柑橘衰退病毒含量对其蚜传效率的影响

为明确毒源植株和蚜虫中柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的发生情况与蚜虫传播CTV能力的关系,将褐色橘蚜、棉蚜、橘二叉蚜和绣线菊蚜置于分别感染了4个CTV分离株的锦橙上取食24 h后,运用巢式RT-PCR和实时RT-PCR检测蚜虫和锦橙的带毒情况,并分析蚜虫的传毒能力。结果显示,蚜虫中CTV的平均带毒率为0.76~0.84,其中棉蚜的最高,其次为绣线菊蚜、褐色橘蚜和橘二叉蚜。锦橙中各CTV分离株的含量差异不大,与蚜虫传毒效率间无显著相关性;也未发现蚜虫带毒率与其传播CTV能力之间存在相关性。蚜虫体内CTV的含量为5.36×103±2.33×103~2.01×106±3.67×105拷贝,褐色橘蚜中含量最高,其次为棉蚜、橘二叉蚜和绣线菊蚜;且高蚜传能力CTV分离株在褐色橘蚜体内的含量远高于低蚜传能力分离株。表明蚜虫体内CTV的含量可能与蚜虫传毒能力有关。     

柑橘三种蚜虫取食行为的EPG分析

为探究柑橘3种蚜虫取食行为差异,利用刺吸电位图谱(electrical penetration graph,EPG)技术对褐色橘蚜Toxoptera citricida(Kirkaldy)、棉蚜Aphis gossypii Glover和绣线橘蚜Aphis citricola van der Goot在椪柑上的取食行为进行了测定。结果表明:3种蚜虫均产生8种取食波形,依次为非刺探波(np波)、路径波(A、B、C波)、电位下降波(pd波)、韧皮部分泌唾液波(El波)、韧皮部被动吸食波(E2波)以及木质部主动吸食波(G波)。棉蚜开始取食的第1次刺探时间最早,绣线橘蚜刺探的次数最多,且C波时间最长。褐色橘蚜pd波出现的次数最少,棉蚜次之,绣线橘蚜最多,显著高于褐色橘蚜。与其它2种蚜虫相比,绣线橘蚜于木质部主动吸食汁液(G波)时间最长,有G波的个体比例最高。3种蚜虫E1波次数和总持续时间差异均不显著,但褐色橘蚜E2波的持续时间217.01±27.56 min显著长于棉蚜142.49±27.85 min和绣线橘蚜116.64±20.05 min。初步推断3种蚜虫对柑橘衰退病毒的传毒效率与E2波有关。     

毒源和寄主对褐色桔蚜传播柑桔衰退病毒效率的影响

褐色桔蚜是柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)最有效的传播媒介,为了解不同柑桔寄主种类和毒源对褐色桔蚜传播CTV效率的影响,检测在以锦橙、凤凰柚和墨西哥来檬作毒源植株时,褐色桔蚜对10个CTV分离株的单蚜传毒率,以及蚜传前后CTV分离株p25/HinfⅠRFLP组群构成的变化,并对其中5个分离株与2个国外分离株进行了p20和p25基因相应氨基酸序列的比对分析。结果表明:褐色桔蚜传播CTV的能力受柑桔寄主种类的影响较大,以锦橙作毒源植株可以获得最高的传毒率;CTV毒株强弱以及褐色桔蚜虫态(有翅或无翅蚜)对单蚜传毒率影响不明显;褐色桔蚜传播具有p25/HinfⅠRFLP第3组群构成的CTV分离株的能力较强。     

