吡啶甲酸铬对热应激肉鸡淋巴细胞钙离子浓度及免疫功能的影响

旨在研究吡啶甲酸铬(CrPic)对热应激条件下肉鸡淋巴细胞钙离子浓度及免疫功能指标的影响.本研究选择1日龄AA肉公鸡300只,随机分为5个组(Ⅰ～Ⅴ),每组5个重复,每个重复12只鸡.在15日龄时,试验Ⅰ～Ⅳ组肉鸡分别饲喂含0、400、800、1 200 μg· kg1 Cr的日粮2周后,再进行日循环高温(27℃-35℃-27℃)处理2周,试验Ⅴ组肉鸡则维持恒温22℃作为适温对照组.结果显示,日粮补铬(800～1 200 μg· kg-1)可显著降低热应激肉鸡血浆中的胰岛素水平,抑制淋巴细胞内钙离子浓度和IL-2浓度升高,提高淋巴细胞转化率.表明高温条件下,日粮添加CrPic可缓解热应激对肉鸡细胞免疫功能造成的负面影响.     

日循环高温对蛋鸡抗氧化能力及免疫机能的影响

本试验旨在模拟夏季规模化蛋鸡舍内温度变化,研究不同日循环高温对蛋鸡抗氧化能力及机体免疫机能的影响,以期引起生产及研究人员对夏季高温的重视。选取28周龄海兰褐蛋鸡288只,随机分为适温组(21℃,自由采食)、低循环温度组(27~30℃,自由采食)、高循环温度组(29~35℃,自由采食)及采食配对组(21℃,饲喂量同高循环温度组)4个处理组,每个处理6个重复,每个重复12只鸡,分别饲养于4个人工环境控制舱内,试验持续4周。从试验第25天开始,使用微型温度记录仪测定连续3天蛋鸡的体核温度。试验第29天,每重复随机选取1只鸡翅静脉采血,而后屠宰,分离脾和肝,计算脾脏指数,测定蛋鸡血清和肝中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)及血清中免疫球蛋白A(IgA)、G(IgG)、M(IgM)、溶菌酶。结果表明,与适温组相比,低循环温度组蛋鸡体核温度(TC)无显著差异,除血清T-AOC降低外,肝和血清中MDA含量及抗氧化酶活性均无显著差异,血清IgA、IgM含量显著降低(P0.05);而高循环温度组蛋鸡TC显著升高(P0.05),血清和肝中MDA含量显著升高(P0.05),T-AOC显著下降(P0.05),血清GSH-Px活性有降低趋势(0.05P0.1),血清IgA、IgM含量以及脾脏指数显著降低(P0.05);与采食配对组相比,高循环温度组蛋鸡TC显著升高(P0.05),血清和肝中MDA含量同样显著升高(P0.05),T-AOC显著下降(P0.05),血清GSH-Px活性显著降低(P0.05),血清中仅IgA含量显著降低(P0.05),IgM、IgG含量以及脾脏指数无显著差异。结果表明,夏季蛋鸡舍温度在27~30℃波动时,蛋鸡血液和肝中抗氧化能力变化不明显,但血液中IgA和IgM含量显著降低;在29~35℃波动时,蛋鸡的体核温度显著升高,血液和肝中抗氧化能力显著降低,脾脏指数及血液中IgA和IgM含量显著降低。高温对蛋鸡抗氧化能力的影响可能与升高体温有关,对免疫机能的影响可能与降低采食量有关。     

