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从15头BLV阳性牛和20头BLV阴性牛采集血清、乳样和尿样。血清用含0.2%吐温一20,0.001%硫柳汞的*BS作1:100稀释,乳样作1:4稀释,阳性和阴性参照血清溶于0.sml灭菌蒸馏水中,再作1:100稀释。阳性参照血清稀释后一式3份用于各个试验板中,以便计算阳性临界值。ELISA试验步骤为;100PI稀释血清加入含病毒抗原孔或阴性对照抗原孔.4C“作用18~24h.用稀释缓冲液洗板3次.每孔加入100ul过氧化物酶结合物(抗牛IgGI单克隆),371:温有比,洗涤后加入10On底物(PH4.2,0.SM醋酸盐缓冲液中溶有ZmMABTS,添有外l%H。0,… 相似文献
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兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
用兔出血症病毒(RHDV)单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立RHDV抗原捕获ELISA检测方法,优化反应条件并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明,单抗最佳包被质量浓度为1mg/L,兔多抗血清最佳质量浓度为4mg/L。本方法可特异性地检测出兔肝脏病料中的RHDV,纯化病毒的最低检出量为26μg/L。对已知阳性样品的检测显示,捕获ELISA检测的病毒滴度是HA试验的3~13倍。对67份可疑病料,捕获ELISA阳性检出率为62.7%,HA试验阳性检出率为55.2%。用不同批次包被的酶标板重复检测已知样品显示出良好的重复性。本方法敏感性、特异性、稳定性良好,可应用于RHDV的快速、批量、特异检测。 相似文献
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1测定原理
"瘦肉精"(克仑特罗)竞争酶标免疫检测的基础是抗原抗体反应。酶联板的微孔包被有针对兔抗克仑特罗特异性抗体的羊抗体(第2抗体)。加入兔抗克仑特罗特异性抗体(第1抗体)与第2抗体结合而被固定,洗涤后加入标准液或样品溶液与酶结合物(酶标记抗原), 相似文献
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1 发病情况2 0 0 0年 8月 ,平安县平安镇兽医站有 4只脚癣病患兔求诊。2 临床症状初在鼻、唇、眼圈出现脱毛、骚痒 ,发红 ,继而在其它部位(主要是四肢下端 )出现脱毛 ,骚痒、渗出 ,以后结成干痂 ,患兔食欲减退 ,精神不振、消瘦。3 治疗针对以上症状 ,对 4只患兔采用了中西医结合疗法 ,具体做法 :剪除患部兔毛 ,用盐水清洗浸泡患部痂皮 ,再用 2 %的敌百虫溶液在患部洗擦 2~ 3次 ,洗至患部出现新鲜的皮肉 ,最后将研成末的紫草用食油调成糊状涂在患部 ,每隔 1~ 2d重复治疗 1次 ,3d后症状明显减轻 ,一周后痊愈。用紫草和敌百虫治疗兔脚癣… 相似文献
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为调查甘肃省兔艾美耳球虫的感染状况、虫种分布和风险因素,本研究从甘肃省平凉、酒泉、武威地区采集5个不同品种兔的592份粪便样品,提取粪便样品中的基因组DNA,基于艾美耳球虫核糖体第1内转录间隔区(ITS1)设计引物,采用特异性PCR扩增兔艾美耳球虫基因片段。结果发现,兔艾美耳球虫的总感染率为50%(296/592);通过序列比对分析共鉴定出7种不同的兔艾美耳球虫,分别是大型艾美耳球虫(24.5%,145/592)、肠艾美耳球虫(4.1%,24/592)、中型艾美耳球虫(11.5%,68/592)、穿孔艾美耳球虫(19.8%,117/592)、维氏艾美耳球虫(24.5%,145/592)、小型艾美耳球虫(4.9%,29/592)和盲肠艾美耳球虫(0.84%,5/592);以大型艾美耳球虫、维氏艾美耳球虫、穿孔艾美耳球虫为优势虫种,同时发现所调查的兔中有多重感染的情况,最多包括四重感染。统计学分析显示,地区因素(P<0.05)、品种因素(P<0.05)和年龄因素(P<0.05)是影响兔艾美耳球虫感染率的风险因素,提示应该针对这3种因素采取有效的防控措施。本研究结果揭示了甘肃省部分地区养殖场兔的艾美耳球虫感染率、虫种分布和感染率的风险因素,为预防和控制甘肃省地区养殖兔的艾美耳球虫病提供了科学依据。 相似文献
