｎｅｔｉｎ（０．１ｍｇ／Ｌ）为最好。合适的液体培养基成份和培养技术也是悬浮细胞     

杂交落叶松体细胞胚胎发生的初步研究

本文报道杂交落叶松体细胞胚胎发生的初步结果。该实验系统和系列培养基在西加云杉、日本落叶松和马尾松的种胚和幼嫩组织的体细胞胚胎发生试验中有效。种胚和来源于２８￣４２天无菌实生苗下胚轴、子叶和胚根幼嫩组织不同位置切段接种到ＳＥＩＭ培养基，除ＣＴ和ＨＴ外，所有外植体愈伤组织（Ｃ）的诱导率为１００％；胚性愈伤组织（ＥＣ）的诱导率为３．３０％￣５８．２０％，胚性愈伤组织接种到ＳＥＭＭ培养基，经３￣５次继代培     

红豆杉及南方红豆杉体细胞胚胎发生的研究

利用江西的红豆杉（Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、福建的南方红豆杉（Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒ．ｍａｉｒｅｉ）以及四川的南方红豆杉（Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒｍａｉｒｅｉ）的成熟胚为试验材料,成功地诱导出大量的愈伤组织。这３种材料愈伤组织的最高诱导频率分别为９５７％、９８４％、９１７％。细胞学和形态学的观察结果表明：在适当的条件下经过一段时间的培养,这些愈伤组织能够产生处在不同发育阶段的体细胞胚。上述３种植物材料每１００块愈伤组织平均最多分别可产生１２７、９１和３３个体细胞胚。     

小叶杨原生质体培养中的激素和氨含量变化

以小叶杨（Ｐｏｐｕｌｕｓｓｉｍｏｎｉｉｃａｒｒ．）原生质体培养的愈伤组织为供试材料，用高压波相色谱法（ＨＰＬＣ），测定它们在四种不同分化培养基上四大类内源激素（ＩＡＡ，ＧＡ３，ＣＴＫ，ＡＢＡ）的含量变化，并检定有关Ｎ的生化反应。结果表明，不同分化培养基上的愈伤组织中内源激素含量和种类差异很大。导致细胞分裂素（ＣＴＫ）含量高，种类多以及细胞分裂素与生长素的比值（ＣＴＫ／ＩＡＡ）高的处理，有利于愈伤组织分化；但若愈伤组织中含有内源脱落酸（ＡＢＡ），则抑制分化。测定结果还表明，小叶杨原生质体培养的愈伤组织分化过程中，其硝酸还原酶活力与氨基态Ｎ含量互为消长。分化频率高的愈伤组织中，硝酸还原酶活力低，而氨基态Ｎ含量高．     

落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异

以华北落叶松替代、增殖培养的不同类型的胚性及非胚性愈伤组织为材料，测定其氨基酸、糖类、酚酸、激素以及离子的含量。结果表明：氨基酸含量的差异十分明显，质地硬的非胚性愈伤组织中18种游离氨基酸含量为胚性愈伤组织的2倍以上，经ABA处理后，胚性愈伤组织中多糖及邻苯二酚含量急剧升高；三糖含量与不同基因型密切相关；乙烯释放量 在非胚性愈伤组织中高于胚性愈伤组织；金属离子CO^ 的含量，胚性愈伤组织是非胚性愈伤组织的12倍，胚性愈伤组织中铵态氮（NH4^ ）与硝态氮（NO3^-)的比值是非胚性愈伤组织中的10倍以上;实验结果为进一步探讨针叶树体细胞胚胎发生的生理生化机理提供依据。     

从人参外植体诱导体细胞胚胎发生

体细胞胚胎发生是植物形态形成中一个非常重要的途径,它不仅具有理论意义,而且具有实际应用价值。人参组织培养中诱导体细胞胚胎发生已有成功的报道,但多数是先从外植体产生愈伤组织,然后再从愈伤组织诱导体细胞胚,而且几乎所有的报道都是以使用2、4—D为主来实现这一过程的。本试     