呕吐毒素体外对鸡脾脏淋巴细胞的毒性作用

本试验研究不同浓度DON对鸡脾脏淋巴细胞的毒性作用。将体外培养的鸡脾脏淋巴细胞分为6个组,第1组为空白对照组,第2~6组为DON毒素组,培养液DON终浓度分别为2、4、8、16、32μg/m L。检测脾脏淋巴细胞转化率、培养基质中细胞因子和LDH水平、脾脏淋巴细胞的凋亡率和坏死率。结果表明:鸡脾脏淋巴细胞转化率随着DON浓度的增加逐渐降低;细胞因子IL-2、4、6水平DON组显著低于对照组(P0.05),IL-12、INF-γ水平高浓度DON组显著低于对照组(P0.05),其他各组差异不显著(P0.05);LDH水平高浓度DON组显著高于其他各组(P0.05);流式结果显示,DON可以诱导脾脏淋巴细胞凋亡和坏死。试验结果表明,DON对鸡脾脏淋巴细胞具有毒性,可能通过诱导淋巴细胞凋亡和坏死而降低机体的免疫力。     

中药复方对热应激下肉鸡免疫功能的影响

将100只1日龄艾维茵肉仔鸡随机分成2组,即正常对照组、试验组(中药组),分别测定法氏囊指数、法氏囊细胞凋亡率以及外周血CD4 、CD8 T淋巴细胞转化率、法氏囊细胞周期时相、Bcl-2和Caspase-3基因的蛋白表达水平.结果表明:试验组的法氏囊指数14日龄、21日龄显著升高;试验组14、21日龄法氏囊细胞凋亡率明显降低,差异显著(P＜0.05);细胞周期时相发生变化,G1期细胞百分比数量明显减少,G2期细胞百分比数量明显增加,差异均显著(p＜0.05);外周血液中T淋巴细胞转化率明显提高,差异显著(P＜0.05);由此看来,中药能促进法氏囊相对重量的增加,T淋巴细胞的转化向CD4 偏移,使细胞免疫功能增强.     

胸腺素α_1对鸡脾脏淋巴细胞增殖转化及IL-2基因表达与分泌的影响

为进一步阐明胸腺素α1(Tα1)的作用机制,采用MTT比色法、RT-PCR相对半定量法和RIA法研究了不同浓度的Tα1对离体培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖转化、IL-2基因表达及其分泌的影响。结果表明,10μg/mL和1μg/mL Tα1处理鸡脾脏淋巴细胞能显著提高由ConA诱导的淋巴细胞增殖转化率(P<0.05),显著提高鸡脾脏淋巴细胞IL-2基因表达水平以及细胞培养上清液中的IL-2含量(P<0.05),且以10μg/mL浓度的效果最佳。0.1μg/mL的Tα1对脾脏淋巴细胞增殖转化和IL-2基因表达与分泌无显著作用(P>0.05)。提示,Tα1对鸡免疫功能的调节同其剂量有关,并可能在基因转录水平上调节IL-2的分泌。     

中草药制剂对鸡免疫器官发育及脾脏中免疫因子表达的动态影响

试验旨在探究复方中草药制剂对黄羽肉鸡育雏期间免疫器官指数及脾脏中IL-2、IL-4、IFN-γ因子表达的动态影响。选取1日龄健康黄羽肉鸡450只,随机分成3个处理组(对照组、抗生素组和中草药组),每个处理5个重复,每个重复30只。分别在21、35、49日龄测定鸡免疫器官指数和脾脏细胞中IL-4、IL-2、IFN-γ的动态表达量。结果显示:中草药组的免疫器官指数显著高于对照组(P<0.05),血清中免疫球蛋白IgG含量与对照组相比显著增加(P<0.05);中草药制剂组黄羽肉鸡脾脏中的IL-4 mRNA表达量在35日龄显著高于对照组和抗生素组(P<0.05),IL-2和IFN-γmRNA表达量在试验期呈增加趋势,其表达量在49日龄时中草药组显著高于对照组和抗生素组(P<0.05),说明复方中草药有提高免疫细胞因子mRNA表达量的作用。试验结果表明,基础日粮中添加复方中草药对黄羽肉鸡免疫器官发育和细胞免疫水平有不同程度的促进作用。     

