昆虫杆状病毒及其应用研究进展

杆状病毒是一类具有双链、环状DNA的病毒，因其在生物防治方面具有宿主专一性强、对人畜无害、对环境安全和可自然传播等特点，而得到人们广泛的关注。本文概述了昆虫杆状病毒特征和作为表达系统的应用。野生型昆虫杆状病毒具有杀虫速度慢、稳定性差和宿主域窄等缺点，因此本文还介绍了通过基因工程改造野生型昆虫杆状病毒，以提高其作用效率和扩大杀虫谱的方法，同时对杆状病毒的应用前景做出了展望。     

昆虫杆状病毒基因组学研究进展

杆状病毒(Baculoviruses)是一类在自然界中专一性感染节肢动物的共价闭合双链环状DNA病原微生物。由于杆状病毒的宿主特异性高,其作为无公害生物杀虫剂在生物防治方面发挥重大作用。此外,杆状病毒已被开发成为高效的真核表达载体,广泛应用于药物研发、疫苗生产等领域,并作为基因治疗载体用于疾病的基因治疗。综述了获得全基因组序列的昆虫杆状病毒类别及其序列特征,以及昆虫杆状病毒基因组中的主要功能基因,包括RNA转录相关基因、DNA复制相关基因、结构蛋白基因等,也对其应用做了较为详尽的阐述。     

米满对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的增效作用研究

研究了以甜菜夜蛾为靶标害虫时,米满对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的作用效果。结果表明,在作用于甜菜夜蛾幼虫时,6.67mg/kg米满对AcNPV有显著增效作用,其增效作用表现为增加杀虫毒力和提高杀虫速度,可使病毒对3龄和4龄幼虫的毒力分别提高0.31倍和2.62倍,杀虫速度分别提高10.9%和6.9%,使总杀虫速度提高25%和20.4%。     

昆虫杆状病毒组学研究进展

杆状病毒(baculoviruses)是一类专性感染无脊椎动物的共价闭合双链环状DNA昆虫病毒。由于杆状病毒对环境和人畜无害,其作为生物农药在生物防治方面发挥着重大作用。此外,杆状病毒还可作为一种真核表达载体,广泛用于药物研发、疫苗生产,以及作为基因转移载体用于基因治疗等方面。综述了杆状病毒的基因组学及蛋白质组学研究进展,对阐明病毒的感染机制具有重要意义,并且在此基础上可针对性地对其进行分子改良或开发高效的生物增效剂。     

小菜蛾颗粒体病毒杀虫剂研究与应用进展

小菜蛾颗粒体病毒（ Plutella xylostella granulovirus, PxGV）隶属杆状病毒科颗粒体病毒属,对小菜蛾具有较强的致病和杀灭作用,可以加工成环保安全的生物杀虫剂,用于防治小菜蛾。从病毒生物杀虫剂应用的角度,综述了PxGV的应用进展及影响其稳定性的主要因素,包括温湿度、pH值和紫外线等,并对其发展前景进行了展望。     

昆虫激素与杆状病毒

近年来,提高杆状病毒表达载体系统外源基因表达量是一研究热点。本文综述了昆虫激素对杆状病毒寄主蛋白质合成的调控作用,杆状病毒基因组内egt基因的结构功能和表达,并综述了昆虫激素与杆状病毒之间的相互影响,以现有试验结果为依据,提出了利用外源昆虫激素提高杆状病毒表达载体系统表达量的途径。     

杆状病毒的生态学和流行病学研究进展

杆状病毒作为杀虫剂应用,已成为生物防治中不可缺少的环节,也是一类重要的生物防治因子,但杆状病毒相对低的毒力和较长的杀虫时间是制约其推广应用的原因之一.文中就杆状病毒与宿主的关系,杆状病毒在环境中的存活、滞留与扩散等方面的流行病学研究进展做一总结.     

