不同来源桑黄粗多糖诱导肝癌细胞HepG2 S期阻滞及凋亡的研究

通过MTT、流式细胞计数、qRT-PCR等方法,研究不同来源桑黄粗多糖对肝癌细胞HepG2的抑制作用,并探讨其作用机制。结果发现,来源于不同地区、不同寄主桑黄子实体粗多糖对肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用差异显著,其中采自四川攀枝花紫油树(SH8)、福建未知树种(SH12)上的桑黄子实体粗多糖对HepG2有一定的促增殖作用;但大多数桑黄子实体粗多糖对HepG2有抑制作用,且随多糖浓度的增加抑制作用增强。采自新疆阿克苏桑树(SH1)桑黄子实体粗多糖(800μg/mL)/至3495%±450%,S期细胞比率从2727%±173%升高至6216%±312%,G2/M期细胞比率从1419%±088%降低至289%±197%;凋亡结果显示,SH1粗多糖(800μg/mL)作用48 h后,早期凋亡细胞比率从正常组026%±009%提高至881%±048%,晚期凋亡细胞比率从正常组026%±011%提高至5175%±282%,坏死细胞比率由正常组089%±007%提高至1701%±129%;qRT-PCR结果显示,SH1粗多糖处理后细胞内周期调控相关蛋白P21、P27、P57、Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E、CDK1、CDK3和CDK4在mRNA水平表达显著上调,CDK2表达显著下调;凋亡相关基因Bcl-XS、Bad、Bax、Bid和Bcl-2的表达水平也显著升高。结果表明,桑黄粗多糖通过调控激活Cyclin A-CDK3、Cyclin E-CDK3、CyclinD-CDK4复合物促进HepG2细胞由G1期进入S期,抑制Cyclins-CDK2复合物诱导HepG2细胞S期阻滞,同时上调促凋亡蛋白基因Bcl-XS、Bad、Bax、Bid的表达,诱导细胞凋亡。     

真菌多糖激发子的筛选及对蛹虫草多糖激发条件的优化

选取7种药用真菌多糖作为激发子,以蛹虫草多糖含量为评价指标,筛选出对蛹虫草多糖产生有显著诱导作用的多糖激发子CM-JS,该激发子可使蛹虫草干菌丝中的多糖含量提高54.16%。进一步以蛹虫草多糖含量为响应值,用响应曲面分析法研究多糖激发子CM-JS的浓度、添加时间和激发时间等因素对多糖激发效果的影响,得出各因素的影响作用依次为多糖激发子浓度>添加时间>激发时间,CM-JS多糖激发子激发蛹虫草多糖产生的最优条件为:CM-JS的添加质量浓度70.328μg/mL,加入时间为菌种发酵第2天,激发时间3 d。在此优化条件下,加入CM-JS多糖激发子生产蛹虫草干菌丝中的多糖质量比可达342.5 mg/g。     

蒲公英内生真菌PG23抗癌活性的初步研究

研究药用植物蒲公英内生真菌PG23多糖对肺癌A549细胞的抑制作用。蒲公英内生真菌PG23通过培养,乙醇沉淀获得粗多糖、苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用MTT法测定PG23多糖对肺癌A549细胞的抑制率,并计算半抑制浓度(IC50)。结果表明,PG23发酵液中多糖得率为2.754%,多糖含量为26.82%;对A549肺癌细胞的抑制率以第1天为最高;抑制率不与多糖浓度成比例,最佳作用浓度为14.42μg/mL,抑制率为87.63%(P<0.01),IC50为1.073mg/mL(24h)。PG23发酵液多糖对肺癌A549细胞具有较强的抑制能力。     

