C_(17)-吡唑琳基甾体衍生物诱导Hela细胞凋亡研究

通过电镜、AO/EB染色检测细胞形态学变化,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,通过检测Caspase活性及相关凋亡蛋白的变化确定C17-吡唑琳基甾体衍生物1诱导细胞凋亡的机制。经化合物1处理后的Hela细胞出现典型的凋亡特征,细胞凋亡率与处理时间呈正相关,同时Caspase-3与Caspase-9活性也逐渐增加,而促凋亡蛋白Bax表达量上升,抑凋亡蛋白分子Bcl-2表达量显著下降。说明C17-吡唑琳基甾体衍生物1通过线粒体通路诱导Hela细胞凋亡。     

苦杏仁精油对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

为了研究苦杏仁精油(bitter almond essential oil,BAEO)对人永生化角质形成细胞(HaCaT)体外增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其可能存在的抗银屑病作用机理。采用气相色谱-质谱联用仪(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)分析BAEO化学成分;磺酰罗丹明B(sulforhodamine-B,SRB)法检测BAEO对HaCaT细胞增殖的影响;用流式细胞术碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染法检测BAEO对细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot测定凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP表达水平。结果显示,BAEO主要化学成分是苯甲醛(57.36mL/L)、苯甲酸(12.73mL/L)和扁桃腈(9.54mL/L);BAEO对HaCaT增殖抑制率随药物浓度和时间的增加而显著增加(P0.01);流式细胞仪检测经BAEO(0.1、0.25、0.5mL/L)作用于HaCaT细胞24h后,细胞周期停滞在G0/G1期,早期凋亡率显著升高(P0.05);Western blot结果表明,0.1、0.25、0.5mL/L的BAEO作用于HaCaT细胞24h后Caspase-3和PARP蛋白的表达下调。结果表明,BAEO能显著地抑制HaCaT细胞增殖,以及通过G0/G1期细胞周期停滞、细胞凋亡率升高、增加Caspase-3和PARP蛋白的剪切来诱导HaCaT细胞凋亡。     

p38MAPK抑制剂SB202190对猪颗粒细胞活力的影响

p38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated potein kinase,MAPK)家族成员,是细胞内重要的信号转导系统之一,对细胞的生长、分化、凋亡具有重要影响及作用。为探究p38MAPK信号对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响及其可能作用机制,研究以体外培养的猪卵巢颗粒细胞为模型,在培养液中分别添加浓度为0、1、10、20μmol/L的p38MAPK特异性抑制剂SB202190。以免疫细胞化学染色法鉴定体外培养猪卵巢颗粒细胞,通过CCK-8法检测其增殖活性,应用Annwxin V-FITC/PI及细胞周期试剂盒染色检测细胞凋亡及细胞周期状况,以实时定量PCR检测猪卵巢颗粒细胞中凋亡、周期相关基因的相对表达水平。结果表明,添加p38APK信号抑制剂SB202190可抑制体外培养猪卵巢颗粒细胞的增殖活性,20μmol/L处理组与其他组相比呈显著性差异(P0.05);20μmol/L SB202190添加处理未显著影响颗粒细胞的凋亡水平,而该浓度SB202190可将大部分细胞阻滞在G1/G0期,与对照组相比差异显著(P0.05);基因相对表达水平检测显示SB202190添加可抑制Fas、FasL、CDK-4的表达,而同时促进Bcl-2、Bax、P27的表达(P0.05),对Caspase-3的表达没显著影响(P0.05)。综上所述,SB202190通过调控猪卵巢颗粒细胞的周期来影响其增殖作用,但对其凋亡没有影响。     

鸡p15因子抑制MDCC-MSB1细胞的增殖及端粒酶活性

为探讨鸡p15基因的生物学功能,试验构建了鸡p15基因的真核表达载体pcDNA3.1( )-p15,并转染到鸡MDV转化的淋巴细胞系MDCC-MSB1,应用G418筛选掉未转染的细胞,对存活细胞p15蛋白的表达、细胞增殖力、群体倍增时间、细胞周期和端粒酶的活性进行了检测。结果表明,与转染空质粒pcDNA3.1( )细胞相比,转染了p15基因的细胞稳定表达了p15蛋白;细胞的增殖受到了抑制,抑制率达45%～74%;群体倍增时间从27h延长至416h;流式细胞仪分析细胞周期发现,p15蛋白引起了细胞多停滞于G0/G1期,S和G2/M期细胞比例下降;端粒酶活性受到抑制。     