猪流行性腹泻病毒S1-NTD蛋白表达及其免疫原性研究

【目的】在昆虫细胞中表达猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) S1-NTD蛋白,研究其免疫原性,为基于PEDV S蛋白的基因工程亚单位疫苗的研究奠定基础。【方法】PCR扩增PEDV S1-NTD基因,构建其重组表达质粒pFastBac Dual PEDV S1-NTD和重组穿梭质粒Ac-PEDV S1-NTD。将Ac-PEDV S1-NTD转染sf9昆虫细胞,利用昆虫杆状病毒表达系统制备重组杆状病毒rvAcPEDV S1-NTD。将P2代重组杆状病毒感染sf9细胞,Western blot鉴定重组蛋白的表达,空斑试验测定重组杆状病毒的滴度。在此基础上,分别以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.1,1和3的P2代重组杆状病毒感染sf9细胞,并在感染后1,2,3,4和5 d收集细胞,通过Western blot和空斑试验分别检测目的蛋白的表达量和重组杆状病毒的增殖情况。将MOI为0.1的P3代重组杆状病毒皮下注射免疫BALB/c小鼠,每隔2周免疫1次,共免疫3次,以注射PBS、空载体Bacmid和PEDV商业疫苗为对照组,于首免后不同时间采集血液分离其血清,ELISA法检测血清中PEDV特异性抗体的水平;于首免后35 d剖取小鼠脾脏,分离其淋巴细胞;PEDV刺激后,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖情况。【结果】PCR扩增获得了约738 bp的PEDV S1-NTD基因;成功构建了重组表达质粒pFastBac Dual PEDV S1-NTD、重组穿梭质粒Ac-PEDV S1-NTD和重组杆状病毒rvAcPEDV S1-NTD。利用杆状病毒表达系统在sf9细胞内成功表达了重组PEDV S1-NTD蛋白,且杆状病毒以MOI为1感染sf 9细胞后在第3天蛋白表达量达到最高。在首免后35 d,重组杆状病毒免疫组小鼠血清效价达到最高值,为1∶5 000,与商业疫苗组效价一致;淋巴细胞增殖试验表明,重组杆状病毒rvAcPEDV S1-NTD免疫组小鼠脾淋巴细胞对PEDV的刺激也发生了显著增殖(P0.05),而PBS和空载体Bacmid对照组淋巴细胞未发生明显增殖(P0.05)。【结论】成功构建了重组杆状病毒rvAcPEDV S1-NTD,在昆虫细胞中成功表达了PEDV S1-NTD蛋白,且具有较好的免疫原性。     

O型口蹄疫病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗原性鉴定

为构建并表达O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的空衣壳蛋白的重组杆状病毒并鉴定其抗原性.以质粒pMD19-P12A3C为模板,扩增出编码O型FMDV衣壳蛋白前体P12A及其蛋白酶3C的P12A3C基因,插入至杆状病毒转移载体pFast-BacDual PH启动子下,构建出重组转移载体pFastBacDual-P12A3C,并转化DH10BacTM大肠杆菌感受态细胞,构建重组转座子Bacmid-P12A3C,将其转染Sf9细胞,获得表达O型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒rBac-P12A3C.增殖重组杆状病毒然后用其感染Sf9细胞,最后通过间接免疫荧光检测外源蛋白的表达.结果表明,表达产物能够被O型FMDV VP1多克隆抗体识别,并具有良好的反应原性,表明表达O型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒rBac-P12A3C构建成功.该研究为进一步研究O型FMDV空表壳的体外组装提供前期实验材料,并为后期研制出口蹄疫的基因工程亚单位疫苗奠定基础.     

基孔肯雅病毒样颗粒的制备

为制备高纯度、均一的基孔肯雅病毒的病毒样颗粒,将基孔肯雅病毒的结构蛋白基因序列(C-E3-E2-6K-E1)人工合成后克隆至杆状病毒-昆虫细胞表达载体中;重组质粒转化DH1OBac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组杆状病毒杆粒;重组杆状病毒杆粒转染ExpiSf9昆虫细胞,包装获得重组杆状病毒,并再次感染ExpiSf9昆虫细胞表达基孔肯雅结构蛋白;通过细胞超薄切片验证杆状病毒的产生,并用流式细胞仪测定病毒滴度;免疫荧光、蛋白免疫印迹分析目的蛋白的表达,透射电镜鉴定病毒样颗粒的形成;最后,通过蔗糖密度梯度离心纯化病毒样颗粒.结果表明:成功构建了含基孔肯雅病毒结构蛋白的重组杆状病毒杆粒,获得了高滴度的重组杆状病毒,重组杆状病毒表达了基孔肯雅病毒的结构蛋白,结构蛋白自组装成60～70 nm的颗粒.这一研究通过昆虫杆状病毒表达系统成功制备了纯度高和均一性好的基孔肯雅病毒样颗粒,为基孔肯雅病毒的诊断试剂和疫苗研发奠定了基础.     