基于EPG分析无翅型和有翅型柑橘蚜虫的取食行为

为明确无翅型、有翅型柑橘蚜虫取食行为的差异,采用EPG技术对褐色橘蚜Toxoptera citricida(Kirkaldy)和棉蚜Aphis gossypii Glover的有翅型、无翅型成蚜在柑橘苗上的取食行为进行测定。结果表明,褐色橘蚜无翅型和有翅型的EPG均记录到7种取食波形,依次为非刺探波np、路径波A、B和C、电位下降波pd、韧皮部取食波E1和E2;棉蚜无翅型和有翅型的EPG记录到9种取食波形,除上述7种外,还包括木质部主动吸食波G和口针阻碍波F。褐色橘蚜有翅型和无翅型的np波持续时间为25.73 min和8.39 min,二者间差异显著;棉蚜有翅型的np波持续时间、刺探次数、C波次数分别为27.34 min、19.16次、20.21次,显著高于无翅型,而刺探总持续时间为332.66 min,显著低于无翅型。棉蚜的C波次数及总持续时间、刺探次数、pd波次数及总持续时间均显著高于褐色橘蚜,而E2波总持续时间及平均持续时间均显著小于褐色橘蚜。表明棉蚜无翅型比有翅型在柑橘上更容易取食,影响有翅型蚜虫取食的抗性因子可能位于柑橘表面;褐色橘蚜比棉蚜对柑橘的适应性更强。     

重庆地区柑桔衰退病毒多态性研究

柑桔衰退病毒(CTV)存在着复杂的株系分化现象.在使用弱毒株交叉保护防治柑桔衰退病时需要对田间病毒株系组成进行分析,并对选用的株系进行单蚜分离纯化.作者运用限制性片段长度多态性和单链构象多态性对田间获得的168个CTV样品和2个蚜传毒株的外壳蛋白基因进行分析,了解重庆市田间CTV组群构成情况,发现田间CTV以多株系混合发生为主,其中主要是CP/HinfⅠRFLP第1、3和6组群,约占总数的90%,并以强毒株混合感染为主.甜橙中CP/HinfⅠRFLP的组群构成最为复杂.单头褐色桔蚜从柚类至甜橙传播CTV的效率低(不足1%),该蚜的取食可改变CTV的株系组成.     

4种柑橘衰退病毒源单蚜传毒分离株CP基因的分子特征

 对4种柑橘衰退病毒源及其31个单蚜传毒分离株的CP基因做了限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,并对其中8个单蚜传毒分离株的CP基因进行了序列分析。实验明确了所研究柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的CPG/Hinf I RFLP组群和CPG/SSCP模式,二者能较好地对应并有效验证了单蚜传毒对CTV毒源的分离纯化作用;CP基因序列分析结果表明,相同CPG/Hinf I RFLP组群的单蚜传毒分离株间具有高度的序列相似性,而不同CPG/Hinf I RFLP组群单蚜传毒分离株间则存在较大差异;通过与已知生物学特性CTV分离株比较,初步建立了上述CP基因分子特征与病毒生物学特性之间的联系。     

6种柑橘类植物对柑橘衰退病毒分离株TR-L514变异的影响

 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)存在复杂的株系分化现象,运用弱毒株交叉保护防治柑橘衰退病时需了解不同类型柑橘对CTV构成的影响。作者将CTV分离株TR-L514嫁接接种到6类柑橘植物上获得了18个亚分离株,并对这18个亚分离株和TR-L514进行了指示植物鉴定,p25基因的限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,p23基因的序列比较。结果表明,CTV株系对不同柑橘类植株的适应性存在差异。TR-L514嫁接到不同柑橘类植株其构成会发生变化,在甜橙上可以同时检测出p25//HinfⅠ RFLP第1和6组群,并具有比在其它4类柑橘上更为复杂的SSCP谱型构成,因此甜橙可能更适宜于CTV的增殖。TR-L514及18个亚分离株的p23基因序列差异可能与不同类柑橘植株的适应性有关。     

柑橘衰退病毒检测试剂研制及其分子特性研究

柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)广泛分布于世界各柑橘产区,其引起的衰退病是最具危害性的柑橘病害之一,该病毒主要通过蚜虫和带毒接穗传播.CTV存在明显的株系分化现象,除少数株系在许多柑橘品种上不产生可见症状外,大部分株系能在柑橘上产生明显症状,常见症状可分为三大类型,即速衰型、茎陷点型和苗黄型.速衰型症状主要表现在以酸橙作砧木的甜橙等感病柑橘上;茎陷点症状的发生与砧木种类无关,常导致葡萄柚或甜橙产量降低、品质下降、植株矮化;苗黄症状在田间很少发生,主要是在酸橙、来檬或葡萄柚的苗期引起严重褪绿和矮化.     

