川续断基因组DNA的提取研究

川续断叶片中很有较多的蛋白质、多糖、酚类以及其他一些次生代谢物,采用传统的CTAB法很难得到高质量的DNA。试验以川续断叶片为材料,提出一种改良的CTAB法提取叶片基因组DNA,对提取的基因组DNA进行琼脂糖电泳检测及紫外分光光度计分析。利用中药材条形码ITS2序列的引物对提取的基因组DNA进行PCR验证。结果表明,改良的CTAB法得到的DNA质量较好,其OD260/OD280的值介于1.8~2.0之间,ITS2序列的引物PCR扩增成功率达到100%。改良的CTAB法为较为理想的川续断基因组DNA提取方法,获得的总DNA能够满足下游的PCR试验要求。     

光皮桦基因组DNA提取方法比较

为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera嫩叶中获得高质量DNA,设计了5种先提核再提DNA的CTAB法Ⅰ,CTAB法Ⅱ,CTAB法Ⅲ,CTAB法Ⅳ及改进的SDS法,并以常规CTAB法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA进行了提取,采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/A280值测定、限制性内切酶处理和PCR扩增等方法对所提的DNA进行了比较分析。结果表明:实验设计的5种改进方法提取的DNA质量要比常规法的好,但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA的最佳方法;PCR扩增结果表明,不同的DNA提取方法会影响PCR带型的变化。图3表1参13     

小麦条锈菌DNA提取方法的比较研究

以小麦条锈菌夏孢子为实验材料,分析比较了CTAB法、SDS法、尿素法和CTAB/SDS法4种方法对小麦条锈菌基因组DNA的提取效果。结果表明,利用4种方法提取的小麦条锈菌夏孢子DNA的纯度和得率存在一定差异,单位重量夏孢子分离的DNA量依次为:CTAB法>尿素法>CTAB/SDS法>SDS法,而所获得的DNA纯度依次为:CTAB/SDS法>CTAB法>SDS法>尿素法。以不同分离方法获得的小麦条锈菌DNA为模版,利用特异性微卫星引物RJ17进行PCR扩增和电泳分析,4种方法均能满足SSR反应,但CTAB法更适于SSR反应。     

光皮桦基因组DNA 提取方法比较

为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera 嫩叶中获得高质量DNA , 设计了5 种先提核再提DNA 的CTAB 法Ⅰ , CTAB 法Ⅱ , CTAB 法Ⅲ , CTAB 法Ⅳ及改进的SDS 法, 并以常规CTAB 法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA 进行了提取, 采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/ A280值测定、限制性内切酶处理和PCR 扩增等方法对所提的DNA 进行了比较分析。结果表明:实验设计的5 种改进方法提取的DNA 质量要比常规法的好, 但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB 法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA 的最佳方法;PCR 扩增结果表明, 不同的DNA 提取方法会影响PCR 带型的变化。图3 表1 参13     

羊肺炎支原体基因组DNA几种提取方法的比较

为了筛选支原体基因组DNA最优提取方法以便用于支原体的检测和分子鉴定,本试验采用两种试剂盒、CTAB法、高盐法、酚/氯仿/异戊醇法和煮菌法对3批两种支原体液体培养物进行总DNA提取,通过检测基因组DNA纯度和PCR产物比较其提取效果。结果显示:6种方法提取的支原体基因组DNA均能用于PCR。进口试剂盒和CTAB法获得的DNA纯度最高,酚/氯仿/异戊醇法、高盐法和国产试剂盒次之,煮菌法省时但质量较差,酚/氯仿/异戊醇法较慢。CTAB法和高盐法可快速获得优质的基因组DNA,可作为提取支原体基因组DNA的首选方法。     

三种天然橡胶树DNA提取方法的比较研究

为获得能适用于普通PCR反应的橡胶基因组DNA,以橡胶树叶片为材料,分别采取CTAB法、SDS法及盐析法提取基因组DNA。并通过琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶酶切对3种方法提取的DNA样品进行检测。将它们在DNA产量、质量等方面进行比较,结果表明CTAB法DNA提取率高于SDS法和盐析法;由CTAB法提取的橡胶树基因组DNA能完全酶切,能满足PCR等后续分子生物学研究的需要。     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