竹子悬浮细胞系的建立和组织培养试管苗移栽观察

本实验用（１）２,４－Ｄ,（２）ＮＡＡ／ＢＡ和（３）２,４－Ｄ／ＫＴ３种生长调节组合对孝顺竹顶芽和节侧芽外植体进行愈伤组织的诱导。２,４－Ｄ诱导顶芽和节侧芽外植体几乎全部生出水质、粗糙的淡黄色愈伤组织;２,４－Ｄ／ＫＴ诱导节侧芽外植体半数生颗粒状、光滑的白或淡黄色愈伤组织,不能诱导顶芽外植形成愈伤组织。由２,４－Ｄ诱导的孝顺竹愈伤组织在摇床上暗培养,建立了悬浮细胞系,可为竹子基因转化提供体材料。对     

群众杨39无性系耐盐悬浮细胞系的建立和体细胞变异体完整植株的诱导*

本试验以群众杨３９号为试材，通过耐盐胁迫悬浮培养建立耐盐悬浮细胞系，经愈伤组织成功培育出耐ＮａＣｌ３．０‰～３．５‰的群众杨体细胞变异体的完整植株。实验表明，ＭＳ培养基附加０．４５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ、０．３ｍｇ／ＬＮＡＡ和０１ｍｇ／ＬＫｉｎｅｔｉｎｅ的Ｍ４培养基能较好地获得松脆、易分散的愈伤组织。液体以ＭＳ培养基只附加０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＬＭ３为最好，附加氨基酸有益于悬浮细胞的正常生长。还对悬浮培养细胞的有关参数进行了测定。耐盐悬浮细胞培养实验结果表明ＮａＣｌ对细胞生长有抑制作用，并随着ＮａＣｌ升高而加强。对获得的耐３‰～６‰各水平ＮａＣｌ悬浮细胞经高密度植板，都能形成愈伤组织。耐盐愈伤组织诱导只获得耐３‰～４‰ＮａＣｌ的不定芽，高于４‰ＮａＣｌ未能诱导出不定芽，说明高浓度ＮａＣｌ对芽组织分化有明显的抑制作用。不定根分化对ＮａＣｌ反应非常敏感，只在耐３‰和３．５‰ＮａＣｌ浓度培养基诱导出不定根。     

红松组织培养技术的初步研究

以ＭＳ为基本培养基,加入不同种类和浓度的激素,对红松离体胚和２￣３ａ生幼苗的顶芽进行组织培养。在含有激素的培养基上,离体胚在量愈伤组织和畸形苗。顶经过４－５个月培养后,在细胞分裂素含量较高的培养基上形成少量侧芽,在生长素类激素含量较高的发生不定根。     

凤尾丝兰子房离体培养中的激素效应研究

用ＭＳ培养配方为基本培养基，附加ＫＴ、６－ＢＡ、２。４－Ｄ、ＮＡＡ及ＩＢＡ等５种植物激素按不同水平与组合方式，以凤尾丝兰离体子房为试验对象，研究其在培养过程中各分比阶段的激素效应。结果表明：脱分化，再分化及生根诱导各阶段，细胞激动素与生长素的种类、性质、绝对浓度及配合比例至关重要。ＫＴ３～５ｍｇ／Ｌ＋２．４－Ｄ０．１～０．２ｍｇ／Ｌ可诱导愈伤组织产生，但以ＫＴ４ｍｇ／Ｌ＋２．４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ效     

影响非洲菊叶柄离体培养再生的因素

以3个非洲菊品种的叶柄为材料,研究了不同激素及其浓度对非洲菊离体培养再生的影响。结果表明:3个品种的叶柄在含单一细胞分裂素6-BA的培养基上培养时都不能被诱导出愈伤组织;而在仅含生长素NAA的培养基上培养时均可被诱导出愈伤组织,并且在其愈伤组织发生部位都有不定根发生,但只有品种6267能从不定根发生部位直接分化出不定芽;当在含NAA的培养基上再附加6-BA时也可被诱导出愈伤组织,但无不定根发生。所产生的愈伤组织在分化培养基上培养时只有由品种Ⅱ叶柄在同时含有NAA和6-BA的诱导培养基上产生的愈伤组织才可以分化出不定芽。表明愈伤组织的诱导与分化、不定芽和不定根的发生与品种及培养基中的激素种类有关。     

