| 基孔肯雅病毒样颗粒的制备 |
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| 引用本文： | 李会,徐靖雯,丁开云,邹萌,刘红旗.基孔肯雅病毒样颗粒的制备[J].扬州大学学报(农业与生命科学版),2021,42(3):42-48. |
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| 作者姓名： | 李会 徐靖雯 丁开云 邹萌 刘红旗 |
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| 作者单位： | 昆明医科大学,昆明650500;中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所,昆明650118;中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所,昆明650118 |
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| 摘 要： | 为制备高纯度、均一的基孔肯雅病毒的病毒样颗粒,将基孔肯雅病毒的结构蛋白基因序列(C-E3-E2-6K-E1)人工合成后克隆至杆状病毒-昆虫细胞表达载体中;重组质粒转化DH1OBac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组杆状病毒杆粒;重组杆状病毒杆粒转染ExpiSf9昆虫细胞,包装获得重组杆状病毒,并再次感染ExpiSf9昆虫细胞表达基孔肯雅结构蛋白;通过细胞超薄切片验证杆状病毒的产生,并用流式细胞仪测定病毒滴度;免疫荧光、蛋白免疫印迹分析目的蛋白的表达,透射电镜鉴定病毒样颗粒的形成;最后,通过蔗糖密度梯度离心纯化病毒样颗粒.结果表明:成功构建了含基孔肯雅病毒结构蛋白的重组杆状病毒杆粒,获得了高滴度的重组杆状病毒,重组杆状病毒表达了基孔肯雅病毒的结构蛋白,结构蛋白自组装成60～70 nm的颗粒.这一研究通过昆虫杆状病毒表达系统成功制备了纯度高和均一性好的基孔肯雅病毒样颗粒,为基孔肯雅病毒的诊断试剂和疫苗研发奠定了基础.
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| 关 键 词： | 基孔肯雅病毒 病毒样颗粒 昆虫杆状病毒表达系统 疫苗 |
Preparation of Chikungunya virus-like particles |
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| LI Hui,XU Jingwen,DING Kaiyun,ZOU Meng,LIU Hongqi.Preparation of Chikungunya virus-like particles[J].Journal of Yangzhou University:Agricultural and Life Science Edition,2021,42(3):42-48. |
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| Authors: | LI Hui XU Jingwen DING Kaiyun ZOU Meng LIU Hongqi |
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