火龙果花药培养诱导胚性愈伤组织及遗传稳定性

成年态火龙果茎段诱导的愈伤组织再分化较困难,进而影响到遗传转化效率。以红皮紫红肉的"紫红龙"火龙果花药为外植体,研究了小孢子不同发育时期、低温预处理时间、不同植物生长调节剂及浓度配比对花药诱导胚性愈伤组织的影响。结果表明,小孢子发育处于单核初期至单核靠边期的花药,其愈伤组织诱导率最高可达23.9%,但未能诱导出胚状体;而4℃低温预处理48 h,愈伤组织的诱导率可达32.8%;最适花药愈伤组织诱导的培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+60 g/L蔗糖,诱导率为37.4%,胚性愈伤组织为黄绿色、致密状,外表有颗粒状突起。愈伤组织增殖培养基以MS+0.4 mg/L TDZ+0.8 mg/L KT效果较好,增殖系数达9.1倍以上。愈伤组织再分化培养基为MS+0.4 mg/L TDZ+0.5 mg/L 2,4-D+0.6 mg/L NAA时,愈伤组织再分化率达36.7%。通过火龙果花药诱导出愈伤组织,增殖获得大量胚性愈伤组织,再分化形成不定芽,经SRAP分子标记检测遗传性一致,能为火龙果基因工程育种和种苗快速繁育提供新的途径。     

花曲柳愈伤组织悬浮培养及秦皮甲素积累研究

为建立花曲柳的愈伤组织诱导、增殖与悬浮培养体系,采用WPM为基本培养基,选取休眠芽刚萌发的叶片及叶柄为外植体,采用均匀试验设计研究不同浓度及配比的生长调节剂对花曲柳愈伤组织的形成和增殖的影响。1.8 mg/L NAA和0.1 mg/L TDZ的生长调节剂组合适合形成绿色、松散的愈伤组织,1.2 mg/L NAA和0.07 mg/L TDZ的组合适合形成增殖迅速的悬浮愈伤组织团。花曲柳愈伤组织诱导的最佳培养基为WPM+1.5 mg/L NAA+ 0.1 mg/L TDZ;增殖的最佳培养基为WPM+ 1.874 mg/L NAA+ 0.127 mg/L TDZ;愈伤组织悬浮培养基为1/2WPM+ 1.2 mg/L NAA+ 0.07 mg/L TDZ,秦皮甲素最大积累量出现在悬浮培养的第9天,最高可达0.800 mg/g。     

短柱铁线莲愈伤组织培养及褐化抑制

本研究在正交设计的基础上,以短柱铁线莲的叶片、叶柄、茎段为外植体,进行愈伤组织培养,并探讨愈伤组织褐化的抑制。研究结果表明:短柱铁线莲诱导愈伤组织的适宜外植体为茎段,诱导率为89.8%;合适的愈伤诱导培养基为1/2MS+0.4 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+10 g/L蔗糖,诱导率为90%;合适的增殖培养基为1/2MS+30 g/L蔗糖+0.2 g/L肌醇+0.2 g/L水解络蛋白(CH)+5 mg/L Vc+0.3 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA,增殖率为302.3%。适宜不定芽诱导培养基为1/2MS+30 g/L蔗糖+0.76%琼脂+0.2 g/L肌醇+0.2 g/L水解络蛋白(CH)+0.3 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA,诱导率达63.3%。培养基中添加5 mg/L Vc或1 g/L活性炭时,可以能够很好地抑制短柱铁线莲褐化。     

