苹果叶片离体培养中秋水仙素加倍效应的研究

用不同浓度的秋水仙素溶液处理苹果的栽培品种嘎拉试管苗的离体叶片，发现以０．５％的秋水仙素溶液处理４ｄ效果最佳，诱变频率达５６．１％。诱变后获得的四倍体植株在形态学和细胞学上发生了明显变异。     

百合的组织培养和试管内诱发多倍体试验

将各种百合的根段、茎段、叶片、珠芽、鳞茎盘、鳞片、花柱等进行组织培养都可分化成苗。在试管内无菌状态下采用秋水仙素处理,可获得百合多倍体,移栽后产生了大花的百合新类型。因此,上述方法是大量增殖百合良种和多倍体的捷径。     

寒富苹果叶片离体再生及四倍体诱导

为建立寒富苹果高效的离体再生体系和多倍体诱导体系,以试管苗叶片为外植体,研究了培养基中激素对寒富叶片再生芽的影响及适宜的四倍体诱导方法。结果表明,当培养基中BA质量浓度为0.5mg/L时,再生频率最高达35.7%;当培养基中BA质量浓度为2.5mg/L时,再生频率超过90%,平均再生芽数在4以上。在培养基中附加1.0mg/LTDZ,再生频率达100%,平均再生芽数达19.47。以附加15、30、60、120mg/L秋水仙素的液体再生培养基处理叶片5d,各个质量浓度处理均诱导出四倍体植株,诱变率在5.3%～22.2%之间;寒富苹果叶片在附加50mg/L秋水仙素固体再生培养基上处理5d亦获得了四倍体植株。研究结果表明寒富苹果叶片具有极强的不定芽再生能力,叶片再生过程中进行秋水仙素处理是获得其四倍体的一个有效途径。     

灌木铁线莲多倍体诱导与鉴定

采用秋水仙素棉球处理法和琼脂处理法对灌木铁线莲进行诱变处理,以探究秋水仙素诱导灌木铁线莲多倍体的最佳条件和鉴定方法,成功获得了同源四倍体新种质(2n=4x=32)。研究结果表明,对于灌木铁线莲的秋水仙素诱变处理,棉球处理法要优于琼脂处理法。棉球处理法以0.2%～0.3%浓度的秋水仙素下处理48～72 h的诱变效果较好,琼脂处理法在0.2%浓度下处理96 h的变异率最高,为20%。琼脂处理可通过延长处理时间增强诱变效果。秋水仙素处理过的植株生长发育较为缓慢、株高降低,叶面积、叶片气孔变大。在对嵌合体不同倍性细胞含量的分析中,采用图像分析技术对气孔鉴定法进行创新,获得的嵌合率与流式细胞仪的鉴定结果呈极强相关性,推测此方式在多倍体鉴定中具有应用价值。     

秋石斛同源四倍体诱导与鉴定

 为了创制秋石斛同源四倍体新种质, 以秋石斛同株异花授粉种子为材料, 用组织培养方法,通过种子非共生萌发与原球茎诱导, 在原球茎发育的原胚期, 以低浓度混合诱变剂进行多倍体诱导。结果用0.01%秋水仙素+ 5 mg·L ^{- 1}氨磺灵处理8～10 d, 四倍体(2n = 4X = 76) 诱变率达90%以上, 未发现嵌合体。与二倍体对照比较, 四倍体植株粗壮, 叶色深绿, 叶片宽厚。     

秋水仙素在果树多倍体育种中的研究进展

对秋水仙素在果树多倍体育种中的应用进行了概述.主要包括利用秋水仙素诱变已经获得多倍体的果树种类及其品种;诱变浓度及诱变特点;诱导多倍体的途径及倍性鉴定方法,并指出了目前所存在的问题与研究动向.     