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对兔卵母细胞的孤雌激活方法进行探讨,为兔的体细胞核移植奠定良好的技术平台。体外成熟培养20~22h的兔卵母细胞随机分组,分别进行以下试验:采用不同脉冲电压、脉冲次数和脉冲时间,电激活兔卵母细胞,摸索最佳电激活参数;比较不同的激活方法处理免卵母细胞的效果,Ⅰ:Ion5min+6-DMAP3h,Ⅱ:Ion5min+CHX3h,Ⅲ:Ion5min+6-DMAP联合CHX3h,Ⅳ:电激1次联合6-DMAP+CHX3h;优化6-DMAP与CHX作用时间。结果显示:当电激参数为:电压40V/mm,脉冲时间20μs和脉冲次数3次时,兔孤雌胚的分裂率和囊胚率最高,可达80.64%和14.51%;采用第Ⅳ种方法激活兔的卵母细胞,胚胎的分裂率和囊胚率(80.64%,13.71%)均显著高于Ⅰ组(66.67%,8.6%)和Ⅱ组(43.21%,1.24%,P〈0.05),略高于第Ⅲ组(77.59%,12.07%);当兔孤雌胚分别在含6-DMAP和CHX的CM中培养1。h和3h时,1h处理组在分裂率(80.68%vs77.59%)和囊胚率(15.91%vs12.07%)上都略高于3h处理组。结果表明:兔卵母细胞经Ion处理5min,或先电激1次(参数为电压40V/mm,脉冲时间20μs,脉冲3次),再用2mmol/L6-DMAP+5mg/LCHX处理1~3h,均可获得较好的激活效果,有利于兔孤雌胚的发育。 相似文献
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单克隆抗体捕捉猪瘟病毒抗原ELISA方法的建立 总被引:9,自引:0,他引:9
分别用原核表达的猪瘟病毒(CSFV)主要抗原E2蛋白和猪瘟基因疫苗免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合与克隆筛选出5株稳定分泌CSFV抗体的杂交瘤细胞株1E2、1G7、3A2、3B7和4B6.间接免疫荧光和Western-blotting试验结果表明,5株单抗均与CSFV E2蛋白和全病毒抗原反应.将筛选的CSFV特异性单抗1E2、3B7和4B6纯化后等量混合后包被酶标板(捕捉抗体),与兔抗CSFV IgG(检测抗体)联合应用,建立起CSFV抗原捕捉ELISA(AC-ELISA)方法.随后采用方阵滴定法确定了单抗与多抗的最适工作浓度及判定检测结果的OD450临界值.最后以建立的AC-ELISA检测CSFV细胞培养物、CSFV攻毒死亡猪的病料和临床猪瘟组织样品,结果表明,该方法敏感、特异、重复性好,与病毒分离和RT-PCR方法符合率分别为86.2%和90.3%. 相似文献
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重复超数排卵获取兔成熟卵母细胞的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用重复剖腹的手术方法,收集经过激素刺激超数排卵兔的成熟卵母细胞,分为垂体促卵泡素(FSH)组(3d分6次注射)和FSH与250mg/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)混合组,用正常排卵雌兔作对照。结果,经3次手术取卵(每次手术间隔至少50d以上),由输卵插管冲出卵母细胞,收集并筛选,用激素处理的2组获取总卵母细胞数和可用卵数比对照组均高出3倍以上(P<0.01),两种超排方法之间超排效果无显著差异(P>0.05),连续3次手术均成活兔中,对照组和FSH组3次聚卵效果无显著差异(P>0.05),FSH与PVP混合组次手术与第3次手术出现显著差异(P<0.01)。 相似文献
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采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法对塞北兔血液中的红细胞酯酶(Es-1,ES-3)、血红蛋白(Hb)、红细胞碳酸酐酶(CA)、血清转铁蛋白(Tf)、前转铁蛋白(Prt)、后白蛋白(Po)、白蛋白(Alb)和血清碱性磷酸酶(AKP)共9个蛋白位点的遗传多态性进行了检测。结果表明,在塞北兔群体中,Hb、Alb和Tf呈单态,Es-1、Es-3、Prt、Po、AKP和CA呈多态。根据多态蛋白位点的基因频率计算遗传距离,并用类平均聚类法进行聚类分析。结果表明,塞北兔与比利时兔遗传相似系数最大,遗传距离最近,与加利福尼亚兔遗传相似系数最小,遗传距离最远。 相似文献
