甘肃棘豆中产苦马豆素内生真菌的分离与鉴定

【目的】确定甘肃棘豆中是否存在产生苦马豆素(SW)的内生真菌。【方法】对甘肃棘豆的内生真菌进行分离,应用薄层色谱法和气相色谱-甲基化--αD-甘露糖苷内标法分别对菌丝中SW进行检测,筛选可生成SW的疯草内生真菌;通过形态学观察,应用聚合酶链反应对5.8S rDNA-ITS序列进行扩增,并对扩增序列进行分析,构建系统发育树,对其进行种属分类。【结果】筛选出1种可以产生SW的甘肃棘豆内生真菌FEL3,气相色谱内标法测得其菌丝中SW含量为400.52μg/g。根据形态学、5.8S rDNA-ITS序列分析结果和文献报道,确定FEL3为埃里格孢属真菌。【结论】甘肃棘豆中存在生成SW的内生真菌Embellisiasp.FEL3。     

西藏3种疯草中合成苦马豆素内生真菌的鉴定

 【目的】从西藏毛瓣棘豆、冰川棘豆、茎直黄芪中分离内生真菌。【方法】应用薄层色谱法、气相色谱、气相色谱-质谱联用法检测内生真菌中的苦马豆素（swainsonine,SW）,筛选可生成SW的内生真菌;应用聚合酶链反应对真菌的ITS序列和IGS序列进行扩增,并根据ITS序列信息构建系统发育树,确定其种属分类;对IGS序列进行限制性酶切,并分析酶切产物。【结果】从3种疯草中分离到可以产生SW的4株内生真菌,各菌的形态、ITS序列的同源性与埃里格孢属真菌较为接近,系统发育分析表明4株真菌均为棘豆埃里格孢菌。ITS序列和IGS序列的限制性片段的分析表明,4株真菌遗传距离较近,但仍存在种间变异,可能为棘豆埃里格孢菌的不同亚种。【结论】本研究结果为探讨内生真菌合成SW机理研究奠定了基础,为动物疯草中毒病的防除和疯草资源的合理利用提供了新思路。     

气相色谱内标法测定南疆地区小花棘豆中苦马豆素含量

[目的]建立以甲基-α-D-吡喃甘露糖苷(me-Gal)为内标,用气相色谱法测定小花棘豆中苦马豆素含量的方法.[方法]在柱温200℃、进样口温度300℃、氢火焰离子化检测器温度280℃、高纯氮气载气压力200 kPa条件下,对苦马豆素(SW)进行气相色谱分析.[结果]在0.375～6 mg/mL SW质量浓度范围内对SW和me-Gal峰面积比值的线性关系良好,加标平均回收率为102.18;,RSD=1.724;(n=5).小花棘豆中各部位苦马豆素含量为:种子(58.09±0.48)mg/kg;叶(21.81±0.58)mg/kg;全株(19.14±0.16)mg/kg;茎(12.30±0.23 mg/kg).[结论]该方法结果准确,可用于小花棘豆中苦马豆素含量的测定.     

甘肃棘豆中降解苦马豆素内生细菌的筛选与鉴定

为研究甘肃棘豆(Oxytropis kansuensis Bunge)中降解疯草毒素——苦马豆素的内生细菌,采用选择性富集培养的方法,以苦马豆素作为唯一碳源,从甘肃棘豆内生细菌中筛选到1株苦马豆素降解菌,命名为Ab.在摇床转速为150 r·min-1、28℃条件下培养30 h,菌株Ab对质量浓度为100 mg·L-1苦马豆素的降解率为11.577 1%;延长培养时间并不能提高其降解苦马豆素的能力,但可耐受高质量浓度(1 g·L-1)的苦马豆素.通过形态学、生理生化试验和16S rDNA序列比对分析对Ab进行鉴定,结果表明,菌株Ab为革兰阴性短小杆菌,在LB平板上菌落呈圆形,中心凸起,边缘整齐,乳白色,表面光滑,属于短波单胞杆菌属(Brevundi monas),与缺陷短波单胞菌(Brevundi monas diminuta)同源性为100%.说明甘肃棘豆中存在降解苦马豆素的内生细菌Brevundi monas diminutaAb;降解苦马豆素的内生细菌可能与产生苦马豆素的内生真菌共同维持疯草中苦马豆素的动态平衡.     