刺梨叶片愈伤组织诱导及抗褐化研究

为进一步优化刺梨叶片愈伤组织诱导条件,本试验以‘贵农1号’、‘贵农2号’、‘贵农5号’、‘贵农7号’4个不同基因型刺梨叶片为试材,采用组织培养法研究预处理、取样时间、植物生长调节剂、抗褐化剂对叶片愈伤组织诱导及降低褐化率的影响。结果表明：100 mg/LVc浸泡12 h后,可显著提高4个基因型叶片愈伤组织诱导率,降低其褐化率,其中‘贵农1号’诱导率最高为97.44 %;春季是不同基因型叶片最佳取材时间,3月份叶片愈伤组织诱导率均达到最高值且褐化率最低;适合‘贵农1号’和‘贵农2号’叶片愈伤组织诱导的植物生长调节剂组合为1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/LNAA,而‘贵农5号’和‘贵农7号’叶片愈伤组织诱导最适宜的植物生长调节剂组合为1.0 mg/L6-BA+1.0 mg/LNAA+1.0 mg/LTDZ;3种抗褐化剂对4种基因型刺梨叶片愈伤组织增殖培养的效果大小为AgNO₃>柠檬酸>PVP;添加柠檬酸或AgNO₃可明显降低刺梨叶片愈伤组织褐化率,其中以2.0 g/L柠檬酸或0.4 g/LAgNO₃最为适宜,4个基因型叶片愈伤组织褐化率均达到最低值。该试验获得了4种基因型愈伤组织诱导的最适宜生长调节剂组合,降低了褐化率,为后续离体再生体系的建立奠定了基础。     

苎麻叶片组织培养再生植株的研究

摘要：以中苎一号叶片为外植体,研究了外植体消毒时间、培养基、生长调节物质对苎麻品种中苎一号叶片愈伤诱导、分化不定芽和生根的影响。其结果表明：先用75%酒精消毒10秒,再用0.1%升汞灭菌8分钟,同时滴入1-2滴1% HCL效果最好。中苎一号最佳叶片愈伤组织诱导基本培养基为1/2MS;最佳叶片愈伤组织诱导培养基组合为:1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.01mg/L IAA+0.03mg/L 2,4-D;最佳愈伤分化培养基为: 1/2MS+0.5mg/L TDZ+0.02mg/L 2,4-D+0.03mg/L IAA;最佳生根培养基为:1/2MS+0.02mg/L TDZ+O.O5mg/L NAA+0.02mg/L IAA, 形成了较为完善的组织培养再生体系,再生率达到了26%以上     

TDZ对橡胶树花药愈伤组织诱导和体细胞胚发生的影响

为了提高橡胶树优良品种的愈伤组织诱导和体细胞胚发生的频率,促进其花药植株再生体系的优化,以橡胶树品种‘云研73-477’、‘热垦525’和‘云研77-2’的花药为外植体,研究不同浓度的TDZ对愈伤组织诱导和细胞胚胎发生能力的影响。结果表明,在愈伤组织诱导实验中,MS+TDZ 0.2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+椰子水50 mL/L+蔗糖70 g/L效果最好,诱导率均达到最大,分别为98%、98.67%、28.6%,当TDZ浓度逐步升高时,其诱导率又有所下降。在体细胞胚诱导实验中,愈伤组织诱导阶段加入TDZ对体细胞胚的发生有抑制作用;将愈伤组织转移到不含TDZ的培养基中继代增殖后,体细胞胚的诱导率随继代次数的增加呈上升趋势;愈伤诱导阶段使用的TDZ浓度越低越利于体细胞胚的分化;在体胚诱导阶段以TDZ代替KT后,体细胞胚诱导率较低,且分化出的体胚为畸形胚。这表明TDZ虽然有利于愈伤组织的产生和生长,但不利于体细胞胚的发生。     