冬虫夏草菌丝粗多糖对SP2/0细胞凋亡和p53表达的影响

观察冬虫夏草菌丝粗多糖对SP2／0细胞凋亡诱导和p53基因表达的影响。在体外用粗多糖处理SP2／0细胞,MTT法检测其对肿瘤细胞增殖抑制作用,Hochest33342荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞的周期,实时荧光定量PCR检测p53基因的表达情况。结果发现,与对照组相比,冬虫夏草粗多糖可抑制SP2／0细胞增殖,诱导出现典型凋亡形态变化,电泳出现特有梯形条带,引起细胞周期阻滞,使p53基因的表达明显改变。这提示冬虫夏草粗多糖对SP2／0细胞生长的抑制,可能与诱导凋亡和声53基因表达的改变有关。     

过表达和干扰GDF9基因对番鸭颗粒细胞凋亡和周期的影响

实验旨在探究生长分化因子9(Growth Differentiation Factor,GDF9)基因对番鸭颗粒细胞的影响，本研究构建了GDF9过表达载体（pEX-2-GDF9）以及干扰GDF9小RNA (siRNA-GDF9-530、siRNAGDF9-978、siRNA-GDF9-1320)，分别转染至原代番鸭颗粒细胞内，通过流式细胞术检测GDF9基因对细胞周期和凋亡的影响；荧光定量PCR技术检测转染后颗粒细胞周期和凋亡相关基因的表达量。结果显示，过表达GDF9基因将番鸭颗粒细胞阻滞在G0/G1期，S期细胞极显著减少，且Bax基因和Caspase-3基因表达量极显著（或显著）上调，说明过表达GDF9促进了颗粒细胞凋亡；干扰GDF9基因表达后，G0/G1期细胞极显著减少，S期细胞极显著增加，且CDK-2、Bcl-2、CCND1 mRNA极显著上调，CCNE1 mRNA显著上调。综上可知，GDF9基因表达促进颗粒细胞凋亡、抑制细胞周期进程。该结果可为番鸭的卵泡发育机制研究提供理论基础。     

蝎毒对Hela细胞p21基因表达的影响

采用RT-PCR和Western-blot方法分别检测蝎毒对Hela细胞p21基因的mRNA和蛋白表达,研究蝎毒抗癌作用的分子机理。结果表明:经不同质量浓度(50,100,200μg/m L)蝎毒处理的与未经蝎毒处理的Hela细胞p21基因在mRNA水平表达相近,而在蛋白表达水平上,经蝎毒处理的与未经蝎毒处理的细胞相比,p21基因表达均有明显增强,并以经100μg/m L蝎毒处理的Hela细胞p21基因的蛋白表达增强最为明显,由此证明蝎毒抑制Hela细胞增殖的机理可能是增强了p21基因的蛋白表达。     

肿瘤转移抑制因子(Kisspeptin)对牛卵巢颗粒细胞凋亡的影响

肿瘤转移抑制因子(Kisspeptin)在颗粒细胞上有表达,但其对颗粒细胞凋亡的作用尚不清楚,本试验旨在利用流式细胞术和荧光定量PCR的技术研究Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞凋亡的影响。向DMEM-F12培养液中分别添加0、100 nmol/L的Kp-10培养牛颗粒细胞,24 h后收集细胞,用流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期,用荧光定量PCR技术检测Caspase-3、Bcl-2、Fas和Fasl的m RNA表达。结果表明:Kisspeptin可显著促进牛颗粒细胞凋亡,且伴随着Caspase-3、Fas和Fasl m RNA表达上调及Bcl-2 m RNA表达下调(P0.01);流式细胞分析表明,Kisspeptin可使牛颗粒细胞在G1期增加、S期下降(P0.05)。研究结果说明,Kisspeptin可促进牛颗粒细胞凋亡,这一作用可能通过上调促凋亡基因Caspase-3、Fas、Fasl和下调抗凋亡基因Bcl-2的m RNA表达实现。     