苦马豆素对小鼠肝脏抗氧化功能的影响

[目的]探讨苦马豆素对小鼠肝脏抗氧化功能的影响,进一步揭示苦马豆素的毒性作用机理.[方法]将64只昆明种小鼠随机分为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组,将小花棘豆全草粉碎后,按Ⅰ组添加15;(含苦马豆素30 mg/kg)、Ⅱ组添加30;(含苦马豆素60 mg/kg)、Ⅲ组添加45;(含苦马豆素90 mg/kg)的比例制作颗粒饲料,饲喂至典型中毒症状出现.攻毒第14、28、42、63 d每次每组随机采集4只小鼠的肝脏,检测SOD、GSH-Px、CAT、NOS活性及MDA、NEFA、·OH、NO和Glu含量的变化.[结果]与正常对照相比,试验组小鼠肝脏SOD、GSH-Px、CAT等抗氧化物酶的活性极显著下降(P＜0.01),MDA、NEFA、·OH、NO含量极显著上升(P＜0.01),Glu含量极显著下降(P＜0.01).[结论]苦马豆素对小鼠肝脏抗氧化功能有显著影响,而且具有一定的时间和剂量效应关系,长期低剂量摄入苦马豆素可引起小鼠不同程度的肝损伤.     

新疆生产建设兵团科技进步三等奖新疆醉马草（小花棘豆）毒性成分新疫苗的研制

成果简介：本成果改进了小花棘豆毒性成分苦马豆素的提取装置和方法；通过动物试验，测定了苦马豆素的毒性。并探讨了苦马豆素的作用机理：应用现代分子生物学及免疫化学方法，研制了小花棘豆毒性成分疫苗。其中对苦马豆素中毒机理有新的发现；通过疫苗预防、抗体治疗和改进饲喂方法，建立了一整套小花棘豆安全利用方案；分离得到了7种生物碱在国内外未见报道：发现了小花棘豆黄酮在抗氧化、保肝、抗疲劳等方面的新应用。小花敕豆是新疆危害最严重的毒草之一，本成果对小花棘豆的毒性作用、中毒机理和防治措施等进行了明确阐述，为小花棘豆的开发利用提供了依据。本成果具有较高的应用价值和广泛的应用前景。     

小花棘豆中毒对大鼠睾丸α-甘露糖苷酶的影响

旨在探讨小花棘豆对大鼠睾丸α-甘露糖苷酶(AMA)的影响,揭示小花棘豆的毒性作用机理。将72只大鼠随机分为4组,即对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。将小花棘豆全草粉碎后,按Ⅰ组添加150g/kg(含苦马豆素30mg/kg)、Ⅱ组添加300g/kg(含苦马豆素60mg/kg)、Ⅲ组添加450g/kg(含苦马豆素90mg/kg)的比例制作混合饲料,饲喂至典型临床症状出现为止。攻毒后每7d每组随机采集2只大鼠的睾丸,检测大鼠睾丸AMA活性及表达的变化。结果显示,在63d的试验过程中,试验组及对照组大鼠睾丸高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(AMA1)和溶酶体α-甘露糖苷酶(AMA2)均有表达,但各试验组表达转录水平与对照组差异显著,试验Ⅰ组大鼠AMA1和AMA2的表达与对照组差异不显著(P0.05),但试验Ⅲ组大鼠AMA1和AMA2的表达均显著低于对照,随着试验的进行,抑制效果愈加明显。说明,小花棘豆中毒可影响大鼠睾丸AMA的活性及其基因的转录表达。     

沙地云杉内生真菌分布

[目的]明确沙地云杉内生真菌的种群分布。[方法]利用传统分离培养方法,分离、培养、鉴定沙地云杉内生真菌的种群组成。[结果]从沙地云杉各部位样品中共分离到内生真菌146株,其中有21株未产孢,经显微镜形态观察鉴定,产孢的125株内生真菌分属于21个属,其中交链孢属为优势属,分离频率为34.93%。[结论]沙地云杉不同树龄、不同部位分离获得的内生真菌在数量、分布和种群上存在一定差异。     

合欢内生真菌诱导产孢研究

[目的]寻找促使植物内生真菌无性菌丝产生孢子的方法,为其鉴定提供依据。[方法]从采集到的合欢组织中分离、纯化得到5株形态稳定的内生真菌,对它们进行诱导产孢试验,并对所产生的孢子进行鉴定。[结果]5株内生真菌在常规培养条件下均不产生分生孢子。通过不同类型培养基及不同pH值条件诱导真菌产孢方法,使其中3株真菌（1、3、5号菌）不同程度产生了分生孢子,通过分生孢子的形态鉴定了合欢内生真菌1、3、5号菌分别属于头孢霉属（Cephalosporium）、镰孢属（Fusarium）和头孢霉属（Cephalosporium）。[结论]试验证明通过诱导内生真菌产孢的方法并借助形态学依据来鉴定无性的内生真菌是可行的。     