‘绿波’核桃叶片愈伤组织的诱导研究

本研究以"绿波"核桃试管苗幼嫩叶片为外植体,探讨暗培养时间、植物生长调节剂种类及配比等对愈伤组织的诱导影响。结果表明,暗培养时间对叶片愈伤组织的形成影响较大,暗培养2周时叶片愈伤率可达100%,暗培养时间的增加或减少会抑制叶片愈伤组织的形成,使愈伤组织变得疏松;低浓度的TDZ(2.0~4.0 mg/L)促进叶片愈伤的形成,高浓度的TDZ(8.0~10.0 mg/L)抑制叶片愈伤的形成,同时也抑制了叶片和愈伤组织的褐化,使愈伤组织的结构也变得更加疏松;低浓度的IBA(0.01~0.5 mg/L)有利于叶片愈伤组织的形成,高浓度的IBA(1.0 mg/L)不利于愈伤组织的形成。本研究结果可进一步明确影响核桃叶片愈伤组织诱导的主要因素,为容易分化出不定芽的愈伤组织的诱导研究指明方向。     

桃儿七愈伤组织培养体系的建立及鬼臼毒素含量测定

本研究利用组织培养技术研究桃儿七不同外植体、不同生长调节剂浓度配比和不同蔗糖浓度对桃儿七愈伤组织生长的影响,建立桃儿七愈伤组织增殖培养技术体系,同时采用高效液相色谱法测定桃儿七愈伤组织中鬼臼毒素含量。结果表明,桃儿七愈伤组织诱导的最佳外植体是叶柄;愈伤组织的最佳增殖培养基为Ms+ NAA0.5 mg/L + TDZ0.1mg/L + 6-BA1.0mg/L,碳源蔗糖浓度为40.0 g/L,获得疏松颗粒状生长旺盛的愈伤组织,愈伤组织中鬼臼毒素含量为1.56%,为野生桃儿七根茎中鬼臼素素含量的68.4%。因此,可通过对桃儿七愈伤组织的培养获取鬼臼毒素。     

迷迭香叶片愈伤组织诱导及再分化培养

本研究以迷迭香叶片为外植体,探索愈伤组织形成及再分化条件。结果表明:蔗糖含量较高的培养基可促进愈伤组织形成,其中以MS+蔗糖50g/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L效果最好,诱导率可达88%;愈伤组织再分化形成不定芽时,以MS+6-BA1.5mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.5mg/L效果较好,再分化率达50%;MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.5mg/L诱导不定芽增殖,增殖率可达到300%多;不定芽生根时,MS+NAA0.1mg/L效果较好,生根率可达65%。同时,研究发现,尽管外植体被消毒至无菌,但75%乙醇复合其它灭菌剂共同灭菌时,会导致外植体大量死亡。     

云南杜鹃(Rhododendron yunnanense Franch.)无菌叶片高频再生体系的建立

本研究以云南杜鹃(Rhododendron yunnanense Franch.)无菌苗叶片为材料,研究云南杜鹃叶片直接和间接再生植株的方法。结果表明:ZT是理想的云南杜鹃无菌叶片直接分化不定芽和愈伤组织分化不定芽的细胞分裂素,其中以WPM+ZT 4 mg/L+NAA 0.01 mg/L效果最好,叶片分化不定芽率达74%,平均分化不定芽数6.91个,愈伤组织分化不定芽率达76.67%;附加TDZ诱导出的愈伤组织状态好,体积大,疏松,适宜的叶片诱导愈伤组织的培养基为WPM+TDZ 0.5mg/L+2,4-D 1~2 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L,愈伤组织诱导率达91.33%以上,较好的生根培养基为1/2 WPM+IAA 1.5 mg/L,生根率达89.33%以上。研究结果为云南杜鹃遗传转化研究奠定了基础。     