杜仲四倍体的诱导与鉴定

 以杜仲籽苗为材料,采用秋水仙素药液处理生长点的诱变方法及茎尖细胞染色体数目检测和DNA相对含量测定的倍性鉴定方法,研究了秋水仙素药液浓度,处理时间的诱变效果。结果表明,诱变率因处理的药液浓度和处理时间而异,除0.05%处理48 h外,其它浓度（0.1%,0.2%,0.4%）均以处理12 h效果最好,变异株率在43.3%~63.3%, 最佳处理组合为0.1%秋水仙素处理生长点12 h, 变异株率和四倍体株率分别为63.3%和36.7%。在获得的148个变异株中,染色体计数表明47株植株为四倍体（2n=4x=68）,占31.76%;染色体计数结果进一步被流式细胞仪分析验证。四倍体植株表现出多倍体特征,叶片变厚,叶面积增大,叶形指数减小,保卫细胞增大,单位面积气孔数减少,叶绿体数明显增多。     

秋水仙素对大蒜愈伤组织四倍体的诱导效应及试管鳞茎快繁体系构建

以大蒜品种六瓣红鳞茎片作为外植体诱导愈伤组织,用秋水仙素作为诱变剂对大蒜愈伤组织进行多倍体诱导,并比较了不同秋水仙素浓度及处理时间对大蒜愈伤组织多倍体诱导效应的影响。结果表明,大蒜愈伤组织四倍体诱导率随秋水仙素处理浓度递增而升高,随处理时间递增呈现先升高后降低的趋势;染色体畸变率随秋水仙素浓度升高及处理时间延长而升高。当秋水仙素浓度为0.200%,处理时间为18h时,四倍体诱导率最高,为36.36%,可以作为最适诱导体系。经秋水仙素诱导后的愈伤组织成功再生出试管苗并获得试管鳞茎。     

鹤顶兰四倍体植株的诱导与鉴定

 以鹤顶兰原球茎为材料,使用秋水仙素进行了四倍体的离体诱导。结果表明,采用秋水仙素浸泡法可以诱导鹤顶兰原球茎发生倍性变化,含0.02%秋水仙素的“花宝一号”溶液浸泡处理6 d诱导率最高,达22.5%。细胞学鉴定发现,诱变成活植株中有3株为四倍体,其植株形态、气孔大小、气孔密度与二倍体存在差异,细胞核明显增大。     

苹果叶片离体培养中秋水仙素加倍效应的研究

用不同浓度的秋水仙素溶液处理苹果的栽培品种嘎拉试管苗的离体叶片，发现以０．５％的秋水仙素溶液处理４ｄ效果最佳，诱变频率达５６．１％。诱变后获得的四倍体植株在形态学和细胞学上均发生了明显变异。与对照株比较，变异株茎矮、粗壮、节间短、叶片厚、叶色浓绿；叶背面的气孔体积增大，单位面积气孔数目减少、茸毛数量增加；染色体数目加倍，２ｎ＝４ｘ＝６８（对照２ｎ＝２ｘ＝３４），细胞核核仁数目增加。梢端组织学切片证明，变异株中同质突变体的频率达７３％。     

秋水仙素诱变薄皮甜瓜同源四倍体研究

为了获得四倍体薄皮甜瓜材料,研究薄皮甜瓜多倍体的特征特性,以二倍体薄皮甜瓜金美为材料,以0.2%、0.4%、0.6%的秋水仙素采用滴苗和浸种2种方法进行诱变四倍体试验,并通过染色体观察和细胞学鉴定对其进行倍性分析。结果表明,滴苗法比浸种法诱变率高,其中以0.4%秋水仙素滴苗诱变率最高,为6.67%;与二倍体相比,四倍体植株子叶和真叶长宽比变小,茎增粗,节间变短,花冠变大,果肉变厚,种子增宽,可育性降低,中心可溶性固形物含量增高;保卫细胞变大,气孔密度变小,保卫细胞内叶绿体数目增加;获得了同源四倍体材料。     

秋水仙素离体诱导冬枣和酸枣四倍体

 以冬枣和酸枣组培苗丛芽为材料, 研究了秋水仙素诱导染色体倍性变异的最佳浓度与时间组合、多倍体的特征及其纯化技术。结果表明: 秋水仙素处理的最佳组合为50 mg·L ^{- 1}秋水仙素处理40 d,诱导酸枣和冬枣染色体加倍的频率分别达36.37%和26.67%。嵌合体经3～4次继代分离得到了纯化, 并对纯化后的变异株进行了增殖和生根。变异株根尖染色体数加倍(2n = 4x = 48) , 叶片增厚, 栅栏组织、海绵组织明显发达, 茎尖LⅠ、LⅡ和LⅢ层细胞均显著变大, 充分表明获得的变异株为同质四倍体。同质四倍体的主要特征为: 叶片增大, 叶色浓绿, 叶缘锯齿增大, 保卫细胞增大, 气孔密度降低。变异株在诱导期间表现出生长缓慢、叶片变圆、节间变短的暂时现象。     