中国油菜内生真菌一新记录种—垣孢埃里砖隔孢

报道了一个中国新记录种—垣孢埃里砖隔孢(EmbellisiachlamydosporaSimmons),该种为从油菜(BrassicanapusL.)中分离到的一种内生真菌。文中对垣孢埃里砖隔孢的形态特征作了描述,并附有形态图。     

小花棘豆及苦马豆素研究文献分析

以《CNKI—中国期刊全文数据库》和《万方数据库》为调查对象,以小花棘豆、苦马豆素为检索词,排除非小花棘豆、苦马素提取等相关文献,对1979—2010年32年来我国对小花棘豆及苦马豆素研究文献的数量、研究领域、文献来源进行分析,初步总结了小花棘豆及苦马豆素研究的主要指标和发展趋势。     

薄荷中内生真菌的筛选和初步研究

[目的]从薄荷中筛选出能产生活性物质的内生真菌。[方法]采用组织分离法从薄荷中分离出3株不同的内生真菌P-1、P-2、P-3,对其进行不同pH值梯度培养,运用滤纸片法和对峙培养法,研究它们的抗菌活性。[结果]3株内生真菌在pH值6.5~7.5出现生长最高峰,在pH值4.0~8.5都可以生长,酸碱适应性很强,其中P-3的适应性最强。P-1和P-2对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌都有较强的抑制能力,而P-3只对大肠杆菌有很微弱的抑制能力。3株内生真菌对苹果锈病病原菌、苹果白粉病病原菌、苹果落叶病病原菌都有抑制作用,其中P-1的抑制能力较强。[结论]该研究获得了具有抗菌活性的内生真菌。     

蛇足石杉体内抑制乙酰胆碱酯酶活性物质的内生真菌的分离

[目的]从蛇足石杉体内分离筛选出具有体外抑制乙酰胆碱酯酶活性的内生真菌。[方法]取野外采集的蛇足石杉的叶、茎和根进行表面消毒后接种于PDA培养基,分离出内生真菌后进行摇瓶发酵,超声提取其发酵产物,以DTNB法检测其发酵产物在体外抑制乙酰胆碱酯酶的活性。[结果]从根、茎、叶中分离得到194株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中发酵后,对内生真菌发酵提取液进行体外AChE抑制活性检测;共有31株内生真菌显示出体外AChE抑制活性,抑制活性较强的有13株,抑制率在50.2%～80.5%。其中从蛇足石杉茎部位分离得到9株,叶部位分离得到4株。[结论]从蛇足石杉体内可分离出内生真菌,该内生真菌的发酵产物在体外有较强的抑制乙酰胆碱酯酶活性,这可能是寻找乙酰胆碱酯酶抑制药物的有效途径之一。     

月季内生真菌分离及抗黑斑病活性菌株的筛选

[目的]分离并筛选具有抗黑斑病活性的内生真菌。[方法]从陕西省西安、咸阳、宝鸡、渭南4个地点采集各种类型的健康月季品种,从茎和叶组织中分离内生真菌并通过转接2～3次进行纯化,采用改良的打孔法筛选对黑斑病病原菌有拮抗作用的内生真菌。[结果]共分离获得月季内生真菌67株,其中咸阳采集的样品内生菌的定殖率和分离率最高;月季的茎段内生真菌的定殖率和分离率明显高于叶片。从67株内生真菌中筛选出3株具有抗黑斑病活性的内生菌菌株,并且全部来自宝鸡。[结论]为进一步筛选生防真菌的候选菌株及环境友好型真菌生物防治奠定了基础。     

新疆小花棘豆总黄酮提取工艺的研究

[目的]研究新疆小花棘豆总黄酮的提取工艺条件.[方法]以小花棘豆总黄酮的含量为指标,以芦丁为对照品,比较超声波协助提取法、热回流提取法和振荡浸提法三种方法,再采用正交设计对影响小花棘豆提取工艺的溶剂浓度、料液比、超声时间三个因素进行优化筛选.[结果]超声波协助提取法的得率最高,提取的最佳工艺条件为100;甲醇,料液比1∶15,超声时间90 min.[结论]超声波协助提取法效果最好,总黄酮得率最高,通过优选得到的工艺简便、稳定可行.     

