驻甘肃部队人畜弓形虫病的血清学调查

本调查采用中国农科院兰州兽医研究所提供的间接血凝诊断液及试验疗法,对驻甘肃部队的14个团以上单位共1852份人畜血清进行了弓形虫抗体检测,检出阳性血清164份,阳性检出率平均为8.86％。其中检测人血清511份,检出阳性28份,阳性检出率为5.48％;检测猪血清533份,检出阳性135份,阳性检出率为25,33%;检测兔血清55份,检出阳性1份,阳性检出率为1.82%;检测马(骡)血清280份,牛血清322份,羊血清151份,均未检出阳性。     

McAb·ELISA间接法对毛皮动物空肠弯曲菌快速检测的研究

用McAb作第一抗体,建立快速检测毛皮动物空肠弯曲菌的ELISA间接法。该方法具有敏感、特异、快速、简便等特点,可检出每毫升含10个菌的24小时培养标木,不与鳗弧菌等28种参照菌及混合菌液发生交叉反应,并在27小时内报告结果。对狐等5种毛皮动物265份肛拭粪便标本进行检测,其总阳性检出率为31.3％,与常规分离鉴定法的符合率为97.5％,相差不显著(P>0.05)。     

检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA方法。应用该法检测从江苏、安徽、山东、浙江4省部分地区收集到的1089份血样,对华东地区猪乙型脑炎血清流行病学进行初步调查。结果JEV抗体阳性率为68.2%,其中,种猪JEV抗体阳性率为82.1%,商品猪JEV抗体阳性率为62.6%。从中随机抽取135份血样与国产商品化试剂盒进行比较,间接ELISA方法的特异性和敏感性分别为92%和96.4%,2种方法的符合率为95.6%;与NS1蛋白包被建立的ELISA比较,两者的符合率为97.7%;同时,本法的阳性检出率显著高于临床普遍使用的乳胶凝集试验结果。由此表明,本试验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于大规模猪乙型脑炎血清流行病学调查。     

猪瘟三种快速诊断方法的比较

本试验运用电镜负染、荧光抗体染色、间接－ELISA三种方法对新疆南疆地区收集的7份猪瘟RT－PCR阳性病料进行了检测，发现：电镜负染法检出阳性病料2份，荧光抗体染色法检出阳性病料6份、间接－ELISA法检出阳性病料6份。结果表明荧光抗体染色、间接－ELISA都有很好的敏感性和特异性，其中间接－ELISA法可作为基层对猪瘟进行快速诊断的首选方法。     

东莞市5种猪病的血清学调查

在东莞市29个养猪场和26个屠宰场共抽取了989份猪血清,应用正向间接血凝试验对猪瘟、弓形虫、衣原体抗体进行了检测,应用酶联免疫吸附试验对伪狂犬病gE抗体进行了检测,应用虎红平板凝集试验对布鲁菌病抗体进行了检测。养猪场猪瘟的免疫合格率是84．839／6,弓形虫抗体阳性检出率4．98％,衣原体抗体阳性检出率10．66％,伪狂犬病gE抗体阳性率41．479／6。屠宰场的猪瘟免疫合格率是30．51％,弓形虫抗体阳性检出率1．76％,衣原体抗体阳性检出率2．47％,伪狂犬病gE抗体阳性率14．99％。布鲁菌病抗体均未检出阳性。     

SPF鸡新城疫非特异性HI抗体的血涂片鉴别研究

试验以某SPF鸡场的30份HI抗体效价疑似阳性血清为研究对象,建立了快速准确的血涂片鉴别诊断法。以间接免疫荧光法进行验证,结果提示血涂片法与间接免疫荧光法的结果完全一致,证明了血涂片法可以用于新城疫非特异性HI抗体的鉴别诊断,具有简单、方便的优点。     

云南犬莱姆病血清抗体的调查研究

１９９９年采集云南地区１５６份犬血清进行间接免疫荧光法（ＩＦＡ）检测莱姆病血清抗体，在１５６份血清标本中检出≥１：６４的阳性标本５４份，阳性率为３４．６２％。调查首次发现云南地区存在犬莱姆病。     

