3种酶液和H2O2处理对水曲柳体胚发生的影响（英文）

[目的]研究3种外源氧化酶液和H2O2处理对水曲柳体胚发生的影响。[方法]利用不同浓度多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)、葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)溶液和过氧化氢(Hydrogen peroxide,H2O2)处理未成熟水曲柳合子胚子叶,探索不同处理对水曲柳体胚发生中子叶外植体生长、褐化以及体胚发生的影响,通过对比分析不同处理在水曲柳体胚发生中的作用,揭示水曲柳体胚发生中外植体褐化与体胚发生的关系。[结果]H2O2处理使水曲柳外植体褐化提前发生,且抑制了外植体的生长和体胚发生;不同浓度PPO处理促进外植体生长和褐化,并提高体胚发生率;GOD和SOD处理均提高外植体的褐化率;经过酶处理的外植体,当体胚发生提前时,各体胚发生率都很低,而当处理30d的体胚诱导率与处理60d的体胚诱导率相差较大时,其体胚发生率较高。[结论]该研究结果为提高水曲柳体胚诱导率、改善水曲柳体胚发生状况和优化水曲柳体胚发生系统奠定了基础。     

PPO处理对水曲柳合子胚子叶外植体褐化和体胚发生的影响

以水曲柳合子胚子叶为外植体诱导体胚发生,通过在液体培养基中加入不同质量浓度的多酚氧化酶(PPO),研究其对外植体褐化和体胚发生的影响。结果表明:在培养30 d后,发生体胚的外植体基本上都是褐化的,且这些发生体胚的外植体具有活细胞的脆性和弹性,证明了前期研究中"水曲柳体胚发生伴随外植体褐化现象是稳定的"的结论;50 mg·L-1的PPO处理,可以显著促进水曲柳未成熟合子胚子叶外植体的褐化进程,相应地显著提高了其体胚发生率,培养第10天时外植体褐化率、总的体胚发生率和培养10 d时褐化外植体的体胚发生率,均显著高于对照和其他质量浓度的PPO处理;50 mg·L-1的PPO处理,也显著促进了水曲柳成熟合子胚子叶外植体的褐化进程,体胚发生率高于其他处理和对照,但差异未达显著水平;体胚发生前期,50 mg·L-1外源PPO处理的未成熟水曲柳,其外植体内源的PPO活性大于对照,POD和CAT活性低于对照。     

水曲柳体胚发生过程中不同状态类型外植体的生理生化状态

以水曲柳Fraxinus mandshurica幼嫩合子胚子叶为外植体诱导水曲柳体胚发生,对该过程中外植体的不同状态类型分别取样,检测这些不同状态类型外植体的多糖含量、可溶性蛋白质含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)活性等生理生化指标,分析不同状态类型外植体生理生化与体胚发生、愈伤组织发生、外植体褐化、外植体生长等方面的关系,以便为分析水曲柳体胚发生机理和改善其体胚发生技术提供依据.研究结果表明,不同状态类型外植体的生理生化状态与体胚发生、愈伤组织发生、外植体褐化和生长发育存在非常有趣的相关关系,值得进一步深入解析.     