蝉花虫草粗多糖对鸡新城疫抗体水平影响的研究

为了研究蝉花虫草粗多糖的免疫调节作用,试验分为新城疫弱毒苗和灭活苗免疫两部分。新城疫弱毒苗试验选择1日龄雏鸡300只,随机分为Ⅰ组(对照组)、蝉花虫草粗多糖低(Ⅱ)、中(Ⅲ)、高(Ⅳ)剂量组、Ⅴ组(黄芪组)。7~28日龄雏鸡灌服多糖或生理盐水,14,28日龄滴鼻点眼新城疫Ⅳ系弱毒疫苗,分离14,21,28,35,42,49,56日龄鸡血清并检测新城疫抗体效价。灭活苗试验选择53日龄鸡80只,分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组,在63~65日龄时灌服多糖或生理盐水,63日龄时免疫新城疫油乳剂灭活疫苗2羽份,分离70,77,84日龄鸡血清并检测新城疫抗体效价。结果表明:在新城疫弱毒苗试验中,7~14日龄雏鸡添加100 mg/kg蝉花虫草粗多糖能有效延长新城疫母源抗体的保护期,提升成活率,且与弱毒苗作用后有效保护鸡群新城疫抗体水平维持在较高水平。在灭活苗试验中,对于60日龄鸡群,添加50 mg/kg蝉花虫草粗多糖可以起到明显提高新城疫抗体水平的效果。说明添加一定剂量的蝉花虫草粗多糖能有效提升鸡新城疫疫苗的免疫效果。     

冬虫夏草菌丝粗多糖对SP2/0细胞凋亡和p53表达的影响

观察冬虫夏草菌丝粗多糖对SP2／0细胞凋亡诱导和p53基因表达的影响。在体外用粗多糖处理SP2／0细胞,MTT法检测其对肿瘤细胞增殖抑制作用,Hochest33342荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞的周期,实时荧光定量PCR检测p53基因的表达情况。结果发现,与对照组相比,冬虫夏草粗多糖可抑制SP2／0细胞增殖,诱导出现典型凋亡形态变化,电泳出现特有梯形条带,引起细胞周期阻滞,使p53基因的表达明显改变。这提示冬虫夏草粗多糖对SP2／0细胞生长的抑制,可能与诱导凋亡和声53基因表达的改变有关。     

野生与人工栽培桑黄子实体中的粗多糖和粗酚含量及药用活性比较

为了明确人工栽培桑黄(Phellinus spp.)的药用价值,以野生桑黄和人工栽培桑黄的子实体为材料,检测分析其水溶性活性物质粗多糖和粗酚的含量,以及其抗肿瘤、抗感染活性。采用乙醇浸提及甲醇萃取的方法提取栽培桑黄子实体粗酚的得率显著高于野生桑黄子实体,经超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-MS)技术分析2种桑黄子实体中的桑黄酚主要由丁香酸、原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸4种单体酚组成。采用MTT法检测2种桑黄子实体来源粗多糖、粗酚以及4种单体酚物质对体外培养HCT116、HT-29、HepG 2肿瘤细胞的增殖均有较强抑制作用,2种来源的活性成分样品在相同剂量下的抑制作用差异不显著,其中原儿茶醛抑制肿瘤细胞增殖的活性较强。用流式细胞术体外检测桑黄粗酚中的单体酚物质对结肠炎患者外周血CD4+T细胞凋亡具有诱导活性,且咖啡酸、原儿茶酸抑制细胞增殖并诱导其凋亡的活性较强。研究结果表明,人工栽培桑黄子实体有良好的药用价值,其中多糖和原儿茶醛成分是抑制结肠癌、肝癌细胞增殖的主要活性物质,丁香酸、原儿茶酸通过诱导CD4+T细胞凋亡发挥抗感染作用。     