应用多重PCR技术同步检测柑橘4种重要嫁接传播病原

 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV),柑橘碎叶病毒(Citrus tatter\|leaf virus,CTLV),柑橘裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)和柑橘黄龙病(Huanglongbing, HLB)亚洲种病原(Candidatus liberobacter asiaticus)是重要的柑橘嫁接传播病原。本文建立了同时检测HLB病菌、CTV、CEVd 和CTLV 4种柑橘嫁接病原的一步法、双温多重PCR检测技术体系,同时在体系中设置内参基因。应用该体系快速评价了4种嫁接传播病原在田间侵染情况,结果表明28个田间样品CTV、CEVd、CTLV和HLB感染率分别为89.3 %、17.9 %、10.7 %和28.6 %,接近半数样品为混合感染。并且将该方法应用于快速评价茎尖嫁接苗病毒的脱除情况。     

5种药剂防治柑橘蚜虫田间药效试验

为害柑橘的蚜虫主要有橘蚜、橘二叉蚜、桃蚜等,以成虫和若虫群集在嫩叶背面和嫩梢上吮吸汁液,蚜虫也为害嫩芽和花蕾等。被害的新梢,嫩叶卷曲、皱缩,节间缩短,不能正常生长,严重时引起落果及大量新梢无法抽出,影响产量。通过5种药剂对柑橘蚜虫进行药剂试验,筛选出防治柑橘蚜虫较好的药剂,为柑橘生产服务。     

黄瓜花叶病毒和马铃薯Y病毒混合侵染烟株对烟蚜取食行为的影响

为探究黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)混合侵染烟株对烟蚜取食行为的影响,利用刺探电位图谱(electrical penetration graph,EPG)技术记录了烟蚜在健康烟株与CMV、PVY混合侵染后不同发病级别烟株上的取食波形。结果显示:烟蚜在健康烟株上的刺探次数最少,在感病烟株上的C波总持续时间均显著长于健康烟株;第1次到达韧皮部前的刺探次数,健康植株上仅为4.00次,3级感病烟株上的为健康烟株上的2倍;在健康烟株上E2波总持续时间为120.65 min,极显著大于2级和3级感病烟株;刺探过程中,感病烟株上的pd波出现次数均高于健康烟株,且pd波II-1和II-3亚波的持续时间也显著高于健康烟株。研究表明,CMV、PVY混合侵染烟株可降低寄主对烟蚜的适合度,且能促进烟蚜对病毒的传播。     

基于EPG技术的棉蚜抗性指标筛选

本文以研究不同抗性水平的棉花材料上棉蚜的取食行为及与其生长发育的关系，筛选可作为棉花抗蚜鉴定指标的刺探电位图谱（Electrical penetration graph，EPG）参数为目的。采用生物测定的方法比较了棉蚜在不同棉花品种上的生长发育参数，利用EPG技术对不同抗性水平棉花上棉蚜的取食行为进行分析，并对生长发育参数与主要的EPG参数进行相关性分析。棉蚜室内生测结果表明，棉蚜在4种高抗品种（辽5632-642、TYJ-98-6、锦454和中G5）上的存活率、产仔数、内禀增长率均较中抗和高感品种低。EPG监测结果显示，在高抗品种上，Np波总次数与总时间均显著高于其他品种，第1次刺探时间靠后且持续时间长，C波和E2波总时间较短，F波和E1波总时间长且次数多；在中抗品种中棉所49（CCRI 49）、中棉所79（CCRI 79）和雷克斯（光叶）上，F波总次数和总时间均较低；在中抗品种非洲E-40和高感品种辽棉6号上，Np波总次数与总时间均低于其他品种，C波总时间与E2波总时间长。结果表明抗性棉花材料对棉蚜生长发育有不利的影响，Np波总次数、E1波总次数、第1次刺探出现时间等5个EPG参数与棉花的抗性存在显著相关性。可见，Np波总次数、E1波总次数、第1次刺探出现时间等EPG参数可初步作为棉花对蚜虫是否具有抗性的鉴定指标，研究结果为棉花抗蚜性鉴定方法提供重要的理论依据和技术支撑。     

