用供卵牛血清体外培养牛胚胎试验

牛受精卵的培养及移植一般用牛胎血清、犊牛血清、新生犊血清和去势牛血清等。这些血清对受精卵发育的有效性差异很大,使用前需进行试验。本试验以供卵牛血清,培养新鲜和解冻后的胚胎,比较其发育效果。     

兽用生物制品生产用牛血清质量标准研究——牛血清对Sp2/0细胞增殖试验研究

为制定兽用生物制品生产用牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准,将处于对数生长期的Sp2/0细胞分散,配制成50万/mL细胞悬液,用含10%不同牛血清的MEM营养液,在96孔细胞培养板上作对倍稀释,在5%CO2培养箱37℃培养48 h,计数每种血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率。结果表明,胎牛血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率为20%-26%,犊牛血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率为12%-18%。以胎牛血清作为标准参考血清计算不同牛血清对Sp2/0细胞的相对克隆形成率,3批胎牛血清的相对克隆形成率均在80%以上,6批有效期之内的新生牛血清的相对克隆形成率为50%左右。因此,将兽用生物制品生产用胎牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准规定为对标准血清相对克隆形成率不低于80%;新生犊牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准规定为对标准血清相对克隆形成率不低于50%。     

蜂王胎抗衰作用研究初报

以蜂王胎代替细胞培养液中的犊牛血清，观察鸡成纤维细胞的贴壁生长情况。结果表明：１０％的蜂王胎添加物不但可代替犊牛血清，而且可延长细胞的生长时间。提示其对人体抗衰的潜在作用。     

环形泰勒虫裂殖体感染细胞培养技术的改进

在环形泰勤虫裂殖体胶冻细胞苗工厂化生产中，将小转瓶培养改为大转瓶培养，在此基础上又用成年健康黑白花牛血清代替犊牛血清，加犊牛血清的培养液收获细胞数为１４６．０万个／ｍＬ，而加成年牛血清的培养液在２次细胞培养中收获细胞数分别达１５３．８万个／ｍＬ和１６２．０万个／ｍＬ。     

谈新生牛血清的质量控制

新生牛血清是指出生14h之内的未吃初乳的犊牛血清,也有人称之为小牛血清、犊牛血清等.由于它未受初乳影响,具有丰富的营养物质,抗体、补体中的有害成分最少,因而在生物学领域中得到了广泛应用,特别是在生物制品的生产制造过程中得到了大量应用.     

牛血清中非特异性因子对貉传染性肠炎病毒增殖的抑制作用

7例从丹麦进口的成牛血清,5例本地成牛血清、3例初生犊牛血清及1例胎牛血清对貉传染性肠炎病毒核内包涵体形成抑制率(平均值)分别为71.6％、77.1％、5.8％及23.4％,30例从丹麦进口成年牛血清、12例本地成年牛血清、12例初生犊牛血清及1例胎牛血清对REV的红细胞凝集抑制价平均分别为1:72.4、1:68、1:54.6及1:64。在有牛血清存在的情况下,应用组织培养增殖病毒时,REV的红细胞凝集价明显下降。牛血清中的抑制因子对猫胎肾细胞株具有亲和性。该抑制因子不是来自抗REV或者与REV有交叉反应的某种病毒的抗体,而是种非特异性抑制因子。     

应用小牛血清代替犊牛血清生产鸡痘细胞苗的研究试验

生产鸡痘细胞苗一直以来都是在细胞中加入适量犊牛血清的培养液进行培养．但是由于犊牛血清中广泛性的存在牛黏膜病的病毒抗体，给鸡痘细胞苗的生产带来了很大的困难。为了排除该病毒抗体的干扰，顺利而稳定地生产鸡痘细胞苗，因此笔者应用小牛血清代替犊牛血清生产鸡痘细胞苗的试验。最后测得两种细胞苗的效价基本相等．从而可以得出利用小牛血清代替犊牛血清生产鸡痘细胞苗是可行的。     