紫茎泽兰多糖的免疫调节活性研究

紫茎泽兰是多年生草本或亚灌木。20世纪40年代由缅甸传入中国云南后,迅速在西南地区扩散,破坏了植物的群落结构、畜牧业生产和农业生产。通过研究紫茎泽兰提取物中的多糖成分,首次发现其具有免疫活性。为研究紫茎泽兰多糖(EAP)的免疫调节作用,试验用4个不同剂量的紫茎泽兰多糖50μg/m L,100μg/m L,200μg/m L和400μg/m L刺激人源(A549)细胞和鼠源(RAW264.7)细胞,分别作用12 h,24 h和36 h,用荧光定量PCR测定细胞因子白细胞介素(IL-6),肿瘤坏死因子(TNF-α),干扰素(IFN-β和IFN-γ)的表达情况,结果表明EAP浓度为200μg/m L,作用时间为36 h时这4种细胞因子的表达水平都较高。对于免疫佐剂的开发或免疫调节剂的研制具有重要作用。     

利用磁化水培养富硒蛹虫草条件优化的研究

为了优化磁化水培养富硒蛹虫草的条件,试验采用正交试验优化磁化水培养富硒蛹虫草的条件。结果表明:最佳培养条件为富硒浓度7 mg/kg、磁场强度0.1 T、磁程15次,在此条件下得到的蛹虫草子实体生物学效率为82.36%,多糖含量为34.41 mg/g,虫草酸含量为60.32 mg/g,虫草素含量为3.15 mg/g,总硒含量为8.97 mg/kg。说明利用磁化水培养富硒蛹虫草能有效提高蛹虫草的生物学效率和活性成分的含量,具有良好的应用前景。     

柞蚕蛹虫草抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡的作用

为鉴定柞蚕蛹虫草新的医用价值,将不同浓度的柞蚕蛹虫草水提物(AEoAPC)分别作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,于24、48、72 h后采用倒置相差显微镜和透射电子显微镜观察、四甲基偶唑蓝(MTT)比色及流式细胞术(FCM)检测细胞的增殖和凋亡情况。结果表明:细胞培养板中分别加入质量浓度为0.1、0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、5.0 g/L的AEoAPC,均能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈现时间剂量依赖性,1.0 g/L AEoAPC处理24、48、72 h后,对SMMC-7721细胞的生长抑制率分别为18.9%、46.4%、77.2%;经AEoAPC处理后大量癌细胞出现染色质边集和凝聚、核碎裂及凋亡小体;1.0 g/LAEoAPC处理24、48、72 h SMMC-7721细胞凋亡率分别为7.65%、11.04%、23.02%,细胞凋亡程度与AEoAPC作用时间呈正相关,有丝分裂第一间距期(G1)的细胞在AEoAPC作用72 h后分布明显增加。研究结果初步显示,AEoAPC对人肝癌SMMC-7721细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

桑黄菌丝体的液体发酵培养及多糖提取和抗氧化活性测定

为高效利用桑黄资源开发多糖类抗氧化剂,以菌丝体生物量为考核指标,对桑黄菌丝体的液体摇瓶发酵培养条件进行单因素试验,筛选出较佳的培养条件:以葡萄糖为碳源,大豆蛋白胨为氮源,发酵液p H为6,培养温度为30℃,摇瓶转速为140 r/min,接种量(体积分数)为4%。采用超声波辅助复合酶法提取桑黄多糖,复合酶由3%纤维素酶(酶活力为1.0×10~4U/g)、2%木瓜蛋白酶(1.5×10~4U/g)和1.5%果胶酶(4.0×10~4U/g)组成,通过单因素试验优化提取工艺条件为料液质量浓度20 g/L、超声波功率300 W、处理温度50℃、处理时间45 min,在此条件下多糖得率可达10.867%。采用分光光度法测定6个来源菌株培养桑黄菌丝提取粗多糖的抗氧化活性,结果显示6种桑黄粗多糖样品均表现出较强的体外抗氧化活性,其中韩国来源菌株、中国金寨来源菌株的桑黄多糖对ABTS和DPPH自由基的清除能力最强,具有进一步开发为天然抗氧化剂和自由基清除剂的潜力。     