抗褐化剂对水曲柳成熟胚外植体褐化及体胚发生的影响

利用抗坏血酸(ASA)、谷胱甘肽(GSH)、硝酸银(AgNO_3)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等抗褐化剂处理,检验水曲柳(Fraxinus mandshurica Rupr.)外植体褐化与体胚发生的响应格局及其相互关系。结果表明:①10 mg·L~(-1)的ASA处理显著降低了植体褐化指数(代表外植体褐化面积比值)、褐化率和体胚发生率;随着ASA质量浓度的增加,褐化指数、褐化率和体胚发生率不断增加;在100 mg·L~(-1)时,褐化率达到98%(等同于对照),褐化面积和体胚发生率分别达到0.734和73%,均显著高于对照(P0.05);200 mg·L~(-1)对外植体致死;协方差与相关性分析表明,ASA处理对水曲柳外植体褐化与体胚发生的影响格局之间具有显著相关性。②GSH对水曲柳外植体褐化指数和褐化率的影响较小,无规律性变化格局;10、20 mg·L~(-1)的低质量浓度处理显著降低体胚发生率,但随质量浓度增加体胚发生率增加,在200 mg·L~(-1)处理时显著高于对照,与100 mg·L~(-1)以下ASA处理的体胚发生影响趋势一致。③AgNO_3在显著降低水曲柳外植体褐化指数和褐化率的同时也显著降低了体胚发生率;PVP处理对水曲柳外植体褐化影响不大,各处理体胚发生率虽均高于对照,但无规律性变化格局。④GSH、PVP和AgNO_3这3种抗褐化剂对水曲柳外植体褐化与体胚发生的影响格局之间不具有显著相关性。综上,ASA可以用来进行水曲柳体胚发生伴随外植体褐化现象生物学机制解析的优选试剂。     

取材时期和母树来源对水曲柳体细胞胚诱导的影响

以水曲柳(Fraxinus mandshurica Rupr.)不同母树、不同发育阶段的未成熟合子胚切离子叶为外植体,研究了外植体发育时期和母树来源对该树种体细胞胚诱导的影响。结果表明:外植体的取材时期、母树来源及二者的交互作用对水曲柳体胚诱导均具有极显著影响(p0.01),影响大小依次为取材时期采种母树交互作用;7月下旬到8月上旬是水曲柳体胚诱导的最佳采种时期,此时种子的胚乳已固化,合子胚形态分化完成,胚大小达到胚腔的2/3左右,47株母树的平均诱导率分别达到15.86%和16.77%,最高的4株母树的诱导率达到53.33%~66.67%。     

香樟子叶胚体胚发生诱导的研究

以香樟的子叶胚为外植体,以 MS 为基本培养基,研究不同植物生长调节剂组合对香樟子叶胚体胚发生诱导的影响。结果表明,配方 MS＋2,4 D 0·5 mg/L＋6 BA 1·0 mg/L＋水解酪蛋白（CH）1·0 g/L 对香樟子叶胚的体胚发生诱导率较高,诱导率为83·3％,平均体胚数为3·4枚,且生长状态较好;香樟体胚经萌发诱导处理后,萌发率可达48％。     

5-氮胞苷对水曲柳合子胚外植体状态及体胚发生的影响

通过在培养基中添加5-氮胞苷,研究了其对水曲柳合子胚外植体状态和体胚发生的影响.在培养开始时加入不同浓度的5-氮胞苷会抑制水曲柳愈伤组织发生和水曲柳体胚发生.各浓度处理的愈伤组织诱导率均低于未添加5-氮胞苷的对照,且差异显著.除了50.0和100.0 μmol/L处理的体胚发生率与未添加5-氮胞苷的对照差异不显著外,其...     

小麦胚性愈伤组织发生影响因素的研究

小麦成熟胚愈伤组织的诱导率、生长率及胚性愈伤组织发生率的基因型效应有显著差别。供试的 5个基因型中 ,愈伤组织诱导率基因型间差异达到极显著水平。诱导率大小顺序为 :辽 10>774 2 >Roblin>7757>新克旱 9。以成熟胚为外植体的胚性愈伤组织发生率 ,辽 10为 78% ,774 2为 10 % ,新克旱 9为 0 %。外植体与基因型共同作用影响胚性愈伤组织发生率 ,774 2两种外植体(成熟胚与幼穗 ) ,都有胚性愈伤组织发生。但不同外植体发生率不同 ,成熟胚为 10 % ,幼穗为 1%。而新克旱 9两种外植体均无胚性愈伤组织发生 ,并有褐化愈伤组织 (褐化率分别为 6 9.50 %和53.70 % )。培养基不同胚性愈伤组织发生率也不同     

