牛乳铁蛋白ELISA检测方法的研究

本文建立了一种ELISA检测牛乳铁蛋白的方法。主要摸索了ELISA的工作条件,采用方阵滴定法确定抗原包被浓度和一抗稀释浓度,进而确定了二抗工作浓度,通过重复性试验和交叉性试验验证了该法的重现性和特异性。结果表明一抗工作浓度为1∶200000稀释,二抗工作浓度为1∶100000稀释,在此条件下检测牛乳铁蛋白的限度为1.56～100ng/mL,在此范围内,牛乳铁蛋白浓度与OD值之间呈指数相关,其回归方程为y=1.2770×(1.0145-e-0.0338x)(R2=0.9992)。本研究为研制牛乳铁蛋白检测试剂盒奠定了基础。     

O型口蹄疫病毒固相阻断ELISA抗体检测方法研究

以VP1蛋白为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度,最终确定固相阻断ELISA最适反应条件以及判定阈值,建立O型口蹄疫病毒衣壳蛋白抗体的固相阻断ELISA检测方法,并对该检测方法进行考核。试验结果表明,最佳抗原包被浓度为0.062 5μg/m L;兔抗血清最佳工作浓度为16 000倍稀释,酶标二抗为8 000倍稀释;抑制率大于20%为阳性,抑制率小于20%为阴性;该方法与常见病原体无交叉反应,特异性和敏感性好,可以检测O型口蹄疫病毒VP1抗体,评价口蹄疫疫苗的免疫效果。     

猪圆环病毒3型夹心ELISA诊断方法的建立

本研究基于实验室制备的PCV3 Cap蛋白单克隆抗体,建立检测PCV3的夹心ELISA方法。通过筛选最佳包被浓度、包被时间、一抗和二抗浓度来建立夹心ELISA方法并确定临界值。探讨该方法的特异性和重复性,并进行临床应用。结果表明,单抗包被10μg/mL(1:200)、一抗1:4 000稀释、二抗1:5 000稀释后的作用浓度为最佳工作浓度;特异性试验表明,该诊断方法特异性良好,与PCV2等多种病毒蛋白不存在交叉反应;重复测试结果表明,测定内和测定间的变异小于5%。研究结果表明,建立的夹心ELISA试验可用于临床检测PCV3。     

利用H9亚型的HA1蛋白建立ELISA抗体检测方法

该试验对ELISA反应条件进行摸索,并确定了最适工作条件。结果表明,重组蛋白最适包被浓度为200倍稀释,最适包被条件为4℃过夜,血清稀释度为1∶50,HRP-兔抗鸡IgG的最适工作浓度为1：1000,待检血清和酶标二抗的反应时间均37℃30min,底物在室温显色10min。根据已经建立的ELISA方法及反应条件,确定阴阳性临界值为0.109。     

鹅细小病毒单抗双夹心ELISA检测方法的建立

为建立鹅细小病毒(GPV)检测方法,本研究以兔抗GPV IgG为捕获抗体,抗GPV单克隆抗体为检测抗体,通过方阵试验确定了兔抗GPV IgG最适包被浓度为16 mg/L,抗GPV单克隆抗体最佳工作浓度为10.8 mg/L,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4 000,建立了检测GPV单抗双夹心ELISA方法,对GPV检测灵敏度达0.312 mg/L.用该法对延边某养鹅场疑似发生小鹅瘟病的252只病死鹅进行检测,结果阳性率为75.79%,与病毒中和试验方法的检测结果符合率迭91.11%.本研究建立的单抗双夹心ELISA方法为GPV的检测和区城流行病学调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法.     

单克隆抗体间接免疫荧光检测猪瘟病毒方法的建立

以作者制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体(anti-CSFV McAb)为一抗、荧光素标记羊抗小鼠IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立检测猪瘟病毒抗原的间接免疫荧光(IFA)检测方法。确定IFA最佳工作条件:CSFV最佳接种浓度和培养条件为CSFV 10-3倍稀释后接种PK15细胞,37℃5%CO2恒温箱中培养36 h;McAb最适工作浓度为1∶1 000倍稀释;荧光素标记的羊抗小鼠IgG荧光抗体的最适工作浓度为1∶50倍稀释。特异性试验表明,用建立的IFA检测方法检测CSFV感染PK15细胞为阳性,而检测伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪2型圆环病毒(PCV-2)感染PK15细胞均为阴性。结果表明,建立的检测细胞培养中CSFV抗原的IFA检测方法具有敏感特异、简便快速等优点,可用于CSFV感染的实验室诊断及CSFV在感染细胞中的定位和动态分布研究。     

基于卵黄抗体的副溶血弧菌间接ELISA快速检测方法的建立

本文主要研究了以水产致病性哈氏弧菌为抗原,免疫SPF蛋鸡,制备特异性卵黄抗体,从抗体的提取、纯化等方面进行了进一步的优化研究;建立基于Ig Y的快速、准确、定量的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗原菌浓度的技术;建立基于Ig Y的间接ELISA测定抗原浓度的技术方法,确定抗原包被浓度、一抗Ig Y和酶标二抗最适稀释倍数,抗原包被条件的选择,底物的最佳反应时间等间接ELISA的实验条件。建立了基于Ig Y的间接ELISA测定哈氏弧菌的方法,试验的最佳反应条件为:抗原最适工作浓度浓度为1×108cfu/ml,包被4℃过夜;一抗Ig Y稀释度分别为1:28;购买的兔抗鸡Ig Y-HRP酶标抗体作1:20000稀释;选择底物的最佳反应时间为20min。     