铁皮石斛多倍化诱导与鉴定研究

以铁皮石斛拟原球茎为材料,利用秋水仙素作为诱导剂,研究不同浓度及时间条件下,秋水仙素对铁皮石斛多倍化的诱导效果。结果表明:秋水仙素浓度为0.2%,处理时间为48h,诱导效果最佳,成活率达78%,变异率为32%;处理后的铁皮石斛在形态、气孔直径、染色体数目上都有变化,呈多倍体表型特征,其体细胞染色体数多为2n=68～76条,而对照2n=38～40条。     

Micropropagation of Cymbidium Sleeping Nymph through protocorm-like bodies production by thin cell layer culture

Transverse thin cell layers (tTCLs) of protocorm-like bodies of two stages of PLBs (30 d and 60 d old) of Cymbidium Sleeping Nymph were used as explants to induce PLBs by using coconut water (CW) as a natural additive. 5% (v/v) CW supplemented to KC medium induced an average of 5 PLBs per responding tTCL of 30 d old PLBs with 83% of responding tTCLs. A low percentage of responding tTCLs were observed in 60 d old PLBs’ tTCLs. Anatomical and confocal microscopic studies traced the origin of PLBs to subepidermal layers of the tTCL. A significantly high percentage of shoot regeneration was obtained from PLBs formed on 1–10% (v/v) CW from tTCLs of 30 d old PLBs in comparison to PLBs induced on control after first subculture on KC medium (without CW). The induced PLBs regenerated into plantlets with velamenous roots and these plantlets were transferred to greenhouse conditions on cocopeat:perlite (9:1) with nearly 100% survival. Post-transfer performance of the plantlets was monitored. The results suggest tTCLs as potential explants (with respect to economy of precious hybrid materials) which can overcome the slow growth of hybrid PLBs and coconut water as a single natural additive for the mass multiplication of commercially important orchids.     

苹果三倍体后代培养及倍性鉴定

以自然授粉的三倍体苹果品种乔纳金的种子为材料,研究了培养方式对苹果三倍体实生后代获得的影响及实生后代的倍性水平。结果表明,离体培养与常规播种在乔纳金种子成苗率上存在明显差异,其中离体培养的成苗率是48.1%,常规播种的成苗率是20.9%,离体培养获得的植株是常规播种获得的植株的2倍以上。本研究获得的690个乔纳金实生后代中以非整倍体植株占多数,共获得非整倍体452株,占植株总数的65.5%。在后代中有13个为多倍体,其中离体培养获得7株三倍体和4株四倍体,而常规播种只获得2株三倍体,表明离体培养可以获得较多的多倍体资源。乔纳金实生后代中不同倍性植株在形态上差异显著,根据植株形态和叶形指数,可以容易地将多倍体(三倍体、四倍体)植株与二倍体植株和非整倍体植株区分开来。     

秋水仙素处理‘罗田甜柿’获得12倍体再生植株

 以‘罗田甜柿’试管苗离体叶片为材料，研究了秋水仙素浓度及处理时间对诱导染色体倍性变异的影响。结果表明：0.3％秋水仙素处理4～6 d，可诱导染色体加倍; 与对照比较, 再生变异植株的气孔孔径增大，密度降低，根尖染色体数2n=12x=180，叶片DNA含量为对照的两倍。LI、LⅡ、LⅢ细胞层均加倍的证据表明，获得的倍性变异株为同质12倍体。     

姜四倍体离体诱导及其形态学分析

以丛生芽为材料,在离体培养条件下比较了秋水仙素不同浓度、不同处理时间诱导姜体细胞染色体加倍的效果。结果表明:以0.20%秋水仙素液体培养基处理8d的诱导效果最好,诱变率和成活率分别达到了42.86%和70.00%。根尖染色体压片检查发现,四倍体染色体数为2n=4x=44,二倍体对照为2n=2x=22。四倍体与二倍体相比表现出植株高大,茎秆变粗,叶片长、宽、厚均增大,叶片下表皮气孔密度减小,气孔和保卫细胞增大,保卫细胞内叶绿体数增加等特征,其中气孔密度及保卫细胞内的叶绿体数可作为鉴别四倍体与二倍体的重要性状。     