响应面法优化五味子粗木脂素和螺旋藻粗多糖复配物的最佳复配工艺

试验以五味子叶和螺旋藻为原料,采用醇提法提取五味子叶中粗木脂素,水提方法提取螺旋藻中粗多糖,比较粗木脂素、粗多糖及(粗木脂素与粗多糖)复配物(二苯代苦味酰基)DPPH自由基清除率。结果表明,复配物DPPH自由基清除率明显高于粗木脂素和粗多糖。通过Box-Behnken响应面设计优化粗多糖和粗木脂素复配物的最佳复配工艺;按复配比(粗多糖质量∶粗木脂素质量)3∶1进行混合,加入质量分数为4000%乙醇配制质量浓度为10 mg/mL的复配溶液,调节复配pH 80,超声35 min;得到粗木脂素和粗多糖复配物DPPH自由基清除率为8643%。     

蛹虫草抗氧化肽的发酵制备及对小鼠辐射氧化损伤的防护作用

抗氧化肽是蛹虫草的重要活性成分之一。以蚕蛹虫草子实体制备的纳米蛹虫草粉为基质,利用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)E-30菌株进行液态发酵,在接种量为3%、碳氮比0.4、发酵基质质量浓度25 g/L的条件下,蛹虫草初级抗氧化肽的得率为6.4 g/L。体外试验检测该抗氧化肽在质量浓度为1 mg/m L时,对DPPH、·OH以及O-2的清除率分别为68.12%、79.40%和82.30%。辐射氧化损伤(60Co-γ照射总剂量8 Gy)模型小鼠按80 mg/(kg·d)的剂量灌胃蛹虫草抗氧化肽3 d后,小鼠血液中的白细胞、淋巴细胞含量均显著增加(P0.01);灌胃10 d后,小鼠血液中的白细胞、淋巴细胞含量趋于正常水平,超氧化物歧化酶活性上升,丙二醛含量降低。采用DEAE-52、Sephadex G-25对制备的蛹虫草抗氧化肽逐级纯化,得到的抗氧化肽单峰经质谱检测含有分子质量为2 237 D、3 372 D的2个组分,是富含芳香族氨基酸和碱性氨基酸的2个寡肽的混合物。研究结果提示,蛹虫草抗氧化肽对小鼠因辐射引起的血象变化及氧化损伤具有修复作用。     

多糖对小鼠免疫功能的影响

为了探讨黄芪多糖、酵母胞壁多糖、虫草菌丝体多糖对动物免疫功能的影响,本试验分为对照组和黄芪多糖、酵母胞壁多糖、虫草菌丝体多糖组,每组选用昆明种40只,对照组灌胃1m L生理盐水,黄芪多糖、酵母胞壁多糖、虫草菌丝体多糖组,每只小鼠分别灌胃多糖140mg/kg体重,每隔10d取一次样,分别检测增重率、免疫器官指数和Ig G。结果表明:黄芪多糖、酵母胞壁多糖和虫草菌丝体多糖均可显著提高小鼠增重率、免疫器官指数及外周血Ig G含量(P0.05),说明3种多糖均能提高小鼠免疫力。     

去甲斑蝥素抑制肺癌细胞增殖的体外研究

为分析去甲基斑蝥素二钠盐对人和小鼠肺癌细胞增殖的抑制作用,体外培养人非小细胞肺癌A549细胞和小鼠肺癌Lewis细胞,用WST-1还原法检测不同浓度去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对肿瘤细胞增殖的抑制作用,并用流式细胞术分析细胞周期;免疫印迹技术分析MAPK激酶表达。NCTD抑制A549和Lewis增殖的IC50值分别为13.5和9.5μmol/L;0、6.25、12.50和25.00μmol/L NCTD处理24h,诱导A549细胞G2/M期阻滞率分别为26.30%、29.44%、49.83%和81.35%。结果表明,抑制肿瘤细胞增殖可能是去甲基斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制之一。     