深山草莓花瓣离体诱导变异株系及其品种特性

应用均匀设计法研究了影响深山草莓花瓣愈伤组织诱导及愈伤组织再分化变异植株的主要因子和水平。深山草莓花瓣愈伤组织诱导率超过65.0%以上的适宜培养基共有11个,经过组合优化后可知,培养基LS+TDZ2.06mg/L+2,4-D0.60mg/L对深山草莓花瓣愈伤组织诱导效果最好,诱导率为98.0%;其中,以培养基LS+TDZ2.20mg/L+2,4-D0.40mg/L诱导形成的愈伤组织在10个适宜的分化培养基中培养均分化出再生芽苗,优化后的最佳再分化培养基为1/2LS+TDZ2.30mg/L+KT1.38mg/L,分化率为96.3%,田间试验发现变异率高达2.77%。对10个含有不同激素和浓度配比及1个优化后的培养基诱导形成的再生芽苗生根后经5年的田间栽培观察可知,有6个性状稳定的优良变异株系。这说明深山草莓花瓣在适当激素和浓度配比的条件下可产生变异植株,并能趋向稳定性状变异。     

萝卜花药愈伤组织诱导及褐变因素初探

以萝卜为试材,研究了不同激素配比、供体基因型、光照与温度以及蔗糖浓度对花药愈伤组织诱导的影响,同时比较研究了花药愈伤组织褐变过程中几种抗氧化酶活性变化。结果如下：P403在2.0mg/L 2,4-D+1.0mg/L 6-BA+2.0mg/L KT的MS培养基中愈伤组织的诱导率最高,愈伤组织开始褐化的时间晚,抗氧化酶的活性较高;同时进行低温预处理、高温预培养和初期暗培养的协同效果较任何一种单独处理好;6%的蔗糖浓度有利于愈伤组织的诱导。     

天蓝苜蓿花药愈伤组织诱导及再生体系的建立

为获得天蓝苜蓿单倍体再生植株,本研究以野生天蓝苜蓿花药为外植体,采用正交设计L₁₆(4⁴)筛选适宜天蓝苜蓿愈伤组织诱导培养基,比较不同基本培养基及生长调节剂组合筛选适宜的分化培养基,并用1/3MS、1/2MS和MS添加不同浓度的NAA研究不定生根。结果表明:天蓝苜蓿现蕾15~25 d的花药其愈伤组织诱导效果最好,高达60.5%。4℃低温预处理2~4 d有利于愈伤组织诱导,诱导率达77.2%。适宜花药愈伤组织诱导的培养基为NB+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,诱导率达78.5%。比较不同基本培养及生长调节剂的不同组合发现,NB培养基愈伤组织分化效果优于B₅和MS,NB+NAA0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L适宜愈伤组织的分化,分化率为66.3%。不定芽在1/3MS+NAA 0.5 mg/L中培养,生根率最高,为86.55%。本研究建立了天蓝苜蓿花药培养再生体系,获得了单倍体植株,为天蓝苜蓿的育种实践及基因组学研究提供基础材料。     

高效冬枣花药愈伤组织培养体系的建立

以冬枣花药为试验材料,研究影响愈伤组织诱导、增殖和分化的因素,优化各因素建立高效的冬枣花药培养体系。结果表明:在愈伤组织诱导过程中,加入0.4~0.6 mol/L的甘露醇4℃处理1~3 d可提高愈伤组织的诱导率。最适的愈伤组织诱导培养基为:MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L TDZ+30 g/L麦芽糖,诱导率可达到69.72%。愈伤组织增殖的最适培养基为MS+0.3 mg/LNAA+1.0 mg/LTDZ+30 g/L麦芽糖;在WPM+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L TDZ+20 g/L麦芽糖时,分化率最高可达89.00%。     

铁皮石斛愈伤组织诱导研究

研究了8种不同浓度的2,4-D培养基和3种不同的培养条件对铁皮石斛愈伤组织诱导的影响。结果表明:诱导愈伤组织时,培养基以0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA及1.5 mg/L 2,4-D+20.0 g/L蔗糖+200.0 g/L马铃薯泥+2.0 g/L活性碳+10.0 g/L琼脂的培养基效果最好,在暗培养15 d后光培养的条件下诱导愈伤组织效果最好。     

宁前胡愈伤组织诱导初探

以野生宁前胡根、茎、叶为外植体对其愈伤组织诱导进行了初步研究,以期为野生宁前胡高效快速繁殖和种质资源保护提供依据.结果表明:叶片愈伤组织诱导最佳条件为NAA 0.5 mg/L+TDZ 0.05 mg/L,最高诱导率为95.56％,黑暗或低光照度以及叶片远轴面接触培养基有利于叶片愈伤组织的形成,出愈最早时间为8d;茎段愈伤组织诱导最佳条件为NAA 0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L,最高诱导率达80.00％;根愈伤组织诱导最佳条件为NAA0.5 mg/L+6-BA2.0mg/L或2,4-D 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L,最高诱导率达78.89％.     