地锦草抗宫颈癌活性研究

地锦草临床上多用于治疗菌痢、肠炎、病毒性肝炎、咳血、尿血、便血等。本试验通过建立小鼠U14宫颈癌模型,利用水煎法得到水提物,根据抑瘤率和对突变型p53蛋白表达的影响来研究地锦草水提物体内抗宫颈癌活性。结果表明,地锦草水提物能够显著抑制肿瘤生长,同时能使肿瘤组织的突变型p53蛋白的表达量显著下调。这可能是地锦草水提物抗肿瘤作用的潜在机制。     

NTS与TES基因对EEC凋亡调控作用的研究

NTS参与产前代谢和神经系统的早期建立,TES是构成细胞间连接的一部分。该研究主要探究NTS及TES对山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)凋亡和凋亡相关蛋白(P38 MAPK和caspase-8)的调节作用。通过构建NTS和TES过表达载体并将其转染至EEC,用流式细胞凋亡检测、Real-time PCR和Western Blot等试验进行检测。结果表明:过表达NTS和TES都对EEC凋亡具有显著抑制作用(P0.05),对细胞凋亡相关蛋白Caspase-8和p38的调控作用相同,增加p38的表达(P0.05),而抑制Caspase-8的表达(P0.01);NTS和TES在EEC中存在负反馈调节作用,在mRNA和蛋白水平NTS过表达显著抑制TES的表达(P0.01),而TES过表达对NTS mRNA表达水平无显著影响(P0.05),但可以显著抑制NTS蛋白水平的表达(P0.05)。     

二甲双胍对犬乳腺肿瘤细胞周期及其相关蛋白的影响

为研究二甲双胍对犬乳腺肿瘤细胞增殖和细胞周期的影响,以犬乳腺肿瘤CHMm和CHMp为模型,采用终浓度为0、5、10、20、40mmol/L二甲双胍对其进行干预,应用CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布比例,再通过Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin D1和p27的表达情况。二甲双胍作用48 h后,与对照组比较,CHMm细胞试验各组的成活率显著降低(P0.05),而CHMp细胞除了5 mmol/L组(P0.05),其他试验各组的成活率也显著低于对照组(P0.05),并且均呈现一定的浓度依赖性。流式细胞仪分析细胞分布比例发现,CHMm的G0/G1期细胞比例从(38.7±5.89)%增加到(70.36±5.78)%,CHMp的G0/G1期细胞比例也从(37.03±4.23)%增加到(54.92±4.67)%。随着二甲双胍作用浓度的增加,CHMm和CHMp细胞内cyclin D1表达量呈现减少的趋势,而p27表达量呈现上升的趋势。研究结果表明,二甲双胍可以抑制犬乳腺肿瘤细胞体外增殖能力,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,并下调cyclin D1和上调p27细胞周期相关蛋白表达量,从而为犬乳腺肿瘤治疗提供一定的理论基础。     

水牛BMP1基因对颗粒细胞增殖与凋亡的功能研究

本研究旨在探讨BMP1基因对体外培养水牛颗粒细胞增殖与凋亡的影响,采用qRT-PCR检测体外培养0、24、48、72和96h水牛颗粒细胞中BMP1基因的表达规律,通过在水牛颗粒细胞培养液中添加BMP1基因重组蛋白和抗BMP1抗体,观察其对体外培养水牛颗粒细胞增殖变化的影响,并应用qRT-PCR和Western blotting方法检测与细胞增殖和细胞凋亡相关因子表达的变化规律。结果显示,随着颗粒细胞体外培养时间的延长,BMP1基因的相对表达量显著上调(P0.05),96h培养组BMP1表达最高。添加BMP1重组蛋白可显著促进水牛颗粒细胞的体外增殖(P0.05),并能够显著上调细胞周期关键蛋白Cyclin D1、Cyclin D2和PCNA mRNA表达水平(P0.05),同时显著抑制了细胞凋亡信号通路中促凋亡相关因子(Fas、FasL、TNFR1、TNF-α、Cytochrome C、Apaf1、Chop、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9)mRNA表达(P0.05)。Western blotting检测结果表明,BMP1重组蛋白能够抑制Fas、Bax和Caspase-9蛋白表达,蛋白与mRNA表达一致。而添加抗BMP1抗体的试验则得出相反的结果。综上表明,BMP1基因能通过调控相关基因的表达促进体外培养水牛颗粒细胞的增殖并抑制其凋亡,在水牛卵泡发生过程中具有重要的调控功能,为阐明BMP1基因参与家畜卵泡发生的分子机制奠定基础。     

