猪旋毛虫病4种检测方法的比较

目的 试验比较快速试纸条法、快速ELISA法、常规镜检法和人工胃液消化法检测猪旋毛虫病效果。方法 采用上述4种方法分别对1566头屠宰猪作旋毛虫病的检测。结果 旋毛虫检出率分别为1．66％、1．66％、1．21％和1．60％。结论 快速试纸条法具有特异、敏感、快速、简便的特点，用于现场检测可收到立等可取的效果。     

禽流感H5亚型四种病原学检测方法灵敏度比较

对目前常用的4种禽流感H5亚型病原学检测方法,即禽流感病毒H5亚型反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光RT-PCR、免疫酶渗滤及免疫胶体金(Colloidgoldstrip)试纸条法进行比较。结果发现实时荧光RT-PCR检测方法的灵敏度是RT-PCR的20倍,是免疫酶渗滤的500倍,是免疫胶体金试纸条快速检测法的2000倍,而免疫酶渗滤法的灵敏度是免疫胶体金试纸条快速检测法的4倍。     

犬细小病毒血凝抑制抗体效价胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

试验旨在利用胶体金免疫层析技术建立快速检测犬血清中犬细小病毒（canine parvo virus, CPV）血凝抑制（haemagglutination inhibition, HI）抗体效价的方法,用于CPV疫苗免疫效果评价。采用双抗体夹心法,以抗CPV血凝相关抗原的单克隆抗体制备CPV抗原检测试纸条;将犬血清进行不同比例系列稀释后,分别与定量CPV抗原充分反应,滴入CPV胶体金试纸条,根据试纸条检测线（test line,T线）消失时的血清最高稀释倍数判断血清中CPV抗体的HI效价;用此方法检测86份犬血清样品,并与传统血凝抑制试验方法进行分析比较。结果显示,成功制备CPV抗原检测试纸条,确定了试纸条检测犬血清CPV-HI效价的反应条件和结果判定标准。结果表明,在检测不同稀释倍数犬血清反应后的CPV抗原时,能使试纸条T线消失时的血清最高稀释倍数与HI效价具有正相关性,犬血清最高稀释倍数乘以4即为HI效价;两种方法的符合率达90.7%。本试验初步建立了胶体金试纸条检测CPV血凝抑制效价的方法,为检测CPV-HI效价提供了一种操作简单、快速的试验方法,可用于CPV疫苗免疫效果评价。     

牛羊日本血吸虫抗体检测试纸条的研制

为研制一种快速检测牛羊血吸虫抗体的试纸条检测方法,以乳胶微球标记兔抗牛羊IgG为免疫探针,血吸虫虫卵可溶性抗原为检测线,羊抗兔IgG为质控线,建立了快速检测牛羊血吸虫抗体的试纸条检测法。该方法可测出人工感染血吸虫尾蚴28d及以上的牛血纸抗体,检测东毕吸虫、肝片吸虫血样未见交叉反应;用试纸条检测人工接种血吸虫牛血纸20份、非疫区牛血纸30份,与Dot-ELISA法、粪孵法的阳性符合率和阴性符合率均为100%。血吸虫抗体检测试纸条在2℃~8℃保存14个月,室温保存8个月不失效。试验表明,血吸虫病血纸抗体检测试纸条具有很高的敏感性、特异性、可重复性和稳定性,适合于基层单位进行家畜血吸虫抗体的快速诊断、普查和检疫。     

猪尿液中盐酸克伦特罗检测方法比较

利用快速检测试纸条法、竞争酶标免疫法(ELISA)和气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)分别对84份猪尿液样品进行盐酸克伦特罗检测。结果显示,ELISA方法与气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为100%,快速检测试纸条法与固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为90.5%。     

猪口蹄疫O 型抗体检测试纸条对比试验

为了解不同猪口蹄疫O 型抗体检测试纸条的性能,通过检测已知相关及非相关阳性血清样品、阴性血清样品和免疫 猪血清样品,对4种猪口蹄疫O型抗体检测试纸条的敏感性、特异性进行研究评估,并对比猪口蹄疫O型VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒的检测结果。结果表明,仅有A试纸条的敏感性和特异性较好,且与试剂盒抗体检测结果的符合率较高（90%）;而其他试纸条的敏感性和特异性较差,与试剂盒抗体检测结果的符合率较低（40%～65%）。通过对比检测,仅有A试纸条可用于大量临床样品的快速检测和现场检测,更适合基层兽医和养殖户使用,而其他试纸条的检测性能还有待进一步优化提升。     