攸县油茶胚状体发生及其组织学观察

[目的]研究以攸县油茶(Camellia yuhsienensis Hu)成熟子叶为外植体的胚状体发生情况。[方法]以子叶为外植体,接种于MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT培养基上,诱导胚性愈伤组织。胚性愈伤组织块转接至以MS为基本培养基,添加不同浓度6-BA和NAA的激素组合的培养基上诱导产生胚状体。取不同发育阶段的组织块制作石蜡切片,进行组织学观察。[结果]成熟子叶块接种于诱导培养基MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT,15d左右开始出现胚性愈伤组织。胚性愈伤组织转接至培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA时胚状体诱导率最高,为87.78%;无激素培养基也能诱导胚性愈伤组织产生胚状体,但诱导率极低,仅为6.67%。组织学观察表明,胚性细胞由愈伤组织表面及其内部邻近的若干细胞分化而来,经过球形胚、心形胚、子叶形胚等不同发育阶段直至成熟胚状体。[结论]诱导胚性愈伤组织分化为胚状体的最佳培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA。     

黑暗预处理对蝴蝶兰组培中外植体褐化的影响

以蝴蝶兰R4品种叶片为外植体,研究不同时间的黑暗预处理对褐化率、多酚氧化酶(PPO)活性和总酚含量的影响。结果表明:黑暗预处理能减轻褐化,其中以预处理10 d的褐化最轻;未经暗处理的褐化最重且PPO活性最大,总酚含量无一致变化规律,各处理中褐化率与PPO活性显著相关。     

小麦对白粉菌过敏性反应与H2O2及3种氧化酶活性变化的关系

[目的]研究小麦对白粉菌过敏性反应与H2O2及3种氧化酶活性变化的关系,为探讨小麦对白粉菌抗性生理机制奠定基础。[方法]以白粉菌菌株17（Bt17）和菌株6（Bt6）及小麦品种扬158为试验材料,测定H2O2处理的小麦叶片过敏性细胞数量及POD、PPO、SOD酶活性。[结果]乳突在亲和性与非亲和性组合叶表细胞形成的差异不大,非亲和性反应叶表细胞过敏性反应发生早且明显比亲和性反应多;接种Bgt17后不同时间及非亲和性组合中含H2O2的过敏性反应细胞频率明显高于亲和性组合;用5、10、20mmol/L抗坏血酸处理后,小麦叶片中过敏性细胞数量显著减少,15.0与30.0mmol/LH2O2处理后诱导亲和性反应小麦叶片中过敏性细胞数量显著增加;接种白粉菌后,小麦叶麦中POD、PPO、SOD活性均呈先上升后下降趋势,且非亲合组合比亲合组合3种酶的活性高。[结论]H2O2、PPO、SOD活性与小麦对白粉菌抗性存在一定相关性。     

喜树愈伤组织诱导与抑制褐化的研究

[目的]筛选喜树外植体的最佳诱导培养基,研究抑制外植体及继代愈伤组织褐化的方法。[方法]以喜树的幼叶和种胚作为外植体,通过测定过氧化物酶和多酚氧化酶的活性,从外植体选择、培养基种类、激素配比、添加物的处理等方面进行愈伤组织的诱导和抑制外植体及继代愈伤组织褐化的研究。[结果]幼叶外植体的最佳诱导培养基为:SH+NAA2.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+6-BA0.25mg/L;种胚外植体的最佳诱导培养基为:MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L。抑制幼叶外植体褐化的方法为:增加外植体大小,吹干培养基表面水分。抑制愈伤组织继代培养褐化的方法为:最佳诱导培养基附加30mg/L抗坏血酸和5g/L活性碳;1次继代后,将质地致密的愈伤组织转移到MS培养基上培养。[结论]该研究为喜树的遗传转化和植株再生提供理论基础。     