南五味子粗多糖清除自由基活性研究

目的：研究南五味子粗多糖清除自由基能力。方法：采用热水浸提法从南五味子中提取粗多糖。用Vc作对比,采用化学比色法测定南五味子粗多糖在体外抑制DPPH自由基的能力;清除羟自由基（·OH）的能力;清除超氧自由基的能力（O2-·）。结果：在这三种自由基体系中,南五味子粗多糖均有清除能力,但结果因自由基体系的不同而能力不同,其IC50值分别为0．43mg／mL（DPPH·）、3．28mg／mL（·OH）以及14．81mg／m（O2-·）。结论：南五味子粗多糖具有较好的清除自由基性能。     

家蚕蛹虫草多糖的提取及纯化工艺研究

蚕蛹虫草[Cordceps militaris(L.)Link]又称北冬虫夏草,是一种潜在的中药和具有滋补作用保健营养品.其有效活性成分虫草多糖(CMPS)被认为是非特异性免疫调节剂,可激活肌体的免疫活性细胞,虫草多糖的纯化为其功能、性质的研究提供材料,为虫草多糖的规模提取提供依据及产品的深度开发(例虫草多糖注射针剂)开辟了新路.     

地菍粗多糖对高脂饮食诱导肥胖小鼠脂代谢的影响

[目的] 研究地菍粗多糖对高脂饮食诱导肥胖小鼠脂代谢的影响。[方法] 将小鼠随机分为6组：空白组、模型组、阳性组（0.025 mg/g奥利司他）及高、中、低剂量地菍粗多糖（1.2、0.6和0.3 mg/g）处理组,每组12只。空白组小鼠喂食普通维持饲料,其余各组小鼠喂食高脂饲料,空白组、模型组给予生理盐水,阳性组给予0.025 mg/g奥利司他,高、中、低剂量地菍粗多糖组分别给予1.2、0.6和0.3 mg/g地菍粗多糖,每天灌胃1次,连续给药30 d。给药结束,称量小鼠体重、附睾及肾脏周围脂肪和肝脏组织的重量;HE染色法观察脂肪和肝脏病理变化;生化法检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）含量及肝脏TC、TG含量;实时荧光定量PCR法测定肝脏中乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）基因相对表达量。[结果] 与模型组相比,高、中剂量地菍粗多糖组小鼠体重、Lee's指数、摄食量、肝脏及附睾和肾脏周围脂肪的重量均显著降低（P<0.05）,低剂量地菍粗多糖组小鼠体重、脂肪重量均无显著变化（P>0.05）,阳性组小鼠摄食量、肝脏重量均无显著变化（P>0.05）;阳性组、高剂量地菍粗多糖组小鼠的脂肪指数均显著降低（P<0.05）;阳性组、高剂量地菍粗多糖组小鼠血清TC、TG、LDL-C及肝脏TC、TG含量均显著降低（P<0.05）,血清HDL-C含量差异不显著（P>0.05）;中剂量地菍粗多糖组小鼠血清TC、TG及肝脏TC含量均显著降低（P<0.05）。阳性组及高、中、低剂量地菍粗多糖组小鼠脂肪细胞均不同程度变小,肝细胞内脂滴小空泡明显减少,且ACC1基因的相对表达量均显著下调（P<0.05）,分别降低了20%、42%、15%和11%。[结论] 地菍粗多糖可通过调节高脂饮食诱导肥胖小鼠的脂代谢水平,从而干预肥胖的发生。     