羊角槭基因组DNA提取及SRAP-PCR体系优化

采用CTAB法、SDS法、偏重亚硫酸钠法提取槭属中羊角槭基因组DNA,通过DNA含量测定、琼脂糖凝胶电泳检测对所提DNA质量进行分析.结果表明, 3种提取方法中CTAB法最适合提取羊角槭基因组DNA,所得DNA的质量和纯度较高.以CTAB法提取的DNA为模板进行SRAP扩增反应,对SRAP反应体系的dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物浓度3个主要影响因子进行筛选.获得羊角槭SRAP最优反应体系为:50 μl的PCR体系中含有DNA模板100 ng、10×PCR Buffer (不含Mg2+)、Mg2+ 2.5 mmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、引物0.5 μmol/L、Taq DNA聚合酶 1.0 U.     

北冬虫夏草DNA提取方法的比较

运用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、氯化苄法、裂解法、改良SDS法、改良尿素法等7种方法提取北冬虫夏草基因组DNA,发现CTAB改良法2(提纯时加入低浓度乙醇)提取的DNA的OD260/OD280都在1.9以上,能获得清晰的PCR扩增图谱,能被HindⅢ酶切消化.     

北冬虫夏草DNA提取方法的比较

运用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、氯化苄法、裂解法、改良SDS法、改良尿素法等7种方法提取北冬虫夏草基因组DNA,发现CTAB改良法2(提纯时加入低浓度乙醇)提取的DNA的OD260/OD280都在1.9以上,能获得清晰的PCR扩增图谱,能被HindⅢ酶切消化.     

A Method Suitable for Extracting Genomic DNA from Animal and Plant——Modified CTAB Method

[Objective] The study aimed to introduea a rapid and effective method that is suitable for extracting genomic DNA from animal and plant. [Method] The genomic DNAs were extracted from tender leaves of 24 peanut cuhivars and from the liver, lung and kidney of white mouse through the spe-cifically modified CTAB method. The DNAs were run on agarose gel, next detected by DNA/Protein analyzer. Finally PCR amplification was conducted to detect the quality of DNAs extracted using the modified CTAB method. [Result] The clear and orderly bands were observed in gel detection, and the val-ues of OD260/OD280 for DNAs extracted via modified CTAB method were between 1.77 - I. 83. The DNAs performed well in PCR amplification. [Conclu-sion] The DNAs extracted by modified CTAB method could satisfy the requirement of PCR amplification.     

A Method Suitable for Extracting Genomic DNA from Animal and Plant——Modified CTAB Method

[Objective] The study aimed to introduce a rapid and effective method that is suitable for extracting genomic DNA from animal and plant. [Method] The genomic DNAs were extracted from tender leaves of 24 peanut cultivars and from the liver,lung and kidney of white mouse through the specifically modified CTAB method. The DNAs were run on agarose gel,next detected by DNA/Protein analyzer. Finally PCR amplification was conducted to detect the quality of DNAs extracted using the modified CTAB method. [Result] The clear and orderly bands were observed in gel detection,and the values of OD260/OD280 for DNAs extracted via modified CTAB method were between 1.77-1.83. The DNAs performed well in PCR amplification. [Conclusion] The DNAs extracted by modified CTAB method could satisfy the requirement of PCR amplification.     

一种适用于动物与植物总DNA提取的方法——改良CTAB法

关于动物和植物基因组DNA的提取方法国内外有很多报道,但同一方法通常只能较好的从动物或植物提取总DNA。在前人报道的基础上,该研究对常用的CTAB法进行了适当修改,获得了一种从动物和植物中均能有效提取DNA的方法。     

一种适用于动物与植物总DNA提取的方法——改良CTAB法(英文)

[Objective] The study aimed to introduce a rapid and effective method that is suitable for extracting genomic DNA from animal and plant. [Method] The genomic DNAs were extracted from tender leaves of 24 peanut cultivars and from the liver,lung and kidney of white mouse through the specifically modified CTAB method. The DNAs were run on agarose gel,next detected by DNA/Protein analyzer. Finally PCR amplification was conducted to detect the quality of DNAs extracted using the modified CTAB method. [Result] The clear and orderly bands were observed in gel detection,and the values of OD260/OD280 for DNAs extracted via modified CTAB method were between 1.77-1.83. The DNAs performed well in PCR amplification. [Conclusion] The DNAs extracted by modified CTAB method could satisfy the requirement of PCR amplification.     