多酚含量及多酚氧化酶活性与柑橘胚性愈伤组织褐化的关系

研究测定了9种不同品种/基因型柑橘胚性愈伤组织的多酚含量和多酚氧化酶（polyphenol oxidase, PPO）的活性,对其与柑橘愈伤组织褐化的关系进行了探讨。结果表明,不同柑橘品种/基因型间多酚含量和PPO活性有明显不同;多酚含量高的宽皮柑橘类胚性愈伤组织容易褐化,葡萄柚与甜橙类的次之,说明柑橘胚性愈伤组织褐化与多酚含量成正相关;PPO活性与柑橘愈伤组织褐化无明显相关。     

甜叶悬钩子植物组织培养褐化现象控制研究

[目的]寻求甜叶悬钩子组织培养中的最佳抗褐化剂。[方法]以甜叶悬钩子的茎和叶为外植体,必MS为基本培养基,加入不同浓度的抗褐化剂（20％Na2S2O3、Vc和AC）,研究不同抗褐化剂对甜叶悬钩子组织培养的影响。[结果]AC和Vc都能对不同外植体起到抗褐化作用,在加入20％Na2S2O3的培养基上,外植体的褐化程度与Na2S2O3的浓度成正比,培养基中20％Na2S2O3的添加量达20ml时,外植体褐化最为迅速;在加入Vc的培养基上,随着Vc添加量的增加,培养基变成液体或半固体培养基,接入的外植体容易死亡;在加入AC的培养基上,AC的添加量为5g／L时,外植体的褐化率可控制在5％以下。抗褐化控制处理后,可以在诱导愈伤组织的培养基上培养出大量的愈伤组织。1结论IAC是较为理想的抗褐化剂,用量为5g／L。     

春剑花梗离体培养研究

[目的]研究一种或多种适合春剑(Cymbidum longibracteatum)愈伤组织诱导的方法,并试图找到有效控制褐化的措施。[方法]以春剑花梗为外植体进行离体培养,通过正交设计研究不同基本培养基及激素配比对花梗培养时褐化、生长和愈伤组织发生的影响;同时研究不同防褐化处理对花梗切段褐化率的影响。[结果]不同基本培养基及激素配比对花梗培养的影响显著,不同处理方式对花梗褐化控制效果显著。花梗切段愈伤组织诱导的最佳配方为B5+2,4-D 2.0 mg/L+TDZ 0.6 mg/L+GA30.5 mg/L,诱导率为7.32%。当花芽长度为2.0 cm时,花梗褐化率较低;当花梗切割厚度为8.0 mm时,花梗褐化率较低;PVP、VC、CA、8-HQS对花梗切段褐化均有显著的抑制作用,其中以8-HQS效果最好。[结论]建立了春剑花梗离体培养技术体系,为春剑快速繁殖和遗传育种奠定基础。     

不同激素配比对紫花苜蓿不同外植体愈伤组织诱导的影响

[目的]为紫花苜蓿外植体培养筛选最佳激素配比培养基。[方法]分别以盛世无菌苗的下胚轴、子叶、叶片、叶柄、根为外植体。在MS附加不同激素配比的培养基上诱导愈伤组织,研究不同处理对愈伤组织诱导率的影响。[结果]5种外植体均能诱导出愈伤组织,其中下胚轴的愈伤组织诱导率最高（达87．5％）,且愈伤组织长势良好,其次为子叶〉叶柄〉叶片〉根;不同外植体愈伤组织的形成时间为下胚轴〉子叶〉叶柄和根〉叶片;2,4-D诱导愈伤组织的效果优于NAA.[结论]2,4-D、NAA、6-BA和KT配合使用的培养基上形成的愈伤组织浅黄带绿,表面突起,松软,带簇状芽或单芽或形成胚状体.     