小叶杨原生质体培养中的激素和氮含量变化

以小叶杨原生质体培养的愈伤组织为供试材料，用高压液相色谱法（ＨＰＬＣ），测定它们在四种不同分化培养基上四大类内源激素（ＩＡＡ，ＧＡ３，ＣＴＫ，ＡＢＡ）的含量变化，并检定有关Ｎ的生化反应，结果表明，不同分化培养基上愈伤组织中内源激素含量和种类差异很大，导致细胞分裂素（ＣＴＫ）含量高，种类多以细胞分裂素与主长素的比值（ＣＴＫ／ＬＡＡ）高的处理，有利于愈伤组织分化；但若愈伤组织中含有内源脱落酸（ＡＢＡ）     

悬铃木体细胞胚胎发生及植株再生

以叶片为材料 ,研究了悬铃木的体细胞胚胎发生及其植株再生。结果表明 ,悬铃木幼苗叶片在WPM 0 1mg·L- 1 IBA 5 0mg·L- 1 BA培养基上的愈伤组织诱导率和胚性愈伤组织诱导率分别为 10 0 %和 89 1% ;2 5℃的温度有利于胚性愈伤组织在WPM 0 5mg·L- 1 BA培养基上进行体细胞胚胎发生 ;黑暗低温处理 (10℃ ) 3d不但可以促进体细胞胚胎的发生过程 ,而且可以提高其发生频率。     

EstablishmentofEmbryogenicCellSuspensionCulturesandDevelopmentofSomaticEmbryoonCameliasinensisvar．as

云南大叶茶成熟种子子叶诱导产生愈伤组织，在改良ＭＳ并附加０．０５ｍｇｌ－１２，４－Ｄ和０．５ｍｇｌ－１６－ＢＡ的琼脂培养基上经多次继代培养后，形成了五种类型的愈伤组织：黄色松散颗粒状（ＹＦ）、黄色半透明（ＹＳ）、绿色半透明（ＧＳ）、绿色坚硬（ＧＨ）、白色坚硬（ＷＨ）．愈伤组织的分散程度及液体培养基的组成成分影响细胞悬浮培养物的建立：①黄色松散颗粒状愈伤组织最适合建立细胞悬浮系统；②在改良的ＭＳ液体培养基中添加较高的维生素（１８．０３ｍｇｌ－１）和较高的生长素／细胞分裂素的比例（２，４－Ｄ／６－ＢＡ＝０．１／０．５）及２０ｍｌｌ－１的椰子乳，细胞生长和细胞分散程度良好．将ＹＦ接种到这种改良的ＭＳ的液体培养基中，在室温２５±２℃，每天１６小时散射光照射，１２０ｒｐｍ的旋转振荡器上悬浮培养，三周后建立了云南大叶茶的胚性悬浮系统：系统中单细胞占５．３６％，２～５个细胞的小细胞团占２３．８１％，６～２０个细胞的细胞团占７０．８３％；有丝分裂指数为３．２５％，活细胞率为７０％～８０％；悬浮培养物中细胞生长周期为１０天左右．     

樟子松胚乳单倍体愈伤组织发生与分化的研究

以樟子松未成熟胚乳为外植体，分别予以热激、光培养、暗培养和胚乳刻伤等多种处理进行培养。结果表明：刻伤胚乳利矜愈伤组织产生，暗培养比光培养更利於出愈量增加。在培养基ＭＳ＋ＫＴ２＋ＮＡＡ０．５＋２．４－Ｄ０．２＋ＬＨ１００，蔗糖浓度５％上，热激后暗培养，愈伤组织诱导频率可达８９．３％，并进行了细胞学观察以及愈伤组织上的分化诱导。为樟子松单倍体育种提供了一条新途径。     