葡萄籽原花青素对高精料育肥羔羊免疫功能的影响

本试验旨在研究葡萄籽原花青素(GSPs)对高精料育肥羔羊免疫功能的影响。试验选取48只4月龄、体重[(22.75±1.20)kg]相近的杜寒杂交一代公羔羊,随机分为4组,每组12只羊。各组分别在基础饲粮中添加0(对照组)、10(10GSPs组)、20(20GSPs组)、40 mg/(kg BW·d)(40GSPs组)的GSPs。预试期15 d,正试期45 d。结果表明:1)正试期第30天,20GSPs和40GSPs组外周血中CD4^+T细胞比例显著高于对照组(P<0.05),CD8^+T细胞比例显著低于对照组(P<0.05)。正试期第45天,20GSPs和40GSPs组外周血中CD8^+T细胞比例显著低于对照组(P<0.05),CD4^+T细胞比例及CD4^+/CD8^+比值显著高于对照组(P<0.05)。2)随着GSPs添加水平的增加,外周血淋巴细胞转化率线性升高(P<0.05),淋巴细胞凋亡率线性降低(P<0.05)。20GSPs和40GSPs组的外周血淋巴细胞转化率显著高于对照组(P<0.05),淋巴细胞凋亡率显著低于对照组(P<0.05)。3)随着GSPs添加水平的增加,血清白细胞介素-2(IL-2)含量有线性升高的趋势(P=0.057),血清白细胞介素-6(IL-6)含量有线性降低的趋势(P=0.074),但各组间血清IL-2、IL-6含量差异不显著(P>0.05)。20GSPs和40GSPs组血清白细胞介素-4(IL-4)含量显著高于对照组(P<0.05)。随着GSPs添加水平的增加,血清免疫球蛋白G(IgG)含量线性增加(P<0.05);20GSPs组血清IgG含量显著高于10GSPs和对照组(P<0.05)。由此可见,高精料饲粮条件下添加适量的GSPs可以改善羔羊的免疫功能,本试验条件下GSPs的适宜添加水平为20 mg/(kg BW·d)。     

日粮不同锌源及锌水平对肉鸡免疫调节作用的研究

本研究旨在比较肉仔鸡在正常生理及脂多糖(LPS)攻毒条件下,在日粮中添加不同剂量和不同来源的化合物锌对肉仔鸡免疫的调节作用。试验一选用420只1日龄AA肉仔鸡公雏,随机分为对照组、3个硫酸锌处理组和3个甘氨酸锌处理组,共7个处理,每组6个重复,锌元素水平均为30、60、90 mg/kg,试验期42 d。结果表明:与对照组相比,30 mg/kg硫酸锌组和30 mg/kg甘氨酸锌组肉鸡的胸腺指数显著提高;相对硫酸锌,甘氨酸锌提高了外周血T、B淋巴细胞转化率(P<0.05),其中60 mg/kg甘氨酸锌组的转化率最高。试验二随机选用336只1日龄AA肉仔鸡公雏,分为完全空白对照组、生理盐水对照组、攻毒对照组、2个硫酸锌+LPS攻毒组和2个甘氨酸锌+LPS攻毒组共7个处理,每组6个重复,锌元素水平均为30、90 mg/kg,试验期42 d。结果表明:日粮中添加30 mg/kg甘酸锌可缓解LPS刺激8 h后胸腺指数的下降(P<0.05);最后一次LPS刺激8 h后,甘氨酸锌组脾脏和空肠IL-8基因表达均低于硫酸锌组(P<0.05),90 mg/kg锌添加组空肠IL-1β和IL-8的表达量均低于30 mg/kg锌添加组(P<0.05)。综上,甘氨酸锌调节肉鸡免疫和缓解炎症反应的功效高于硫酸锌。     