流感病毒在诱导A549细胞凋亡过程中对MDM2和p53蛋白的影响

采用Hoechst 33258染色和流式细胞术观察了流感病毒诱导A549细胞凋亡的情况,同时应用Western-blot方法研究了MDM2和p53等蛋白表达的情况.结果表明,100 TCID50/0.1 mL剂量病毒感染A549细胞后,细胞表现出典型的凋亡特征,死亡细胞比例随感染进程逐渐增加.在流感病毒诱导细胞凋亡过程中,MDM2蛋白表达下降,p53和p-p53表达上升,其下游p21蛋白也被激活.可见,p53及其下游p21蛋白参与了流感病毒诱导的A549细胞凋亡,同时通过下调MDM2蛋白表达促进了p53蛋白诱导的细胞凋亡.     

α-亚麻酸对水牛卵巢颗粒细胞体外培养的影响

【目的】研究α-亚麻酸(ALA)对水牛卵巢颗粒细胞体外培养过程中细胞活力、细胞凋亡、细胞周期相关基因表达及激素分泌功能的影响。【方法】为了筛选体外培养水牛卵巢颗粒细胞ALA最适浓度,在96孔板中加入起始细胞数量为1×10⁴/mL的水牛卵巢颗粒细胞,细胞贴壁12 h后更换含0(对照组)、10、50、100、200μmol/L ALA的培养液,在相同条件下处理24 h,用CCK-8进行细胞活力检测,筛选出最适处理浓度,并用于后续试验。后续试验分为对照组(0μmol/L)和处理组(50μmol/L)两组,用实时荧光定量PCR检测颗粒细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白1(p21)和增殖细胞核抗原(PCNA)基因的相对表达量,用免疫荧光对颗粒细胞中细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和细胞周期相关蛋白p21进行荧光检测和定量分析,用ELISA法检测培养液中水牛颗粒细胞分泌的雌二醇(E₂)和孕酮(P₄)含量。【结果】与对照组相比,水牛卵巢颗粒细胞经ALA处理2...     

不同氮源对山羊回肠黏膜上皮细胞凋亡的影响

试验旨在研究以蛋氨酸(Met)、NH₄Cl为不同氮源对山羊回肠黏膜上皮细胞凋亡的影响。试验采用细胞增殖试验、Hochest33342染色荧光显微镜检测、流式细胞术检测、线粒体膜电位的检测、检测凋亡关键蛋白的表达、观察通路关键蛋白表达等方法进行研究。结果显示,以无机氮源NH₄Cl代替有机氮源Met诱导回肠上皮细胞发生细胞体积缩小、细胞核固缩及由此引起的荧光染色颗粒增亮等形态学变化,发生线粒体膜电位和凋亡关键蛋白的表达显著下调(P<0.05),细胞发生凋亡。凋亡的发生促使促凋亡蛋白半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、P53抑癌基因(p53)和BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)的表达显著上调(P<0.05),而抑凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤因子2 xl(Bcl-xl)显著下调(P<0.05)。研究表明,Met缺失组和0.20 mmol/L NH₄Cl组均通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通...     

中药制剂抗肉鸡热应激作用机理的研究

50只1日龄艾维茵肉仔鸡饲养于人工气候室内,高温条件下饲养。随机分成对照组、试验组,试验组7日龄开始在日粮中添加0.1%的中药,连用7天。然后分别于14、21日龄分别取法氏囊,用流式细胞仪检测应激状态下法氏囊细胞凋亡率、细胞周期时相变化,Western blot方法检测法氏囊中Bcl-2和Caspase-3基因的蛋白表达水平。结果表明:试验组14、21日龄法氏囊细胞凋亡率明显低于对照组,差异显著(P0.05)。细胞周期时相发生变化,G1期细胞百分比数量明显减少,G2期细胞百分比数量明显增加,差异均显著(P0.05),S期细胞百分比变化不大,差异不显著(P0.05)。试验组法氏囊中Bcl-2的蛋白表达量高于对照组,差异显著(P0.05),而Caspase-3基因的蛋白表达水平与Bcl-2相反,对照组表达量明显高于试验组,差异显著(P0.05)。这表明中药对缓解热应激造成的法氏囊细胞凋亡的作用可能是通过上调Bcl-2基因、下调Caspase-3基因表达来完成的。     