Spatiotemporal dynamics of Citrus tristeza virus in Cuba

The spatiotemporal dissemination of Citrus tristeza virus (CTV) was evaluated by DASI-ELISA in orange and grapefruit fields of six citrus producing regions in Cuba, and aphid populations were evaluated in two selected areas. The aphid species found in these areas were Toxoptera citricida (the most efficient vector of CTV), T. aurantii and Aphis spiraecola . A logistic model was the most appropriate to explain the temporal increase in the proportion of CTV-infected plants for almost all the fields. Although nearly all areas showed an increase in this proportion, there were regions of low CTV spread, which was slower in grapefruit than in orange fields. 2DCORR analysis indicated spatial dependence among immediately adjacent trees, higher in the within-row direction than in the across-row direction. Aggregation was also detected by dispersion index and binary power law fitting within quadrats of all sizes. For most fields, autocorrelation analysis showed a significant edge effect and spatial dependence among infected plants of different sub-areas. Based on these results a new tristeza management strategy was proposed for each region of the country.     

感染马铃薯Y病毒烟株对烟蚜取食行为及烟蚜茧蜂适应性的影响

为探明烟蚜茧蜂Aphidius gifuensis Ashmead对烟蚜Myzus persicae(Sulzer)取食感染马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)烟株的适应性,利用刺探电位图谱(EPG)技术记录了烟蚜在感病烟株与健康烟株上的取食行为,并测定了烟蚜茧蜂对取食2种烟株烟蚜的寄生率以及烟蚜茧蜂的羽化率、发育时间及性比等指标。结果表明,与健康烟株相比,烟蚜在感染PVY烟株上的第1次刺探取食持续时间显著延长,且口针遇到阻力的次数(F波)和总持续时间均显著减少。烟蚜在感病烟株木质部的吸食时间(G波)显著长于健康烟株。感病烟株上烟蚜在韧皮部阶段的分泌唾液时间(E1波)较在健康烟株上显著缩短,而被动吸食汁液时间(E2波)显著延长。烟蚜茧蜂寄生取食感染PVY烟株的烟蚜,虽然能成功完成其生活史,但适应性与寄生取食健康烟株烟蚜的蚜茧蜂存在差异。在感染PVY烟株上,烟蚜茧蜂对烟蚜的寄生率为33.67%,显著低于对照的64.67%;且僵蚜体重明显下降,羽化的成蜂个体较小;成蜂存活时间1.48 d也极显著短于对照组的2.25 d。表明烟蚜茧蜂对取食感染PVY烟株烟蚜的适应性较低,PVY可通过烟蚜为介体间接降低烟蚜茧蜂的适应力。     

Characterization of Citrus tristeza virus isolates in northern Iran

The biological and molecular properties of four Citrus tristeza virus (CTV) isolates isolated from infected Satsuma trees imported from Japan, and growing in citrus groves in northern Iran (Mahdasht orchards, Mazandaran Province), were investigated. CTV-infected samples were collected from sweet orange trees and grafted onto Alemow (Citrus macrophylla Wester) seedlings. On indicator plants, these isolates produced various symptoms including vein clearing and stem pitting on Mexican lime, Alemow, and Citrus hystrix, and yellowing and stunting on sour orange and grapefruit seedlings. Citrus samples were also surveyed for CTV using serological tests. The coat protein (CP) gene of these isolates was amplified using specific primers, yielding an amplicon of 672 bp for all isolates. Sequence analysis showed 98%–99% sequence homology of Iranian isolates with the Californian CTV severe stem-pitting isolate SY568 and 97%–98% homology with the Japanese seedling yellows isolate NUagA. The Iranian isolates were compared by restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of the CP amplicon for further classification.     