计算机病毒的预防和杀毒策略

针时计算机病毒的种类，常见的传播方式，命名规则以及命名解释进行了介绍，并根据其传播方式，介绍了相应的防毒措施和有效的顽固性病毒杀毒策略。按照所介绍的知识，能够防止绝大部分病毒时网络计算机的入侵，并能够在杀毒软件无效的情况下，对顽固性病毒进行彻底地查杀。     

电子阅览室计算机病毒的防治

本文从电子阅览室计算机病毒的传播途径、病毒的查杀、系统的恢复等方面阐述了电子阅览室计算机病毒的防范与查杀。     

吉林省主要大豆品种慢发及耐花叶病性鉴定

对吉林省主推大豆品种及大豆花叶病(SMV)鉴别品种慢发及耐花叶病性进行了接种鉴定。结果表明：“铁丰18号”和“吉林21号”具有较好的耐花叶病性和慢发抗性。     

Degradation of outer membrane protein A in Escherichia coli killing by neutrophil elastase

In determining the mechanism of neutrophil elastase (NE)-mediated killing of Escherichia coli, we found that NE degraded outer membrane protein A (OmpA), localized on the surface of Gram-negative bacteria. NE killed wild-type, but not OmpA-deficient, E. coli. Also, whereas NE-deficient mice had impaired survival in response to E. coli sepsis, as compared to wild-type mice, the presence or absence of NE had no influence on survival in response to sepsis that had been induced with OmpA-deficient E. coli. These findings define a mechanism of nonoxidative bacterial killing by NE and point to OmpA as a bacterial target in host defense.     

靶向甲型流感病毒血凝素的人源单克隆抗体研究进展

甲型流感病毒感染性强,宿主广泛,主要感染禽类,其次为哺乳动物。当跨物种传染事件发生时,有可能造成流感大流行,因此,对病毒实施及时有效的监控,以及研发抗流感病毒药物刻不容缓。流感病毒表面的糖蛋白血凝素在病毒入侵宿主细胞的过程中发挥了关键的作用,可作为单克隆抗体药物的主要靶点。针对血凝素的单克隆抗体能够有效抑制病毒传播,保护宿主。因此,本文综述了目前报道的针对甲型流感病毒血凝素糖蛋白的人单克隆抗体,为后续抗流感药物的研发提供新的思路和展望。     

瓜藤天牛发生危害规律及控害技术

瓜藤天牛Apomecyna saltator (Fabricius)，在安徽省年发生1～2代，以1代危害为主，自然寄主为葫芦科植物；幼虫钻蛀寄主藤蔓为害；防治应坚持冬季藤蔓处理压低越冬基数为基础，药剂包裹蛀孔杀虫为重点，辅助以人工捕捉成虫和刺杀幼虫的综合治理策略。     

梨眼天牛的生物学特性观察及其防治

梨眼天牛(Bacchisa Fortunei)在宁夏彭阳2 a发生1代,以老熟幼虫在枝条内越冬,以幼虫危害本质部、韧皮部.翌年4月上旬开始危害,5月下旬至6月上中旬成虫羽化、交配、产卵.幼虫孵化后在皮下取食危害.对该虫可采用捕捉成虫、刮除虫卵、用铁丝刺杀幼虫、虫道注药的方法防治.掌握了该害虫的生活史、生活习性、危害症状,为准确、有效防治提供了科学依据.     

Vital involvement of a natural killer cell activation receptor in resistance to viral infection

Natural killer (NK) cells are lymphocytes that can be distinguished from T and B cells through their involvement in innate immunity and their lack of rearranged antigen receptors. Although NK cells and their receptors were initially characterized in terms of tumor killing in vitro, we have determined that the NK cell activation receptor, Ly-49H, is critically involved in resistance to murine cytomegalovirus in vivo. Ly-49H requires an immunoreceptor tyrosine-based activation motif (ITAM)-containing transmembrane molecule for expression and signal transduction. Thus, NK cells use receptors functionally resembling ITAM-coupled T and B cell antigen receptors to provide vital innate host defense.     

云南发现的几种昆虫病毒资源

从云南森林害虫中采集到多种自然罹病虫体,经分离鉴定,发现6种昆虫病毒,即西昌杂毛虫 NPV、昆明小毛虫 NPV,栎毒蛾 NPVC,南华松叶蜂NPV,油杉吉松叶蜂 GV,铆扇舟蛾 GV。     

3种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用

为研究板蓝根、甘草和鱼腥草3种中药粗提物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的作用,采用体外细胞培养法,在Marc-145单层细胞上,对3种中药粗提物进行直接抗PRRSV活性试验.结果表明,板蓝根和甘草粗提物阻断PRRSV的最佳质量浓度分别为3.125、0.391mg/mL,抑制PRRSV感染的最佳质量浓度分别为3.125、0.782mg/mL,直接灭活PRRSV的最佳质量浓度分别为1.563、0.782mg/mL;鱼腥草粗提物质量浓度为0.782mg/mL时,阻断和抑制PRRSV感染的效果最好,但对PRRSV没有直接灭活作用.3种中药粗提物均有不同程度的体外抗PRRSV活性作用,其中板蓝根的效果最好.