乳酸菌培养物对肉鸡生长性能及免疫功能的影响

试验旨在研究灭活乳酸菌培养物对肉鸡生长性能及免疫功能的影响。选择300只体重相近的健康1日龄AA肉仔鸡,随机分为5组,每组6个重复,每个重复10只鸡,雌、雄各半。其中对照组饲喂基础日粮,抗生素组在基础日粮中添加0.01%金霉素,乳酸菌培养物组分别在基础日粮中添加0.16%乳酸菌培养物L1、L2、L3。试验期42 d,分1~21日龄(前期)和22~42日龄(后期)2个阶段。结果显示,1~21日龄时,乳酸菌培养物L1组肉鸡平均日采食量极显著高于对照组和抗生素组(P<0.01),血清中白介素-2(IL-2)含量显著低于对照组(P<0.05),脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数均显著高于对照组(P<0.05);乳酸菌培养物L2组肉鸡脾脏指数、胸腺指数显著高于对照组(P<0.05);乳酸菌培养物L3组肉鸡平均日增重极显著高于对照组和抗生素组(P<0.01);抗生素组肉鸡血清中γ-干扰素(IFN-γ)含量显著高于乳酸菌培养物组(P<0.05)。22~42日龄时,乳酸菌培养物L1、L2组肉鸡平均日增重极显著高于对照组和抗生素组(P<0.01);乳酸菌培养物L2组肉鸡血清中免疫球蛋白G(IgG)含量显著高于抗生素组(P<0.05),血清新城疫抗体效价及脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数均显著高于对照组(P<0.05);乳酸菌培养物L3组肉鸡血清中免疫球蛋白A(IgA)含量及胸腺指数显著高于对照组(P<0.05)。由此可知,在肉鸡日粮中添加一定量的灭活乳酸菌培养物可在一定程度上提高肉鸡的生长性能、增强其免疫功能,其中,对于提高肉鸡的生长性能,试验前期添加L3效果较好,试验后期添加L1和L2效果较好;对于增强肉鸡的免疫功能,试验前期添加L1效果较好,试验后期添加L2效果较好。     

不同剂量血浆蛋白粉对肉鸡生产性能和免疫功能的影响

本试验选用300只1日龄AA肉鸡,随机分为5个处理,每个处理6个重复,每个重复10只鸡。试验前期(1～21d)5个处理分别饲喂基础日粮、基础日粮+50mg/kg金霉素和含有0.5%、2.5%、5.0%血浆蛋白粉(SDPP)日粮,试验后期(22～49d)各处理组均饲喂基础日粮。结果表明,添加0.5%SDPP极显著提高前期平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)(P<0.01);SDPP显著提高后期和全期ADG和ADFI,但后期和全期各处理间F/G差异不显著(P>0.05);0.5%SDPP组肉鸡全期的生产成绩高于2.5%和5.0%SDPP组(P>0.05)。血浆蛋白粉可提高Ea、Et、脾脏指数和胸腺指数(P>0.05);2.5%、5.0%SDPP组淋巴细胞转化率极显著高于对照组(P<0.01),0.5%SDPP组淋巴细胞转化率显著高于对照组(P<0.05);2.5%SDPP组的法氏囊指数显著高于对照组(P<0.05)。     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株毒力分析

本研究对367份猪内脏样本进行PCV2检测,对阳性样本进行2a/2b鉴别诊断,并采用ORF2测序方法对部分阳性样本进行测序。在发病猪群中PCV2b阳性率远高于健康猪群,而健康猪群中PCV2a的阳性率高于发病猪群,从而在临床表型方面论证了PCV2b毒力强于PCV2a。通过比较12株PCV2 ORF2推导氨基酸序列的关键氨基酸位点,9株PCV2b毒株在ORF2氨基酸76位为I,131位为T;而3株PCV2a毒株在ORF2氨基酸76位为L,131位为P,据比对结果可知,PCV2b毒株为强毒株,PCV2a毒株为弱毒株。研究结果表明,PCV2的2种亚型2a/2b无论是临床表型还是ORF2基因型,毒力表现都是有差异的,且PCV2b毒力要强于PCV2a。     