苍耳提取液与植物内生真菌抗菌活性研究(英文)

[Objective] The study was aimed to provide theoretical foundation for developing a new fungicide with high activity,low toxicity and low residua.[Method] Based on the plant growth rate and inhibition zone methods,the antifungal activity of extracts of every organ of Xanthium sibiricum,the fermentation liquid of endophytic fungi MC4-23,and the extract of mycelium were tested with six kinds of pathogenic fungi and three kinds of pathogenic bacteria respectively.[Result] The extract of every organ of Xanthium sibiricum,the fermentation liquid of endophyic fungi MC4-23,and the extract of mycelium all had antifungal activities.The acetone extracts of Xanthium sibiricum had stronger antifungal activities than the ethanol extracts of Xanthium sibiricum.The extracts of leaf have the strongest antifungal activities against fungi and bacteria.The inhibition rates of the six pathogenic fungi were all above 47.8%,and the inhibition diameters of the three pathogenic bacteria were all above 0.5 centimeter.The fermentation liquid of endophytic fungi also had strong activities against the fungi and bacteria.The inhibition rates of the six pathogenic fungi were all above 68.1%.The extracts of root of Xanthium sibiricum and the mycelium of endophytic fungi were all had antifungal activities.[Conclusion] Xanthium sibiricum and endophyic fungi MC4-23 had great value of development and utilization.     

Preliminary Studies on Antifungal Activity of Xanthium sibiricum and the Endophytic Fungi

[Objective] The study was aimed to provide theoretical foundation for developing a new fungicide with high activity,low toxicity and low residua.[Method] Based on the plant growth rate and inhibition zone methods,the antifungal activity of extracts of every organ of Xanthium sibiricum,the fermentation liquid of endophytic fungi MC4-23,and the extract of mycelium were tested with six kinds of pathogenic fungi and three kinds of pathogenic bacteria respectively.[Result] The extract of every organ of Xanthium sibiricum,the fermentation liquid of endophyic fungi MC4-23,and the extract of mycelium all had antifungal activities.The acetone extracts of Xanthium sibiricum had stronger antifungal activities than the ethanol extracts of Xanthium sibiricum.The extracts of leaf have the strongest antifungal activities against fungi and bacteria.The inhibition rates of the six pathogenic fungi were all above 47.8%,and the inhibition diameters of the three pathogenic bacteria were all above 0.5 centimeter.The fermentation liquid of endophytic fungi also had strong activities against the fungi and bacteria.The inhibition rates of the six pathogenic fungi were all above 68.1%.The extracts of root of Xanthium sibiricum and the mycelium of endophytic fungi were all had antifungal activities.[Conclusion] Xanthium sibiricum and endophyic fungi MC4-23 had great value of development and utilization.     

苍耳提取液与植物内生真菌抗菌活性研究(英文)

[Objective] The study was aimed to provide theoretical foundation for developing a new fungicide with high activity,low toxicity and low residua.[Method] Based on the plant growth rate and inhibition zone methods,the antifungal activity of extracts of every organ of Xanthium sibiricum,the fermentation liquid of endophytic fungi MC4-23,and the extract of mycelium were tested with six kinds of pathogenic fungi and three kinds of pathogenic bacteria respectively.[Result] The extract of every organ of Xanthium sibiricum,the fermentation liquid of endophyic fungi MC4-23,and the extract of mycelium all had antifungal activities.The acetone extracts of Xanthium sibiricum had stronger antifungal activities than the ethanol extracts of Xanthium sibiricum.The extracts of leaf have the strongest antifungal activities against fungi and bacteria.The inhibition rates of the six pathogenic fungi were all above 47.8%,and the inhibition diameters of the three pathogenic bacteria were all above 0.5 centimeter.The fermentation liquid of endophytic fungi also had strong activities against the fungi and bacteria.The inhibition rates of the six pathogenic fungi were all above 68.1%.The extracts of root of Xanthium sibiricum and the mycelium of endophytic fungi were all had antifungal activities.[Conclusion] Xanthium sibiricum and endophyic fungi MC4-23 had great value of development and utilization.     

产甘草苷内生真菌HGE5的鉴定及抑菌活性研究

[目的]研究甘草内生真菌HGE5及其活性代谢产物,为深入开发利用该菌株提供依据。[方法]选取12种受试致病菌,测定内生真菌HGE5的抑制活性,并采用形态特征观察法及r DNA ITS序列同源性分析对内生真菌HGE5进行鉴定,利用HPLC法对HGE5发酵液进行分析。[结果]甘草内生真菌HGE5对8种受试致病菌有较强的抑菌作用,内生真菌HGE5为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);该菌发酵液中含有甘草苷。[结论]HGE5是甘草苷产生菌,该菌的获得可为甘草苷成分的生产提供新方法。