梅花鹿IGF-1干扰载体的构建及其对鹿茸间充质细胞生长调控作用

IGF-1对鹿茸生长有重要调控作用,为进一步研究该基因对鹿茸间充质细胞生长的调控作用,本研究利用RNAi-Ready p SIREN-Retro QZs Green plasmid构建了IGF-1干扰重组载体,转染鹿茸间充质细胞,应用Western-blot、流式细胞术、MTT等方法,研究了IGF-1对细胞增殖、凋亡和细胞周期的调控作用,结果表明:干扰IGF-1表达会抑制鹿茸间充质细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期。     

高精料日粮对奶牛肝脏细胞凋亡的影响

选用12头安装瘤胃瘘管和肝、门静脉血管插管的泌乳中期荷斯坦奶牛,研究高精料日粮对反刍动物肝脏细胞凋亡的影响。试验随机分成2组:高精料组(HC)和低精料组(LC)。饲喂后通过瘤胃瘘管采集0~12 h瘤胃液,测定瘤胃p H值;生化分析法检测外周血中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、乳酸脱氢酶(LDH)、白蛋白(ALB)和总蛋白(T-Pro)含量;检测肝、门静脉血液中脂多糖(LPS)的含量;采用RT-q PCR法检测肝脏中凋亡相关基因的表达;分光光度计法测定肝脏细胞中Caspase-3、Caspase-8的活性;Western blot法测定NF-κB的蛋白表达量。结果:20周后,高精料组瘤胃内p H低于5.6且每天持续3 h以上,显示奶牛发生SARA。与低精料组相比,高精料组门静脉LPS的浓度显著升高,肝功能受到影响,肝脏中促凋亡基因表达上调,抑凋亡基因表达下调,NF-κB的蛋白表达量升高,Caspase-3、Caspase-8的酶活性均表达上调,且Caspase-3有显著性的差异。结果表明,长期饲喂高精料,使消化道中的LPS由门静脉进入肝脏,引起肝脏的炎性损伤,增加肝细胞的细胞凋亡程度。     

甘草查尔酮A衍生物对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响

为了探讨以甘草查尔酮A衍生物(4'-甲基-2,4-羟基查尔酮)对Lewis肺癌细胞的增殖抑制作用和对细胞周期的影响,试验利用MTT、流式细胞术及蛋白免疫印迹法检测4'-甲基-2,4-羟基查尔酮对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用及机制。结果表明:与空白对照组比较,各剂量组(10,20,40μmol/L)的4'-甲基-2,4-羟基查尔酮能有效抑制Lewis肺癌细胞增殖(P0.05),并可显著诱导其细胞凋亡(P0.05),其作用呈时间浓度依赖性;4'-甲基-2,4-羟基查尔酮可使Lewis肺癌细胞的Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达增高,而使Bcl-2蛋白表达降低。说明4'-甲基-2,4-羟基查尔酮能有效抑制Lewis肺癌细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,其机制可能与其改变细胞凋亡的线粒体途径中的Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达水平有关。     

三氧化二砷对鸡马立克氏病肿瘤细胞凋亡的影响

研究了三氧化二砷（As2O3）对诱导鸡马立克氏病（MD）肿瘤细胞株MDCC—MSB1细胞凋亡相关基因Fas、Caspase-3 mRNA表达及Caspase-3活性的影响，进而探讨了AS2O3诱导MD肿瘤细胞株凋亡的机制。以体外培养MDCC-MSB1为研究对象，经终浓度分别为0、2、4和8μmol／L的As2O3作用48h后，采用荧光显微镜观察细胞的形态学变化，DNA Ladder法检测细胞凋亡情况，RT-PCR方法检测Fas、Caspase-3 mRNA的表达水平，试剂盒比色法检测Caspase-3活性的变化。结果表明，AS2O3能引起典型的凋亡形态学变化，并出现典型的DNA Ladder，同时Fas、Caspase-3 mRNA的表达水平和Caspase-3活性均增加，组间差异均极显著（P〈0．01），呈现剂量依赖性。证实As2O3诱导鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞凋亡是通过增加Fas、Caspase-3 mRNA的表达和提高Caspase-3活性来实现的。