过氧化氢对成肌细胞的氧化损伤作用研究

旨在以体外培养的小鼠成肌细胞(C2C12)为研究对象,探讨氧化损伤可能的路径。本试验分为3个处理组,每个处理组6个重复。处理组分别为:对照组(Control),以DMEM培养基培养的细胞作为空白对照,培养24 h;吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组(PDTC),以每个孔1 mL的PDTC(20μmol·L^-1)孵育细胞24 h;H_2O_2组(H_2O_2),加入0.5 mmol·L^-1的H_2O_2处理细胞24 h。检测各组细胞的存活率、ROS水平与凋亡率,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印记法检测细胞凋亡和自噬相关基因的表达以及NF-κB信号通路相关因子的表达。结果表明,与对照组相比,PDTC可显著提高细胞的总凋亡率(P<0.05),可显著上调细胞半胱天冬蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-6、caspase-9的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平(P<0.05),显著上调Beclin 1的mRNA表达量和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II/I的值以及LC3-II蛋白表达水平(P<0.05),显著下调核因子kappa B副族1(p50)、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白(Bcl-2)、v-rel禽网状内皮增生病病毒癌基因同源物A(RelA)和环氧合酶(Cox)-2的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平(P<0.05);H_2O_2可显著提高细胞的ROS水平和细胞总凋亡率(P<0.05),可显著上调caspase-3、caspase-6、caspase-8、caspase-9的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平(P<0.05),显著上调Beclin 1和LC3-II/LC3-I的mRNA表达量以及LC3-II蛋白表达水平(P<0.05),显著提高Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达量(P<0.05),显著下调p50、Bcl-2、RelA和Cox-1、Cox-2的mRNA表达量以及核因子kappa B(NF-κB)蛋白表达水平(P<0.05)。结果提示,H_2O_2会引起C2C12细胞的ROS升高,并且能够通过抑制NF-κB信号通路介导细胞凋亡和自噬的发生,这与NF-κB因子的特异性抑制剂PDTC的作用相类似。     

猪IL2基因重组对PPV VP2-PCV2ORF2真核质粒免疫原性增强的研究

将猪IL2成熟肽基因、PPV VP2基因和PCV2 ORF2抗原多肤基因定向克隆至真核表达载体pCI-neo,构建重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2-ORV2-VP2,用脂质体介导法将其转染PK15细胞,采用RT-PCR法和间接免疫荧光法检测重组质粒在体外的表达情况.并以小鼠为动物模型,分别将pCI-IL2-ORF2-VP2质粒、pCI-ORF2-VP2质粒、pCI空载体、猪细小灭活苗和圆环亚单位苗通过肌注进行免疫,检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞转化功能,外周血T淋巴细胞亚群的动态变化及血清抗体效价.结果表明,重组质粒在体外能正常表达,pCI-IL2-ORF2-VP2免疫小鼠脾脏淋巴细胞转化功能,CD4+、CD8+T淋巴细胞的数量和血清PPV/PCV2抗体的OD值在二免后均高于或显著高于pCi-ORF2-VP2对照组.结果表明,猪IL2基因重组能显著增强VP2/ORF2核酸疫苗诱导的免疫应答.     

H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响

研究了H2O2与Fe2+等金属离子产生的自由基胁迫对桑树生理特性的影响,旨在为桑树的抗逆栽培提供理论参考。以桑树叶片为材料,研究H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响。结果表明:经H2O2-Fe2+、H2O2-Cu2+和H2O2-Zn2+3种体系溶液处理的桑.OH含量分别提高34.38%、8.14%和5.43%;O2.-含量分别降低78.77%、54.75%和63.84%;1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)清除率分别降低44.60%、57.34%和54.64%;超氧化物歧化酶(SOD)活性分别提高44.45%、36.02%和28.28%;多酚氧化酶(PPO)活性分别降低68.18%、86.58%和54.78%;过氧化氢酶(CAT)活性分别降低97.46%、96.57%和68.02%;过氧化物酶(POD)活性分别降低22.22%、提高7.42倍和66.67%。H2O2与Fe2+等的协同作用破坏了桑细胞内自由基动态平衡,导致自由基含量提高,保护酶活性受到显著影响。     