茉莉酸诱导小麦幼苗对麦蚜取食行为的影响

茉莉酸可诱导小麦品种郑州891的防御反应，使麦长管蚜Sitobion avenae(F.)和禾谷缢管蚜Rhopalosiphum padi(L.)的取食行为发生明显改变。尽管此两种蚜虫在正常的小麦相干株上取食的EPG各波型参数出现的次数及历时变化较大，但经茉莉酸诱导后，都再现了NP波次数和历时显著增加、E1与E2波历时明显缩短、首次出现E1波时间显著延长以及口针在细胞间穿刺频率明显升高等变化。这说明茉莉酸诱导后，郑州891的取食适合度降低，其机理与茉莉酸诱导产生挥发性的蚜虫取食拒避剂及诱导维管液营养成份的改变有关。试验还证实；麦长管蚜和禾谷缢管蚜的嗅觉和味觉感受器在其对寄主植物适合度的鉴别中共同起作用；植物适合度不能仅由1－2个EPG波形参数作为指示因子，要视具体情况全面分析，才能得出可靠的结论。     

不同体色生物型烟蚜的取食特性分析

为探究不同体色生物型烟蚜Myzus persicae取食行为的差异,明确其在烟田的分布特征,利用刺探电位图谱(EPG)技术测定了红色型、绿色型和褐色型3种体色生物型烟蚜在烟草上的取食行为。结果表明:红色型烟蚜刺探取食之前对烟草寄主所花费的识别时间最短,为2.20 min,极显著短于褐色型烟蚜的10.09 min。绿色型烟蚜在刺探过程中pd波平均持续时间为7.45 s,显著长于红色型烟蚜的6.85 s,极显著长于褐色型烟蚜的3.95 s,但3种体色生物型烟蚜的pd波次数无显著差异。首次刺吸至第1次出现E2波所需时间,绿色型和褐色型烟蚜均约为红色型烟蚜的2倍。韧皮部取食阶段,3种体色生物型烟蚜分泌唾液(E1波)的时间无显著差异;红色型烟蚜被动吸食汁液(E2波)时间为112.28 min,显著长于绿色型烟蚜的70.02 min和褐色型烟蚜的75.15 min。褐色型烟蚜在木质部主动摄取汁液(G波)的时间最短为8.58 min,与另外2种体色生物型烟蚜差异显著。表明3种体色生物型烟蚜各自具有不同的取食策略,但总体而言红色型烟蚜对烟草的适应性最强。     

应用改进的多克隆抗体Western blot技术研究柑桔速衰病毒蛋白

 本文利用多克隆抗体发展了一种无背景的Western blot技术并用于研究柑桔速衰病毒(CTV)的蛋白。结果表明,利用CTV兔多克隆抗体1212和1052发展的Western blot技术可以检测到感染CTV的墨西哥酸橙或Citrus excelsa植株内CTV的4种蛋白P1、P2、P3和P4。在健株或病株内杂交反应均无非特异性背景。从不同寄主上分离到的CTV不同分离物的蛋白条带是不同的。利用1212和1052抗体均可以检测到感染6个CTV分离物的墨西哥酸橙幼苗内的P1、P2和P3。利用1052抗体能检测到感染严重型分离物T36、T3和Mm2的墨西哥酸橙幼苗内微弱的P4,但感染轻型分离物T30、T26和T4的幼苗内则检测不到。利用1212抗体检测不到P4。在C. excelsa内,1212和1052抗体均能检测到感染所有分离物的病株内的P1。在感染T3、T26、T4或Mm2的病株内能检测到P2,但在感染T30和36分离物的病株内则检测不到。在感染T36、T3、T26、T4和Mm2的病株内可检测到P3,但在感染T30的病株内则检测不到。在大多数植物内,P1、P2、P3和P4的分子量分别约为25kDa,24kDa,21kDa和18kDa。在感染T36分离物的C. excelsa植株体内,P1和P3的分子量分别约为27kDa和22kDa,比感染其它分离物的C. excelsa和墨西哥酸橙内的P1和P3分子量略大。P1、P2和P3的分子量与利用单克隆抗体检测的CP,CP1和CP2的分子量相等。因此,P1、P2和P3可能是CTV的外壳蛋白CP,CP1和CP2。P4的特性不清楚。研究结果也表明,利用特异性的多克隆抗体进行的Western blot是研究CTV的一种有用的技术。应用该技术,病株内不同的CTV分离物或株系就可以通过特异性蛋白条带区分开来。