一种适用于动物与植物总DNA提取的方法——改良CTAB法

[目的]介绍一种简单、高效且能用于提取动物与植物的总DNA的方法。[方法]采用改良CTAB法,从24个花生品种嫩叶及小白鼠的肝、肺和肾中提取DNA,进行琼脂糖电泳和蛋白核酸分析仪检测及PCR扩增检验。[结果]所提取DNA电泳条带清晰,整齐均匀,OD260/OD280值介于1.77~1.83,用于PCR扩增获得理想效果。[结论]该研究介绍的改良CTAB法提取动物和植物的总DNA,满足开展PCR扩增的要求。     

用于RAPD分析的树莓基因组总DNA提取初报

以树莓嫩叶为材料,进行树莓基因组总DNA不同提取方法的比较试验.结果表明:CTAB法、SDS法、改良CTAB法均可成功提取树莓DNA,但无论在质量上还是在数量上,改良CTAB法都优于常规CTAB法和SDS法,所提取的DNA大多呈现无色透明状,A260/ A280值多数介于1.65～1.90,完全可以用于RAPD分析.     

西南桦硅胶干燥叶DNA提取方法比较

采用常规CTAB法、CTAB硅珠法、核分离法、二次抽提法、改良CTAB法对富含多糖的西南桦干叶进行DNA提取,并将DNA进行电泳检测及RAPD分析,结果表明：不同提取方法结果差异较大,CTAB硅珠法得率最低,为0.4～11.6μg/g;核分离法和二次抽提法较常规法去除多糖效果好,得率高;改良CTAB法得率最高,为171.2～364.8μg/g,电泳条带最清晰,RAPD扩增结果最好,适合干叶西南桦基因组DNA提取。     

直接、快速地从罹病小麦叶片中提取条锈菌基因组DNA的方法

 小麦条锈菌（Puccinia striiformis f. sp. tritici）是专性程度很高的活体寄生菌,通过分子技术对其进行群体遗传结构研究的过程中,基因组DNA提取是基础之一。本研究利用Chelex 100法和CTAB法直接提取罹条锈病的小麦病叶片上的小麦条锈病菌的基因组DNA,使用PCR对所得到的DNA进行真菌核糖体rDNA ITS和小麦条锈病菌特异性引物CYR33进行检测,对2种基因组DNA的提取方法进行比较分析,结果表明Chelex 100法和CTAB法都能够适合于从罹病组织中直接提取小麦条锈病菌的基因组DNA,但是Chelex 100法较CTAB法所需的样品量少,操作步骤少,操作简单,并且整个过程无需使用有机溶剂进行抽提,对人体比较安全。通过PCR检测DNA提取情况,发现Chelex 100法提取的DNA的PCR结果优于CTAB法,且能够满足基于PCR的群体遗传结构的分析等研究。     

快速小量提取小麦叶片DNA的一种简易方法

[目的]寻求少量、快速提取小麦幼叶DNA的方法。[方法]以小麦幼叶（只要是健康的绿叶,老叶也可）为试验材料,用改良的CTAB法小量快速提取转基因小麦总DNA。具体步骤为：①直接用已灭菌的1．5ml离心管夹取小麦叶片（无需称量）,然后在液氮中快速冷冻后用玻璃棒研磨成细粉（研磨直接在离心管中进行,不必先在研钵中研磨然后再转移到离心管里,能够有效减少材料损失）,加入600山预热（65℃）的2％CTAB提取缓冲液,快速振荡摇匀。置于65℃的水浴锅中温育30min,期间温和混匀几次。②取出离心管,冷却至室温,加入600m氯仿：异戊醇（24：1）充分混匀,于4℃下12000r／min离心8min（只抽提1次）。③取上清,加入等体积预冷的异丙醇,缓慢混匀,至有絮状DNA析出,-20℃放置30min以上。④4℃下12000r／min离心8min。弃上清液,将沉淀用700μl70％乙醇清洗2次,离心,弃乙醇,室温下挥发乙醇,加入适量ddH：O或0．1×TE溶解沉淀（DNA）,-20℃保存。所提取的DNA以0．8％琼脂糖凝胶电泳检测。[结果]改良的CTAB法提取小麦基因组DNA所提取的DNA纯度高、无降解现象,适用于进行常规PCR扩增,并且需要材料量少、成本低,还可缩短操作周期、节省时间。[结论]该研究为小麦DNA的提取提供了一种所需材料量少、简便、快速的方法。