猪卵母细胞在玻璃化冷冻液中的培养效果

本试验的目的是要选择较好的用于猪卵母细胞玻璃化冷冻的玻璃化冷冻液，玻璃化液由ＴＣＭ－１９９、ｍＰＢＳ、Ｋｉｅｖ液分别加２０％的犊牛血清与３种抗冷冻剂（丙三醇、１，２──丙二醇和乙二醇）组成。猪卵母细胞采自屠宰厂的卵巢并培养在ＴＣＭ－１９９＋２０％犊牛血清、ｍＰＢＳ＋２０％犊牛血清和Ｋｉｅｖ＋２０％犊牛血清中，在３７℃、湿度１００％条件下培养至少５个小时。５小时后逐渐加入抗冷冻剂，使其终浓度达５０％。培养５分钟后，将猪卵母细胞依次移至抗冷冻剂浓度为２５％，１２．５％和０％的培养液中，培养５分钟，而后进行台盼蓝死活染色。结果表明猪卵母细胞在各组培养后的存活率没有显著性差异（Ｐ＞０．０５），但乙二醇结果优于其它抗冷冻剂，而ＴＣＭ－１９９好于其它两类培养液。     

热应激牛初乳对新生犊牛血清免疫指标的影响研究

新生犊牛通过初乳获得被动免疫,但是关于热应激对新生犊牛被动免疫的影响程度尚不清楚。本试验旨在研究热应激牛初乳对新生犊牛被动免疫是否有显著影响,并与非热应激生产条件下进行比较。试验动物为对应于采食热应激和非热应激母牛初乳的新生犊牛各4头,在其采食母牛初乳后的不同时间内采血用于免疫指标分析。结果表明:热应激奶牛哺乳犊牛血清中各成分含量在144h内均低于非热应激奶牛哺乳犊牛血清中相对应成分,其中IgG、T3、T(472h内)变化差异显著(P<0.05),INS和IGF-Ⅰ变化差异不显著(P>0.05),热应激在一定程度上影响新生犊牛被动免疫,有关机理有待于进一步研究。     

反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响

选择促细胞生长性能良好的三批新生牛血清，经不同次数冻融后用其配制MEM培养淹，用于培养SP2／0细胞，从细胞最大增殖量和倍增时间2个指标测定促细胞生长效应。结果，用经不同次数冻融的新生牛血清配制的MEM培养液，对SP2／0细胞的最大增殖量和倍增时间影响不大；但反复冻融20次以上的新生牛血清配制的培养没使细胞的倍增时间延长。由此可见，为了防止细胞倍增时间延长，所用新生牛血清的冻融次数应该控制在20次以内。     

牛病毒性腹泻/粘膜病的免疫扩散试验程序及判定标准

1、细胞的制备和培养(1)犊牛肾原代细胞:取非疫区的犊牛肾按常规方法制备细胞,所用的培养基为0.5%水解乳蛋白和10%犊牛血清的Earle氏液,每毫升含青链霉素各100单位。犊牛血清应事先经56℃灭活30分钟,而且不含粘腆病抗体,置37℃进行培养。(2)牛鼻甲细胞:取非疫区犊牛(最好是胎牛)的鼻甲,剪成小块(约1立方毫米)。用0.25%胰酶在35℃消化10分钟,让组织块沉下后倒掉胰酶,然后加新胰酶,在35℃消化30分钟(或4℃过夜),用吸管吹打组织块,两层纱布过滤,滤出液用2,000rpm离     

浅论新生牛血清病毒检测

<正>近年来,生物制品在生产以及应用方面取得了不小的进展,与社会生活的联系也愈发紧密。由于新生牛血清中病毒来源广、种类多,因此针对新生牛血清的病毒检测十分必要。本文通过研究新生牛血清病毒检测的特点和概况,简要分析了常用的病毒检测方法,以期提高牛血清中病毒的检出率,提高我国生物制品质量以及行业水平。1新生牛血清病毒检测概况1.1新生牛血清的定义新生牛血清指的是在一段时间未进食的牛身上经过采血以及除菌过滤后制成的血清,常用于     

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞，通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力，进而对血清质量作出评价。结果表明，自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96)，并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05)，具有较好的重复性；而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。     

加减白头翁汤治疗犊牛血痢和仔猪白痢

1犊牛血痢 1994年6月，在大通县某兽医站先后接收治11例病牛，症状表现为血便、极度消瘦，主要侵害动物8—13月龄犊牛，犊牛血痢发病季节多在春末夏初。死亡率不高，但对动物生产价值影响很大。采取病畜血便，涂片和培养分别做微生物学检验，未发现致病性病原菌。食源调查，没有喂麻渣等能致血便的草料。初步诊断为“犊牛血痢”。     