坦布苏病毒NS1蛋白的表达及ELISA检测方法的建立

为了建立坦布苏病毒(TMUV)感染鸭群的抗体检测方法,以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,并对该方法进行了检测条件的优化。将TMUV NS1全基因序列克隆至pET-28a(+),利用BL21(DE3)表达NS1蛋白,纯化后其质量浓度为4.16μg·μL~(-1)。通过方阵试验,确定了NS1蛋白的最佳包被质量浓度是100ng·孔-1,检测血清的最佳稀释倍数为40倍。随后对检测条件进行了优化,优化后的结果:抗原的最佳包被条件是4℃作用过夜;酶标二抗的最佳工作条件是稀释5 000倍,37℃作用1h;阴阳血清的临界值为0.278。一系列试验验证了该检测方法具有很强的特异性、敏感性、重复性。对采集自山东各地的80份血清样品进行检测,其检测结果显示,该方法与经典的鸡胚中和试验检测结果的符合率为93.5%以上,且比传统的中和试验更敏感。对TMUV感染鸭群的血清进行检测,描述了TMUV感染后鸭群抗体水平的消长规律,为该病的防治提供重要的理论依据。以NS1蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立为临床上TMUV的感染提供了一种新的抗体检测方法,尤其是在TMUV早期感染的检测方面有着更为广泛的应用前景。     

鹅副黏病毒NP蛋白间接ELISA检测方法的建立及免疫鹅抗体水平的检测

以纯化的鹅副黏病毒NP蛋白为包被抗原,建立了检测鹅副黏病毒NP蛋白抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最适反应条件：抗原包被浓度为1.0μg/mL,血清稀释度为1∶200,兔抗鹅IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶2 000,抗原和血清、血清和二抗均于37℃反应1 h,底物于37℃显色15 min。此间接ELISA方法的特异性强、重复性好。应用该方法对试验鹅血清进行检测,以HI试验为参照。经统计学处理后,比较了两方法测得的抗体效价,分别建立了各组鹅群的回归方程。显著性检验证明,这两种方法检测的抗体效价呈显著相关关系。     

伪结核棒状杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

为建立伪结核棒状杆菌(Cp)血清抗体间接ELISA检测方法,以热灭活处理的不同的浓度Cp菌株作为固相抗原包被酶标板,用不同封闭液封闭,设置不同的封闭时间,再用不同稀释度的待检血清和不同稀释度的酶标二抗与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行试验,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。结果显示,最佳抗原包被量为OD600 nm=0.084的菌悬液100μL,10 g/L BSA封闭时间2 h,一抗血清稀释度为1∶400,酶标二抗的稀释度为1∶5 000,血清阴阳性的OD450 nm值临界值为0.352。该方法仅对Cp阳性血清呈特异性反应,与6种常见病原阳性血清均无交叉反应,特异性较强。批内试验和批间试验的变异系数均小于9.5%,重复性较好。敏感性试验结果表明,当伪结核标准阳性血清进行1∶1 280稀释时检测仍为阳性,敏感性较强。用该方法对10份经细菌分离鉴定为阳性的血清进行Cp抗体检测,结果均为阳性。用建立的方法对临床随机采集的423份血清进行检测,结果显示阳性率为35%。研究建立的抗体间接ELISA方法为Cp抗体检测及血清学调查奠定了基础。     

人禽流感

流行病学●传染源:患禽流感或携带禽流感病毒的鸡、鸭、鹅等禽类;野禽在禽流感的自然传播中扮演了重复角色●传播途径:呼吸道传播、感染家禽的分泌物和排泄物、受病毒污染的水等环境被污染,科研人员也可被感染,但尚无人-人传播的确切证据。●易感人群:任何年龄,<13岁儿童发病比例高,病情重。●高危人群:家禽养殖业,在发病前1周内去过家禽饲养、销售及屠宰等场所者以及接触禽流感病毒感染材料的实验室工作人员为高危人群。①●性别和年龄:男性11例,女性10例(1例不准)。发病年龄4～30岁,其中15岁以下患者有19例,16岁以上12例。所有病例疫禽接…     

草地与人类文明

人类起源于林缘草地 ,人类与草地的关系经历了正 (肯定 )—反 (否定 )—合 (肯定 )的辩证发展。草坪是人类文明的产物 ,提供人们休憩娱乐的场所 ,改善人类的生存环境 ,促进体育事业的发展。草坪质量追求长、快、好、省 ,建植过程中要抓好坪床工程、草种选择等关键技术环节 ,具有良好的管理系统。草业、草坪业 ,是方兴未艾的产业 ,不仅本身产生巨大的社会效益、生态效益和经济效益 ,而且能够带动一系列相关产业的发展 ,具有广阔的发展前景。建议加强草业的科学教育建设 ,以满足即将出现的草业、草坪业建设高潮的到来 ,同时规范草业市场 ,引导其健康发展     

鸡蛋与人类健康

自古以来鸡蛋一直被认为是人类最佳的动物蛋白源之一.自20世纪70年代以来鸡蛋被蒙上了与慢性心脑病和高胆固醇有关的阴影.针对这种情况美国在1984年正式成立了鸡蛋营养中心(ENC).