犬细小病毒病免疫胶体金诊断技术的研究

建立一种简便、快速、准确检测犬细小病毒(CPV)的胶体金免疫层析法(GICA).采用柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记纯化的CPV单克隆抗体,在玻璃纤维素膜上喷加纯化的CPV多克隆抗体,制成诊断CPV抗原的快速诊断试纸条.用本试验研制的CPV试纸条检测收集到的120份犬粪便样品,其结果与HA结果相比对,HA效价在1:40以上,试纸条均能检测到为阳性.CPV试纸条与犬瘟热病毒及犬传染性肝炎病毒无交叉反应.且试纸条保存6个月后,其检测结果重复性为100%.试验证明,本研究建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可在临床上广泛应用,也可用于CPV的流行病学调查.     

犬C-反应蛋白荧光定量免疫层析检测方法的建立与应用

试验开展了犬C-反应蛋白(C-CRP)荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在研制一种操作简易、灵敏度高,用于快速定量检测C-CRP荧光免疫层析试纸条。采用双抗体夹心法和荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球标记的抗C-CRP单克隆抗体及羊抗鸡IgY为标记抗体,抗C-CRP单克隆抗体和鸡IgY分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。结果显示,所制备C-CRP检测试纸条的检测范围为0.5～250mg/L,检测限为0.5mg/L,批内和批间变异系数(CV)分别为0.68%～6.94%和0.89%～8.79%,平均回收率为98.15%～101.19%,试剂与9种干扰物质无交叉反应。加速破坏稳定性试验表明试纸条可以常温放置24个月。临床样本测试发现,其与I-CHROMA试剂盒检测结果相关性良好(R2=0.995)。综上所述,该荧光免疫层析试纸条灵敏度、特异度较高,且操作简单、快速,可用于宠物犬临床检测。     

3种国产布病抗体检测试剂盒的效果评价

为了比较国产布鲁菌病间接ELISA抗体检测试剂盒、竞争ELISA抗体检测试剂盒和胶体金试纸条的检测效果,通过对已知阴阳性血清样品的检测,比较了上述3种检测方法的敏感性和特异性。进一步采用临床血清样品比较了3种检测方法与虎红平板凝集试验(RBT)的检测效果,并采用补体结合试验(CFT)对结果进行了复核。结果显示,间接ELISA、竞争ELISA和胶体金试纸条的敏感性分别为96.67%,100.00%和98.33%,3种检测方法的特异性分别为98.33%,93.33%和93.33%。对300份临床样品的检测结果显示,4种检测方法共同检出的阳性样本为27份,阴性样品为210份,整体符合率为79%。通过CFT对63份不同方法检验结果有差异的样本进行确诊,结果表明RBT与CFT的符合率最低,仅为3.17%;间接ELISA与CFT的符合率最高,为98.41%;竞争ELISA和胶体金试纸条的符合率分别为87.30%,85.71%。结果表明,间接ELISA、竞争ELISA和胶体金试纸条具有良好的特异性和敏感性,能够满足布病临床检测需求;RBT对临床样本的检测存在较高比例假阳性和假阴性。     

犬C-反应蛋白荧光定量免疫层析检测方法的建立与应用

试验开展了犬C-反应蛋白(C-CRP)荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在研制一种操作简易、灵敏度高,用于快速定量检测C-CRP荧光免疫层析试纸条。采用双抗体夹心法和荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球标记的抗C-CRP单克隆抗体及羊抗鸡IgY为标记抗体,抗C-CRP单克隆抗体和鸡IgY分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。结果显示,所制备C-CRP检测试纸条的检测范围为0.5～250mg/L,检测限为0.5mg/L,批内和批间变异系数(CV)分别为0.68%～6.94%和0.89%～8.79%,平均回收率为98.15%～101.19%,试剂与9种干扰物质无交叉反应。加速破坏稳定性试验表明试纸条可以常温放置24个月。临床样本测试发现,其与I-CHROMA试剂盒检测结果相关性良好(R2=0.995)。综上所述,该荧光免疫层析试纸条灵敏度、特异度较高,且操作简单、快速,可用于宠物犬临床检测。     