甘肃省猪衣原体病的血清学调查

对全省未进行过猪衣原体病免疫的11个地市的868份猪血清应用间接血凝(IHA)试验进行抗体检测，结果在11个地市中均检出抗体阳性猪血清，阳性检出率平均为34.91％。     

检测猪捷申病毒抗体的间接免疫荧光方法的建立与初步应用

为建立检测猪捷申病毒(PTV)抗体的方法,本研究利用PTV-8 Jilin/2003株为杭原,建立了检All PTV杭体的的间接免疫荧光技术(IFA)方法.该方法工作浓度分别是:一抗最适稀释度为1:10:FITC标记二抗最适稀释度为1:100;二杭中伊文氏兰最适稀释度为1:30 000.敏感性试验、特异性试验表明该杭原板可以检出包含PTV-8型和1型在内的的所有PTV阳性血清,方法敏感、特异.与SN符合率94.0.用该方法对黑龙江、山东、天津和河南等地的1 500份临床血清样品进行检测,阳性检出率为55.8,表明我国猪群中PTV的感染已经非常普遍.该方法做为PTV的血清学诊断新技术,为开展PTV分子流行病学调查莫定了基础.     

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒双抗体夹心Dot-ELISA检测方法的建立

采用辛酸-硫酸铵法提取兔抗牛病毒性腹泻-黏膜病毒(BVDV)高免血清中的免疫球蛋白IgG,辣根过氧化物酶标记提纯后IgG,建立了检测BVDV抗原的双抗体夹心斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)法。结果显示,抗体最佳包被量为300μg/mL,酶标记抗体的最适浓度为1∶50倍稀释,以5%牛血清作为封闭液、封闭45min效果最佳,抗原最小检出量是1.34μg/mL。应用建立的检测方法对河北省内78份腹泻奶牛血样进行了检测,阳性检出率为57.69%;经卡方检验分析,建立的Dot-ELISA与琼脂扩散(AGP)法相比较,阳性检出率差异显著。试验证明,该方法具有简便快速、特异性强、重复性高的优点,适合于基层兽医的检测诊断。     

斑点金标免疫渗滤新技术检测家畜血吸虫病的效果试验

斑点金标免疫渗滤新技术(简称金标法)检测家畜血吸虫病抗体,在本省进行了特异性、敏感性、符合率等试验.金标法能检出人工感染犬血吸虫14 d后的血吸虫病抗体,检出率为100%,可用于血吸虫病早期诊断.粪孵100头份血吸虫病阳性的牛血纸,用金标法检测全部为阳性,阳性符合率为100%;在非疫区的2个县分别采牛血纸100份,用金标法进行检测,未查出血吸虫病阳性牛,阴性符合率为100%.在金标法检测4 000份牛血纸,检出阳性牛为129头,再对这129头牛采粪孵化,有血吸虫毛蚴的牛128头,金标法与病原学检查法阳性符合率为99.2%(99%～100%).在本省54个血防疫区县推广应用,取得了显著的社会经济效益.     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性鼻炎抗体

本文应用聚苯乙烯塑料微量滴定板作为固液载体，辣根过氧物酶标记的羊抗鸡IgG为第二抗体，邻苯二胺为底物建立检测鸡传染性鼻炎抗体的间接酶联免疫吸附试验。对大庆市A、B、C三个种禽场的鸡群抽样采血检测，结果在被检的154份血清样品中，IC抗体阳性血样为35份，阳性检出率为22．8％。该方法具有快速、简便、敏感、特异等优点，适合于临床诊断和大批量样品检验。     

检测伪狂犬病病毒双抗体夹心间接ELISA方法的建立与应用

以猪伪狂犬病病毒（PrV）Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体，纯化的抗PrV IgG为检测抗体，建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为，单克隆抗体576株的包被浓度为12．2μg／mL，IgG的工作浓度为16．0μg／mL，对PrV的检测灵敏度达15．6ng（0．156μg／mL），与乙型脑炎病毒（JEV）、猪瘟病毒（HCV）、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）和猪流感病毒（SIV）等无交叉反应。批间和批内变异系数较小，分别为6．39％和4．1％。应用本方法对人工感染PrV的40日龄仔猪组织进行检测，肺和脑PrV抗原检出率最高，其次是脾、心、肝和肌肉。应用该方法和PrV对159份临床样本进行平行检测，发现二者的符合率可达到77．4％，比PCR敏感。实验结果表明：双抗体夹心间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点，可广泛应用于动物组织中PrV的检测。     

青海省海西州改良绒山羊衣原体病血清学诊断

采集青海省海西州部分地区改良绒山羊血清样品561份,用间接血凝试验检测衣原体抗体.结果检出阳性123份,平均阳性检出率为21.93%.     