赤灵芝多糖对鸡淋巴细胞增殖的影响

为探讨赤灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLP)对体外培养鸡外周血淋巴细胞、脾脏淋巴细胞增殖的影响,将不同浓度的GLP单独或协同伴刀豆素球蛋白(Con A)刺激仔鸡外周血淋巴细胞、脾脏淋巴细胞,采用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。结果表明,单独刺激外周血淋巴细胞时,GLP在0.070~2.25 mg/m L的剂量范围内,其吸光度值均显著大于细胞对照组(P0.05),协同Con A刺激外周血淋巴细胞时,GLP+Con A组在0.141~2.25 mg/m L吸光度值显著大于Con A对照组(P0.05)。单独刺激脾脏淋巴细胞时,GLP在0.035~2.25 mg/m L浓度时的吸光度值显著大于细胞对照组(P0.05),协同Con A刺激脾脏淋巴细胞时,GLP+Con A组在0.035~2.25 mg/m L吸光度值显著大于Con A对照组(P0.05)。提示,GLP在体外不仅能单独刺激鸡淋巴细胞增殖,与Con A具有协同刺激作用,且在一定范围内呈现明显的量效关系。     

紫花苜蓿粗多糖对蛋鸡生产性能、蛋品质及盲肠微生物数量的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平紫花苜蓿粗多糖对蛋鸡生产性能、蛋品质及盲肠微生物数量的影响。选取540只30周龄的海兰褐壳蛋鸡,随机分为6组,每组6个重复,每个重复15只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加250、500、1 000、2 000、4 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖。试验期144 d。结果表明:1)试验第1~8周,2 000、4 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组产蛋率显著高于对照组和250 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组(P0.05);试验第17~20周,2 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组平均日采食量显著高于对照组和250 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组(P0.05),同时250 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组料蛋比显著低于对照组和500 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组(P0.05)。2)与对照组相比,试验第144天,各紫花苜蓿粗多糖组蛋黄颜色均显著加深(P0.05);试验第90天,4 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组哈夫单位显著降低(P0.05);试验第60天,2 000、4 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组蛋形指数显著降低(P0.05),试验第120天,1 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组蛋形指数亦显著降低(P0.05);试验第61~90天,250、1 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组软破壳蛋率显著降低(P0.05)。3)与对照组相比,试验第80天,500、2 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组盲肠大肠杆菌数量显著降低(P0.05),盲肠乳酸杆菌数量显著增加(P0.05),同时4 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组盲肠乳酸杆菌数量也显著增加(P0.05);试验第144天,1 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组盲肠沙门氏菌数量显著降低(P0.05);试验第40、80、120、144天,500、1 000 mg/kg紫花苜蓿粗多糖组盲肠双歧杆菌数量均有所升高,但差异不显著(P0.05)。由此可见,饲粮中添加适宜水平的紫花苜蓿粗多糖可以显著提高产蛋期蛋鸡生产性能,改善蛋品质,优化盲肠菌群结构,且500 mg/kg为适宜添加水平。     

蛹虫草的蚕蛹活体培养和蚕蛹粉培养基培养技术及主要成分的比较分析

对采用蚕蛹活体注射接种和在小麦+大米+蚕蛹粉混合培养基(以下简称混合培养基)表面喷洒接种蛹虫草菌2种方法培养得到的蚕蛹虫草的主要成分进行了比较分析,结果表明:蚕蛹活体注射接种培养得到的蚕蛹虫草,腺苷含量为184 mg/kg,比混合培养基表面喷洒接种培养得到的蚕蛹虫草的腺苷含量(102 mg/kg)高80.39%;氨基酸总量(215 800 mg/kg)比混合培养基表面喷洒接种培养得到的蚕蛹虫草(165 600 mg/kg)高30.31%,必需氨基酸含量(94 200 mg/kg)比混合培养基表面喷洒接种培养得到的蚕蛹虫草(63 900 mg/kg)高47.42%;未检测出铅的含量(低于0.005 mg/kg),汞的含量(0.012 mg/kg)也低于混合培养基表面喷洒接种培养得到的蚕蛹虫草的含量(0.015 mg/kg),铅、汞的含量远低于食品安全国家标准GB 2762—2012《食品中污染物限量》的限量要求。