Storage and high conversion frequency of encapsulated protocorm-like bodies of Cymbidium devonianum (orchid)

Summary

A method for the storage and high frequency conversion of Cymbidium devonianum protocorm-like bodies (PLBs) is reported. To study the effect of nutrient level on storage, PLBs were encapsulated in calcium alginate beads supplemented with 1.0×, 0.5×, 0.25×, or 0.125× Murashige and Skoog (MS) basal medium containing 0.3% (w/v) sucrose, without agar in the encapsulating matrix, and stored at room temperature (25º ± 2ºC) in the dark. Beads containing 0.25× MS were also kept at different temperatures (0ºC, 4ºC, 8ºC, or room temperature) in the dark to ascertain the optimal temperature for storage. One set of controls (i.e., non-encapsulated PLBs) was maintained for each treatment. The survival and subsequent percentage conversion values of PLBs were assessed at 30 d storage intervals after culturing on MS regeneration medium. Compared to the controls, all encapsulated PLBs showed improved storage at room temperature. In all treatments, non-encapsulated PLBs did not survive, but turned brown and died. Encapsulated PLBs in 0.25× MS medium could be stored for 90 d at room temperature without any significant loss in viability. However, a significant decrease in the survival percentage was recorded after longer storage times. Encapsulated PLBs containing 0.25× medium could be stored at 4ºC and 8ºC for 120 d and 180 d, respectively, without loss of viability. As storage times increased beyond 180 d, the survival percentage of encapsulated PLBs decreased. The conversion of encapsulated PLBs led to the emergence of regenerated plantlets. Initially, small green globular outgrowths from the PLBs were observed on the surface of the beads. These outgrowths multiplied to form clusters of PLBs which then regenerated into plantlets. In both studies, more prolonged storage of encapsulated PLBs increased the time interval for germination and plantlet regeneration on MS regeneration medium. Similarly, decreases in both basal MS strength in the matrix, and in storage temperature, resulted in an increase in the time required for germination and plantlet regeneration. Plantlets that regenerated from stored, encapsulated PLBs were hardened-off, and a high survival percentage (90%) was obtained in a glasshouse.     

秋水仙素离体诱导同源四倍体青花菜

 以青花菜品种‘海兹’高频再生试管苗为外植体, 利用秋水仙素离体诱导四倍体。结果表明: 用含秋水仙素200 mg·L ^{- 1}的MS + 0.1 mg·L ^-1NAA + 6.0 mg·L ^{- 1} 6-BA液体培养基处理2 cm长的再生苗48 h, 每个外植体平均可产芽2.1个, 再生植株变异率为83.33% , 四倍体诱导率达79.17%。与二倍体相比, 四倍体植株叶片、花冠、气孔等均表现巨大性; 流式细胞仪倍性鉴定显示, 对照DNA相对含量为200, 四倍体再生植株为400。四倍体根尖染色体2n = 4x = 36。     

秋水仙素注射大蒜花苞诱导四倍体的研究

为获得染色体加倍的大蒜植株,用0.05%、0.10%、0.15% 和0.20% 的秋水仙素注射苍山糙蒜和金蒜3 号的花苞,并在不同生长调节剂组合的MS 培养基上培养花苞内形成的气生鳞茎,当再生体系建立后,对根尖进行倍性鉴定。结果表明,MS 基本培养基添加0.05 mg·L-1 NAA 和2.0 mg·L-1 KT 能诱导较多的气生鳞茎萌发,直径4～5 mm 的气生鳞茎萌发率最高,且苍山糙蒜气生鳞茎的萌发率整体比金蒜3 号高。秋水仙素注射花苞后,金蒜3 号的花苞死亡率远远高于苍山糙蒜。随着秋水仙素浓度增大,花苞内形成气生鳞茎数不断降低,染色体加倍率升高。苍山糙蒜以0.20% 秋水仙素浓度处理下四倍体诱导率最高,为7.69%;金蒜3 号以0.15% 秋水仙素浓度处理下四倍体诱导率最高,为11.76%。