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用直接电镜(EM)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和ELISA检测了35份幼兔腹泻粪便样品,从中发现了轮状病毒(RV)抗原和RVRNA,并见到了典型的完整RV粒子,从而首次在国内检测出兔RV。新检测出的两株兔RVRNA电泳型为4、2、3、2,短型,归属于A组RV的第Ⅰ亚组。 相似文献
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建立牛血浆中加米霉素含量的UPLC-MS/MS检测方法。血浆样品经甲醇沉淀蛋白,外标法定量, 使用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱,以甲醇:10 mM乙酸铵缓冲液为流动相,流速0.3 mL?min-1;柱温:50℃;进样量:10 μL。三重四级杆质谱仪电喷雾离子源(ESI),正离子扫描、多反应监测(MRM)。考察方法的线性范围、准确度与精密度、稳定性和稀释可靠性。结果显示,加米霉素出峰时间在1 min左右,本方法在1 ng?mL-1~100 ng?mL-1浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数(r)≥0.999,检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.5 ng?mL-1和1 ng?mL-1。3个浓度(1 ng?mL-1、50 ng?mL-1和100 ng?mL-1)的空白血浆添加样品批内和批间平均回收率分别在85.2%~96.4%和87.7%~94.0%之间,相对标准偏差(RSD)分别在1.4%~13.9%和2.9%~8.6%之间。准确度和精密度、稳定性及稀释可靠性均符合生物样品分析的相关要求。本方法可用于牛的血浆中加米霉素的浓度测定及药代动力学研究。 相似文献
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用獭兔肉为原料,经超声波处理后,以食盐、白砂糖和酱油为主要腌制剂对兔肉进行腌制,然后运用模糊数学评价法研究板兔加工中腌制剂对产品感官质量的影响以及超声波处理对板兔加工过程的影响。结果表明:利用模糊数学评价法得到板兔加工中主要腌制剂的最佳腌制工艺配方是食盐6%,白砂糖3%,酱油4%;经过超声波处理后进行腌制能比对照组提前1 d达到腌制平衡,缩短了腌制时间;同时,超声波处理后的兔肉也有利于产品风味的形成。 相似文献
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新型五香板兔加工技术研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用獭兔肉为原料,经超声波处理后,以食盐、白砂糖和酱油为主要腌制剂对兔肉进行腌制,然后运用模糊数学评价法研究板兔加工中腌制剂对产品感官质量的影响以及超声波处理对板兔加工过程的影响。结果表明:利用模糊数学评价法得到板兔加工中主要腌制剂的最佳腌制工艺配方是食盐6%,白砂糖3%,酱油4%;经过超声波处理后进行腌制能比对照组提前1 d达到腌制平衡,缩短了腌制时间;同时,超声波处理后的兔肉也有利于产品风味的形成。 相似文献
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1 “3合 1”制剂治疗兔耳癣 兔耳癣是由癣螨寄生于兔耳所致 ,是一种常见接触性传染病 ,危害兔群 ,必须及时治疗。许多养兔专业户经过多年的实践 ,采用自制的食用油“3合 1”制剂治疗兔耳癣效果很好 ,第 1次用药见效 ,第 2次用药即愈 ,治愈率在 97%以上。“3合 1”制剂的配制和用法 :食油 2 5mL ,加速灭杀丁 (即 2 0 %高效低毒杀虫剂 ) 1mL ,来苏儿液 1mL ,混匀装瓶待用。在使用前要仔细清除兔耳患病部分泌物或痂皮 ,然后用配好的药液 2~5mL涂抹患处。隔 2~ 1 0d再涂抹 1次 ,即可治愈。该制剂最好现配现用 ,并且在 2~ 3日内用完 ,以防… 相似文献