犊牛注射佐剂后血清中抗体的测定

３０头５日龄犊牛腹膜腔内注射自制的油包水佐剂，１４天后，应用补体结合反应与双相琼脂扩散反应，检测犊牛血清中的抗体浓度。结果表明，试验组犊牛血清中的抗体浓度均比对照组高７．５－８个滴度，呈现免疫有效。     

猪瘟细胞苗生产中犊牛血清BVDV中和抗体检测方法的探讨

ＢＶＤＶ牛病毒性腹泻病病毒与猪瘟病毒同属黄病毒科瘟病毒属，因而ＢＶＤＶ中和抗体具有中和猪瘟病毒的作用。所以在猪瘟细胞苗的生产中如果使用了含有ＢＶＤＶ中和抗体的犊牛血清，将会严重干扰疫苗的正常生产，造成产品的报废和经济损失。为此，凡用于生产猪瘟细胞苗的犊牛血清都要事先检测有无ＢＶＤＶ中和抗体的存在。其检测方法通常用细胞中和试验。细胞中和试验又分常量法和微量法两种。常量法是先制备良好的细胞单层，然后在细胞单层上接种各血清－抗体中和物及血清毒性试验、阴性血清、阳性血清、病毒抗原等对照。经３７℃…     

健康牛血清游离氨基酸的分析

使用日立835-50型氨基酸分析仪对30头健康牛血清的游离氨基酸进行了分析。犊牛血清的游离氨基酸的总含量比成牛血清多50mg/1000ml;每种游离氨基酸的浓度也是不一样的,有的是成牛高,有的是犊牛高。因此,如果用多份成牛和犊牛血清进行组织培养,效果可能会好。     

胚胎培养液的小白鼠胚胎培养检测法

胚胎移植实践中，经常将犊牛血清加入到PBS液中配制成冲卵液和培养液．但不同来源的犊牛血清或因保存时间、条件不同其生物活性可能有所不同，因此在正式试验前，通常用小白鼠胚胎培养法进行生物学活性评估。对新采用的培养液，为观察其培养效果有时也需应用胚胎培养法进行比较。1目的利用4～8细胞阶段的小白鼠胚胎，观察在不同培养条件下小白鼠胚胎的培养效果，从而对该培养液进行评估。2小白鼠的起数排卵2．1试验动物用“昆白”系成年小白鼠，雌鼠体重22g以上，2．5月龄以上；雄鼠具有正常的繁殖配种能力。在室温下笼养，喂全价饲料。2…     

饲粮添加蛋氨酸锌或氧化锌对新生犊牛锌代谢的影响

本试验旨在研究饲粮添加蛋氨酸锌或氧化锌对新生犊牛锌代谢的影响。试验选取36头体重相近的新生荷斯坦母犊牛,随机分成3组,每组12头。对照组无添加,蛋氨酸锌组每日每头牛添加457 mg蛋氨酸锌(相当于80 mg锌),氧化锌组每日每头牛添加104 mg氧化锌(相当于80 mg锌)。试验期14 d。结果表明:1)饲粮添加氧化锌或蛋氨酸锌均可显著提高犊牛血清中锌含量(P0.05)。饲粮添加氧化锌或蛋氨酸锌对犊牛血清中钙、铜、铁、镁和磷含量无显著影响(P0.05)。2)饲粮添加氧化锌或蛋氨酸锌对犊牛血清中锌代谢相关指标均无显著影响(P0.05)。3)饲粮添加氧化锌有提高犊牛粪便中锌含量的趋势(P=0.079)。综上所述,本试验条件下,饲粮中添加蛋氨酸锌或氧化锌形式的锌对犊牛铜、铁、钙、镁、磷等微量元素代谢无负面影响,对血清中锌代谢相关指标无显著影响。蛋氨酸锌组犊牛血清中锌含量高于氧化锌组,而粪便中锌含量低于氧化锌组,说明有机锌的生物利用率高于无机锌。     

影响小鼠腔前卵泡体外发育因素的研究

通过在培养液中添加胎牛血清（FCS），牛血清白蛋白（BSA）及卵泡刺激素（FSH），对小鼠腔前卵泡进行体外培养，观察卵泡腔的形成及雌二醇（Estradiolum,E2)和睾酮（Testosteroni propioas,T)的分泌情况.