鹿布鲁菌病免疫胶体金检测试纸条的研制

利用SUMO-BCSP31重组大肠杆菌表达并纯化了布鲁菌BCSP31重组蛋白,并利用该蛋白研制了布鲁菌免疫胶体金检测试纸条。以BCSP31蛋白作为检测抗原,通过间接法研制胶体金试纸条检测鹿血清抗体。该试纸条与大肠杆菌、沙门菌、小肠结肠炎耶尔森菌和绿脓杆菌无交叉反应;检测阳性血清最大稀释倍数为1∶640,证明试纸条具有良好的特异性和敏感性。临床上对420只鹿进行检测,比对试纸条与虎红平板凝集试验(RBT)检测结果:阳性符合率为100%,阴性符合率为96%,Kappa值为0.73,两种方法符合率较高;比对试纸条与cELISA检测结果:阳性符合率为81%,阴性符合率为100%,Kappa值为0.88,两种方法符合率高。该试纸条简便快捷,具有较高准确性,可用于鹿布鲁菌病的现场初筛检测。     

胶体金免疫层析法检测谷物中的黄曲霉毒素B1

采用胶体金免疫层析法检测谷物中的黄曲霉毒素B1,谷物样品经提取后,用胶体金免疫层析试纸条法对其进行黄曲霉毒素B1的测定,并与高效液相色谱法进行比较。结果表明:胶体金免疫层析试纸条法与高效液相色谱法的相符率可达90%以上,胶体金免疫层析试纸条法操作简单、快速、方便,可以应用于谷物中的黄曲霉毒素B1的现场快速检测。     

应用猪瘟抗体免疫金标试纸检测猪瘟抗体的比较试验和改进试验

目前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法,DOT—ELISA检测法、单抗ELISA检测法和猪瘟正向间接血凝法。这些方法虽然都具有微量、特异、准确的优点，但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员，一次检测至少需要4h，对于基层兽医站、兽医诊所和养猪场不适用。猪瘟抗体免疫金标试纸的研制成功开创了猪瘟抗体水平检测的新方法，该方法操作简便，不需要任何仪器设备及复杂的样品处理，检测一个样品只需5～10min，操作简便、快速、准确、灵敏度高、直观、结果容易判定，非常适应于基层兽医站和各养猪场使用。基层兽医站和各养猪场（户）可应用猪瘟抗体免疫金标试纸进行猪瘟抗体监测。但金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法，其应用有待于继续研究，针对这种情况，试验对三种检测方法进行了比较研究，并对金标试纸条法进行了改进研究，使金标试纸条法的检测结果与其他方法的符合率达到了无显著差异的水平。     

H7N9禽流感病毒纳米荧光颗粒试纸条的研制

为建立一种快速、敏感的H7N9禽流感病毒检测方法,以荧光纳米颗粒为标记物,采用免疫层析法制备H7N9荧光纳米颗粒试纸条,通过紫外灯下观察试纸条上的荧光信号来进行结果判定。结果表明:用制备的荧光纳米颗粒试纸条检测多个亚型禽流感病毒,只有H7N9禽流感病毒结果呈阳性,证实该试纸条具有较好的特异性;用该荧光试纸条与国家标准禽流感RT-PCR方法同时对200份样品进行检测,符合率达到935%。本试验研制的纳米颗粒荧光试纸条可用于H7N9禽流感病毒现场快速检测,具有广阔的应用前景。     

鸽新城疫快速诊断试剂盒应用效果研究

为进一步验证鸽新城疫快速诊断试剂盒的效果,通过对2个养殖场的200只鸡和30只鸽用胶体金试纸条以及血凝(HA)、血凝抑制(HI)试验进行检测。结果表明,试纸条与HA、HI检测方法相比,符合率100%,说明研制的试纸条在用于鸽新城疫和鸡新城疫诊断时,具有快速、灵敏、特异、简便等特点和良好的开发应用前景。适合基层兽医部门和养殖户对该病的诊断,可缩短疫病的诊断时间,减少经济损失。     