‘西林3号’核桃体细胞胚胎诱导与增殖的影响因素

【目的】筛选最佳的‘西林3号’核桃体细胞胚胎诱导和增殖培养条件。【方法】通过进行不同消毒方法、不同外植体、不同采样时期、不同激素浓度配比、不同蔗糖与谷氨酰胺浓度处理,对核桃胚性愈伤组织的诱导情况进行研究,筛选最佳诱导条件;同时对比不同激素浓度对核桃体细胞胚胎增殖率的影响,筛选最佳增殖培养基。【结果】雄花(花药)、种子、幼胚的最佳消毒方法分别为70%乙醇15 s+10%NaClO浸泡4 min、70%乙醇30 s、70%乙醇5 min,培养4 d后的存活率高,污染率低。幼胚是诱导胚性愈伤组织的最佳材料,5月31日是最佳的采样时间,诱导率分别为(65.00±7.07)%和(85.83±1.17)%。以愈伤组织为材料时,诱导胚性愈伤组织的最佳激素浓度配比为改良DKW培养基添加1.0 mg/L 6-BA、2.0 mg/L KT、0.01 mg/L IBA,诱导率为(37.94±1.33)%。以愈伤组织为材料时,诱导胚性愈伤组织的最佳蔗糖质量浓度为30 g/L,诱导率为(82.67±0.94)%,谷氨酰胺不是诱导胚性愈伤组织的影响因素。体胚增殖的最佳激素浓度配比为改良DKW培养基添加0.5 mg...     

海南白花油茶花药再生体系的初步建立

适合本地种植的良种壮苗匮乏,是制约海南省油茶产业可持续发展的关键因素之一。为了通过花药体细胞胚发生途径来获得具主根的体细胞再生植株组培苗,从花粉发育时期的鉴别、初代愈伤组织诱导培养基和培养方式的筛选以及花药体胚植株的再生和移栽等方面进行探索,初步建立了海南白花油茶花药体细胞胚再生体系。结果表明:海南白花油茶未开花蕾的横径为1.19~1.30 cm时,花粉发育多处于单核靠边期,此期的花药是诱导花药胚性愈伤组织的合适外植体;适用于海南油茶花药胚性愈伤组织诱导的初代培养基为改良MS配以NAA和KT激素组合的培养基,适宜的培养方式为暗培养;花药胚性愈伤组织在NAA、BA和Zt激素组合的培养基上可再分化出体细胞胚和诱导体胚成熟。     

外植体和基因型对泡桐体外植株再生的影响

利用叶片和茎段为外植体,研究了毛泡桐和白花泡桐胚性愈伤组织诱导、体细胞胚胎发生及植株再生情况。结果表明,白花泡桐叶片和茎段胚性愈伤组织诱导的最适培养基分别为MS+0.3mg/L NAA+14mg/L BA和MS+0.3mg/L NAA+8mg/L BA,毛泡桐叶片和茎段胚性愈伤组织诱导的最适培养基皆为MS+0.3mg/LNAA+17mg/L BA。从体细胞胚胎发育所需时间来看,2种泡桐叶片的体细胞胚胎发育能力均高于茎段。     

具有不同胚胎发生及再生能力的橡胶愈伤组织其差异表达cDNA序列及组织学特性的鉴定

来自巴西橡胶树同一基因型的不同松散型愈伤组织系可能会具有不同的胚胎发生及再生潜力,但从外观上却很难对其加以区分。为了深入揭示不同愈伤组织系之间所存在的差异,我们对5个具有不同胚胎发生及再生潜力的愈伤组织系进行了组织及分子学比较研究。试验中我们采用差异显示（DD-RT）技术对诱导期间差异表达的基因进行了分析。在胚性再生型愈伤组织系（ER）诱导期间共鉴定出28个差异表达的cDNA。此外还发现,ER系中胚胎发生结节（胚性结节）的形成要早于胚性非再生型愈伤组织系（ENR）,而非胚性愈伤组织系（NE）中则根本不形成胚性结节。以上28个cDNAs中,有5个可用于诱导之前区分具有不同胚胎发生潜力的愈伤组织系,从而可以对橡胶树松散型愈伤组织的胚胎发生潜力作出提前判断。