羊布氏菌病iiELISA抗体检测方法的建立及应用

建立了以布鲁氏菌脂多糖(LPS)为抗原,用于检测羊布鲁氏菌IgG抗体的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)方法,并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性、符合率进行了评价.结果表明,iELISA比SAT和RBPT的敏感性高60 ～ 150倍;该方法特异性强,可有效区分布鲁氏菌与大肠杆菌O157和都柏林沙门氏菌的IgG抗体,但尚无法与小肠结肠炎耶尔森菌O9的IgG抗体相区分;批间重复性试验和批内重复性试验变异系数分别为1.1％～9.8％,2.9％ ～9.8％,表明该方法具有良好的可重复性;保存期试验显示包被好的酶标板在4℃保存11个月,检测结果稳定.iELISA和RBPT检测385份来自不同地区的血清结果表明,阳性符合率为95.14％,阴性符合率为96.28％,对1932份临床血清样本的检测结果与RBPT比较,总符合率为91.7％,证明此方法可以应用于临床羊布鲁氏菌病的筛查.     

用微量间接血凝法诊断牛贝诺孢子虫病的研究

本试验是在1983年研制成功牛贝诺孢子虫抗原及初步应用于临床的基础上,进一步用-20℃条件下保存30个月的病牛皮肤制备牛贝诺孢子虫抗原,对应用微量间接血凝试验诊断牛贝诺孢子虫病进行了扩大复试。结果表明,15份健康牛血清全部为阴性;140头(份)带虫牛血清有133头(份)呈阳性反应,阳性符合率达95.0％;49头类症病牛血清,除1份肉孢子虫血清效价为1:40外,其余均为阴性;对疫区的496头被检牛,通过临床、组织学以及眼巩膜包囊等检查,检出阳性牛33头,检出率为6.65％,通过间接血凝试验检出阳性牛84头,检出率达16.94％,后者检出率明显高于前者。由此认为,间接血凝试验对牛贝诺孢子虫病有很高的检出率和特异性,可用于临床诊断和疫区普查。     

甘肃省猪衣原体病的血清学调查

1998～2000年，对全省未进行过猪衣原体病免疫的11个地州市的868份猪血清应用间接血凝(IHA)试验进行抗体检测。结果在11个地市中均检出抗体阳性猪血清，全省猪衣原体病的阳性检出率平均为34．91％，阳性检出率最高达52．48％，最低13．95％。     

应用间接ELlSA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1：80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1．5％,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1．30％。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。     

检测PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法的建立

用大肠杆菌BL21（DE3）pLysS表达PRRSV重组N蛋白作为包被抗原,建立检测猪群PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法,并对临床上采集的256份猪血清样本进行检测,结果66份呈阳性,用IDEXXPRRSV抗体检测试剂盒检测,检出的阳性血清为63份,两者的符合率为98.8%。Western blot检测结果58份阳性,两者的符合率为96.9%。试验结果表明,本试验所建立的间接阻断ELISA方法具有良好敏感性和特异性,可用于PRRS流行病学调查和疾病的诊断。     

ABC-ELlSA技术在禽网状内皮组织增殖病抗体检测上的应用

建立了检测禽网状内皮组织增殖病(KE)抗体的ABCELISA技术,并用此法检测250份鸡血清、80份鸭血清、60份2日龄肉杂鸡血清,阳性检出率分别为17.6％、21％、1.69％。采用ABC-ELISA、间接ELISA和IF三种方法对REV抗体进行检测比较表明,ABC-ELISA最敏感,其敏感性分别为后二种方法的4倍和16倍。