不同浓度Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+对紫花苜蓿生长的影响

以紫花苜蓿金皇后为材料,采用温室盆栽的方法对其在不同浓度Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+下的生长及结瘤情况进行探讨,结果表明:不同浓度不同离子对紫花苜蓿地上生物量及结瘤情况影响各有不同,其中Ca2+浓度为90mg/L时植株结瘤数目最丰,促进植株结瘤的作用最为明显;Mg2+浓度80mg/L时植株根冠比最大,为41.56％;Fe2+对植株结瘤数与蛋白质含量的影响作用最不明显,浓度为15mg/L时植株地上生物量干重为0.41g/株,增产作用优于Ca2+和Mg2+;Zn2+浓度为2.0mg/L时地上生物量干重(0.56g/株)和粗蛋白质含量(18.78％)均最高,对植株产量增加与蛋白质含量累积作用最为显著.     

Detection of porcine Circovirus type 2 (PCV2) variants PCV2-1 and PCV2-2 in Brazilian pig population

In the present study whole genome of six Brazilian isolates of PCV2 were sequenced, analyzed and compared with 35 other sequences (24 from other countries and 17 from Brazil). The phylogenetic analysis showed that mostly Brazilian variants of PCV2 were grouped as PCV2-1. Two isolates among the six analyzed here could not be grouped with any other PCV2-2 analyzed in this study. One of these isolates was from an aborted fetus with myocarditis and the other from a PMWS affected pig. The results pointed here showed that both groups of PCV2 are present in Brazilian pig population without any clear geographical correlation.     

猪圆环病毒2型抗体检测间接ELISA方法的建立

用纯化的重组猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化(如抗原的包被、血清及酶标二抗作用时间、底物的选择等),建立了检测猪圆环病毒2型(PCV2)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法。结果显示,重组抗原最适包被浓度为0.5mg/L,最适包被条件为4℃过夜,血清稀释度1∶160,酶标二抗工作浓度1∶7500,待检测血清和酶标二抗的反应时间均为37℃,45min,底物37℃显色10min。阻断试验表明,建立的间接ELSA对PCV2抗体具有很好的特异性。板内和板间重复试验显示,同1份血清板内各孔的变异系数均值为2.78%,板间同一份血清D值变化不大,表明重复性好。     

Effect of porcine circovirus type 2 (PCV2) vaccination on PCV2-viremic piglets after experimental PCV2 challenge

The objective of this study was to evaluate the effect of porcine circovirus type 2 (PCV2) vaccines on PCV2-viremic and -seropositive piglets born from naturally PCV2-infected sows against postnatal PCV2 challenge. The experimental design was aimed at mimicking commercial swine rearing conditions to evaluate the response of the PCV2 vaccine on PCV2-viremic and -seropositive piglets after experimental PCV2 challenge. PCV2a (or 2b)-viremic piglets received a PCV2 vaccine at 21 days of age followed by a PCV2b (or 2a) challenge at 49 days of age (28 days post vaccination). The PCV2 vaccines elicited a high level of humoral (as measured by immunoperoxidase monolayer assay and neutralizing antibody titers) and cellular (as measured by the frequency of PCV2-specific interferon-γ-secreting cells) immune response in the PCV2-viremic piglets after vaccination even in the presence of maternally derived antibodies (MDA). The initial infection of PCV2 in the pigs was not affected by PCV2 vaccination, however the challenging PCV2 was reduced by PCV2 vaccination on PCV2-viremic pigs. The results from this study demonstrate that the PCV2 vaccine used in this study is effective at reducing PCV2 viremia and lymphoid PCV2 DNA, even for PCV2-viremic pigs with passively acquired MDA at the time of vaccination.