不同诱导条件对尾巨桉愈伤组织及体胚诱导的影响

本研究以尾巨桉无性系(32-29)无菌苗茎段作为外植体,进行组织培养及植株再生研究,通过优化不同浓度的植物生长调节剂组合以及LM、1/2LM以及MS不同培养基和不同浓度蔗糖溶液、不同温度的预处理,探讨尾巨桉胚性愈伤组织诱导的适宜培养基和培养条件。结果表明,在添加了1.5 mg/L 2,4-D与1.0 mg/L6-BA的改良1/2LM培养基上,茎段外植体培养6 d后愈伤组织诱导率达96%以上。将愈伤组织接种在0.01 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA激素组合的培养基中体胚诱导率最高可达到19.5%。本研究为尾巨桉胚状体诱导及植株再生提供了借鉴与参考。     

冬枣花药愈伤组织的诱导及原生质体分离

【研究目的】研究冬枣花药愈伤组织的诱导,悬浮系的建立和培养及愈伤悬浮系原生质体的分离。【方法】以冬枣花药为试材,通过选择愈伤诱导培养基和原生质体分离所用酶的浓度找到最佳诱导和分离条件。【结论】使用1/2MS基本培养基附加TDZ0.2mg/L、NAA0.5 mg/L和 PVP2.0g/L,对诱导冬枣花药愈伤组织有较好效果;愈伤组织增殖采用培养基1/2MS+TDZ0.4 mg/L +NAA0.2 mg/L;悬浮细胞系培养采用1/2MS+TDZ0.4 mg/L +NAA0.2mg/L液体培养基;冬枣花药愈伤组织悬浮系原生质体分离时以0.6M甘露醇+0.1%MES+20~25 g/L纤维素酶,酶解时间为16h时得到的原生质体产量和活力较高。     

宫灯玉露愈伤组织诱导及快速繁殖技术探析

以宫灯玉露的叶片为外植体,采用正交试验设计,研究不同消毒时间、不同生长调节剂浓度配比对宫灯玉露愈伤组织诱导、丛芽诱导及增殖和生根的影响。试验表明:最适外植体灭菌时间为8 min,污染率为13.3%;培养基MS+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+6-BA 1 mg/L+NAA 0.1 mg/L适合诱导愈伤;培养基MS+6-BA0.5 mg/L+KT 0.1 ml/L+NAA 0.01 mg/L有利于芽诱导与增殖;培养基1/2MS+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+IBA 0.2 mg/L适宜诱导根的生成,10~15 d内可长出2~3条根;通过炼苗移栽幼苗的成活率达85%以上,从而建立了宫灯玉露工厂化育苗的组培快繁体系,为今后宫灯玉露的规模化生产提供理论与技术指导。     

不同外源激素对油棕愈伤组织诱导的影响

以油棕幼胚为外植体,以N6培养基上添加不同浓度的生长素与细胞分裂素进行愈伤组织诱导研究。结果表明,无激素的培养基上不能诱导出愈伤组织,单独加入2,4-D、IAAIBA、6-BA中N6+2,4-D110mg/L的浓度愈伤组织形成率最高,为83.75%,诱导过程中褐化现象少。N6+2,4-D110mg/L+PVP5g/L+蔗糖6%+AC0.3%培养基促进愈伤组织的诱导和生长,适合进一步继代培养。