大片形吸虫免疫胶体金检测试纸条的研制及初步应用

为建立一种快速、简便、适应现场应用的水牛大片形吸虫检测方法,本试验利用抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株7D1和7D4分别制备和纯化得到单克隆抗体7D1和7D4;采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为30 nm的胶体金,再用胶体金标记纯化单克隆抗体7D1,在硝酸纤维素膜的质控带和检测带处分别包被羊抗鼠IgG二抗和单克隆抗体7D4,经反应条件优化,组装成了大片形吸虫免疫检测试纸条。经测试该检测试纸条对ES抗原的检测下限为0.94 μg/mL,与胰扩盘吸虫、前后盘吸虫、支原体、弓形虫、伊氏锥虫均无交叉反应,特异性好。采集广西地区334份水牛新鲜粪样并用试纸条检测,阳性率为38.62%。结果表明,试纸条方法操作简单、快速、易于判定,特异性好,敏感性高,适合基层大面积普查和现场检测大片形吸虫。     

口蹄疫病毒抗原胶体金试纸条的研究

利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫快速检测试纸条。该试纸条检测O、A、Asia 1型3种血清型灭活口蹄疫病毒均为阳性,检测水疱性口炎病毒、猪水疱病病毒、蓝舌病病毒、猪蓝耳病病毒4种灭活抗原及小反刍兽疫病毒疫苗株均为阴性,试验结果与口蹄疫实时荧光定量RT-PCR方法的完全一致,表明其具有良好的特异性。敏感性试验结果是,试纸条的检测极限为1∶160稀释的样品,其敏感性相当于实时荧光定量RT-PCR方法的1/64。由于试纸条具有操作方便、检测快速等优点,因此该试纸条可以用于大量临床样品的快速检测和现场检测。     

鸽Ⅰ型副黏病毒免疫胶体金诊断试纸条的制备

采用柠檬酸钠还原法制备胶体颗粒,胶体金用抗鸽Ⅰ型副黏病毒(PPMV-1)F蛋白单克隆抗体标记并纯化,包被于玻璃纤维膜。再将纯化的抗PPMV-1 F蛋白单克隆抗体和羊抗鼠的二抗包被在NC膜作为检测线和质控线,组装成PPMV-1快速检测试纸条,建立一种快速、简便的检测PPMV-1的胶体金免疫层析方法。结果表明,所研制PPMV-1胶体金免疫层析快速检测试纸条,准确性高,且不与鸡传染性支气管炎病毒、鸡减蛋综合征病毒、鸡马立克病毒等发生交叉反应;批间和批内的重复性较好;灵敏度高,试纸条可以检测血凝效价≥23的病毒液;试纸条置4℃避光密封干燥保存1年,37℃放置10 d,对其性能没有任何影响。试纸条与HA、HI试验检测方法相比,检测棉拭子的符合率为97.5%,检测病料的符合率为100%。所研制的PPMV-1试纸条在鸽Ⅰ型副黏病毒检测诊断方面具有快速、灵敏、特异、简便等特点,具有良好的开发应用前景。     

牛布鲁菌荧光标记免疫层析试纸条快速检测方法的建立

为建立一种快速诊断牛布鲁菌病的方法,以原核表达、纯化的外膜蛋白OMP22作为抗原,以带荧光标记的IgG抗体作为标记物制备免疫层析试纸条,建立一种布鲁菌病快速检测方法,并对该方法的敏感性和特异性进行验证。结果显示,制备的试纸条最低可检出1∶100稀释的牛布鲁菌标准阳性血清,且与牛结核、牛蓝舌病、牛病毒性腹泻、牛口蹄疫、牛巴氏杆菌病、牛白血病的血清无交叉反应;试纸条检测结果与商品化ELISA检测试剂盒(IDEXX)的符合率为93.5%。以上结果表明,建立的荧光标记免疫层析试纸条方法能快速检出牛血清中的布鲁菌抗体,具有良好的敏感性和特异性,是一种适合现场初筛的检测方法。     

犬病快速检测试纸条

犬病快速检测试纸条是采用胶体金标记免疫层析技术制成的,是一种快速检测犬体内特定抗原(抗体)的试纸。目前可检测犬传染病数十种,此试纸条具有快速、简便、实用等优点,现已被广泛应用在犬病的临床诊断中,同时它也作为犬饲养者家中自测犬病的首选工具。本文以犬瘟热病毒抗原检测试纸条举例说明。检测方法:用生理盐水沾湿的棉签收集病犬的眼