外源过氧化氢对水曲柳体胚发生中外植体抗氧化生理特性的影响

为了探讨外源过氧化氢（H₂O₂）对水曲柳体胚发生过程中外植体内部抗氧化物质、抗氧化酶、一氧化氮（NO）等的影响,以成熟水曲柳子叶胚为外植体诱导体胚发生,通过对体胚发生过程中不同时间段的外植体取材,测定其内部生理变化,分析外源H₂O₂对水曲柳内部生理生化的影响。结果表明：外源H₂O₂的添加,对水曲柳体胚发生过程中还原性抗坏血酸（ASA）的质量摩尔浓度的影响主要在中后期阶段（42 d）,且H₂O₂添加组高于对照组2.14%,对还原性谷胱甘肽（GSH）的影响在前期阶段（14 d）,H₂O₂添加组是对照组的3.23倍;外源H₂O₂处理提高外植体H₂O₂的质量摩尔浓度,在14 d时,外源H₂O₂处理和对照的H₂O₂     

影响木薯芽器官发生及植株再生的因素

[目的]对木薯芽器官发生的影响因素进行优化研究,建立了一个高效的植株再生体系。[方法]以木薯成熟胚状体的子叶为外植体,对木薯芽器官发生及植株再生的影响因素（基因型、AgNO3、外植体类型和碳源）进行优化研究。[结果]成熟培养14d的＂华南8号＂胚状体子叶为最佳外植体,诱导不定芽发生的最佳培养基为MS＋0.5mg/LCuSO4＋1.0mg/L6-BA＋0.5mg/LIBA＋6mg/LAgNO3,以麦芽糖代替蔗糖或葡萄糖作碳源可大大提高木薯不定芽发生率和植株再生率。[结论]该研究建立了高效的木薯植株再生体系,为培育高淀粉含量新品种（品系）奠定了基础。     

几种防褐剂对马铃薯愈伤组织培养褐化现象的抑制效应

[目的]在马铃薯的组织培养过程中存在着严重的外植体褐化现象。外植体表面的酚类物质容易氧化而生成褐色醌类,严重影响愈伤组织的诱导过程,适当控制培养条件可抑制褐化。[方法]选取硫代硫酸钠（Na2S2O3）、活性炭、维生素c、柠檬酸、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）5种抗褐剂进行防褐化效果的研究。每种抗褐剂都取不同的浓度进行平行试验。培养基为1／2MS＋0．3％琼脂＋1．5％蔗糖＋1．0mg／LNAA＋2．0mg／L2,4-D,于15℃下暗培养,每周转瓶1次。最后,统计褐化率,比较不同抗褐剂的作用效果。[结果]各种抗褐剂对马铃薯的生长均有一定的抗褐效果,其中,2．0g／L的硫代硫酸钠和8．0mg／L柠檬酸的防褐效果最好,可以将褐化率降低到15％以下。[结论]对生长的外植体添加一定的防褐剂有助于抑制组织培养中外植体的褐化现象。     

白皮松成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导研究

[目的]建立白皮松体细胞胚胎发生快速繁殖体系,诱导出胚性愈伤组织。[方法]以白皮松成熟合子胚为外植体,以DCR作为基本培养基,研究不同浓度激素对外植体发育和胚性愈伤组织得率的影响。同时在不同激素浓度下对培养4周的外植体外形以及胚性愈伤组织进行了观察与分析。[结果]培养基中加入2,4-D可以使得外植体生长减慢,并出现愈伤组织,6-BA则使外植体的子叶变长,膨大并玻璃化。当2,4-D浓度为8mg/L、6-BA浓度为2mg/L时,胚性愈伤组织的诱导效果较好,诱导率平均为40.625%,该愈伤组织为白色半透明状,细胞小而细胞质浓,说明高浓度2,4-D和低浓度6-BA有利于白皮松成熟胚的胚性愈伤组织的获得。[结论]合适的激素种类和浓度是诱导白皮松成熟胚产生胚性愈伤组织的关键因素。