水牛实验感染肝片吸虫后IGF-Ⅰ和β内啡肽含量变化及其对免疫功能的影响

头健康阉公水牛, ５ 头经口每日感染肝片吸虫囊蚴６０ 个／ 头, 连续２０ ｄ ; ３ 头不感染作对照。于感染前和感染后每周采集颈静脉血样１次, 共２７ 次, 分别测定血浆 Ｉ Ｇ Ｆ Ⅰ、β内啡肽 （β Ｅ Ｐ） 以及 Ｗ Ｂ Ｃ 、 Ｄ Ｃ ; Ｔ、 Ｂ 淋巴细胞比例和血清抗肝片吸虫 Ｉｇ Ｇ 水平。结果 Ｉ Ｇ Ｆ Ⅰ和β Ｅ Ｐ 分别在开始感染后第５ 周和第４ 周显著升高, 并持续到第２３ 周和第９ 周; Ｉｇ Ｇ 水平也在第４ ～２２ 周显著高于对照组, 嗜酸性粒细胞和 Ｂ 淋巴细胞比例也明显升高。结果表明肝片吸虫感染后水牛免疫功能的变化可能与 Ｉ Ｇ Ｆ Ⅰ及β Ｅ Ｐ 有关。     

β—Ep和IGF—1对急性肝片形吸虫感染水牛免疫机能的影响

１２头健康阉公水牛，９头经口１次感染肝片吸虫囊蚴１６００个／头，３头对照感染前和感染后２２周，每周定时采颈静脉血样１次，分别测定血浆观察ＩＧＦ－１和β－Ｅｐ与机体免疫功能的关系。结果发现ＩＧＦ－１浓度和淋巴细胞比例在感染后１周即明显高于对照一，ＩｇＧ水平测于感染后第２周开始明显升高，β－Ｅｐ水平在感染后第４周先显著降低，９地明显升高。结果提示机体免疫功能可能与ＩＧＦ－１和β－Ｅｐ水平的变化有关。     

用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

牛对纯化溶血性巴氏杆菌荚膜多糖的血清学反应

将纯化的溶血性巴氏杆菌生物Ａ型血清１型的荚膜多糖（ＣＰ）与盐溶液、氢氧化铝和福氏不完全油佐剂混合后，给３组犊牛注射不同的抗原制剂、５头成年母牛注ＣＰ盐制剂。接种后４周进行二次注射。将每周采集一次的血清样本以间接血凝试验检测溶血性巴氏杆菌特异性抗体；以ＥＬＩＳＡ检测ＣＰ特异性抗体。以纯化的ＣＰ刺激犊牛，能产生ＣＰ特异性ＩｇＭ、ＩｇＧ１和ＩｇＧ２，成年母牛以产生ＩｇＭ和ＩｇＧ１占优势。第二次注射ＣＰ抗     

ABC—Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒

建立了ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的方法,其最佳反应条件是：包被液为０．０５ｍｏｌ／ＬｐＨ９．６的碳酸钠－碳酸氢钠缓冲液（ＣＢＳ）,免疫ＩＢＶ ＩｇＧ的最佳工作浓度为１：８０;抗原的最佳浓度为１：８００;封闭剂选用０．０１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．４含３０ｍＬ／Ｌ白明胶的ＰＢＳ,Ｂ－ＡｇＧ和ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２００。用ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２０     

肝片吸虫感染对反刍动物胆道粘膜肥大细胞数量的变化

分别对肝片吸虫自然感染的５头黄牛和５头绵羊以及无肝片吸虫感染的５头黄牛和５头绵羊的胆道粘膜肥大细胞（ＭＭＣ）进行了计数观察。结果与某些动物肠道蠕虫感染一样，肝片吸虫在反刍动物胆道的寄生引起了胆道ＭＭＣ的显著增多。有肝片吸虫和无肝片吸虫感染的黄牛胆道ＭＭＣ分别为４３１±１０３／ｍｍ２及１９１±６６／ｍｍ２（Ｐ＜０．０５），而绵羊胆道ＭＭＣ则分别为７０２±３００／ｍｍ２和７５±１３／ｍｍ２（Ｐ＜０．０１）。     

杜大长猪IGF-I基因的克隆及其序列分析

采用ＴＲＩzol法从杜大长杂交猪的肝脏中提出总ＲＮＡ,将其纯化后作为ＰＣＲ扩增模板 ,以设计的Ｐ１（５′－ＣＴＡＣＡＴＴＣＴＧＴＡＧＴＴＣＴＴＧＴＴＴＣＣ－３′）为引物合成ＩＧＦ－Ｉ基因cＤＮＡ的第１链,再以Ｐ１和Ｐ２（５′－ＡＴＧＧＣＣＣＴＧＴＧＣＴＴＧＣＴＣＴＣＣＴＴ－３′）为引物扩增到大小约为３６０bp的产和,并将其达隆至pＧＥＭ－Ｔ载体上。经筛选、酶切、我分析,表明该片段为ＩＧＦ－Ｉ基因的cＤＮＡ     

分泌抗IBDV独特型抗体细胞株的建立

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶ ＩｇＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得了２株（２Ｂ６株、５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，并能诱生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独型抗体腹水。     

抗EDS—76病毒单克隆抗体的研究：Ⅰ.分泌抗ESD—76病毒单克隆抗体细…

建立了５株分泌抗ＥＤＳ－７６病毒的单克隆抗体细胞株，分别是Ｃ４＾１３，Ｃ１１＾１３，Ｃ１１＾１５，Ｅ７＾１５和Ｆ９＾１３，各株分泌抗体的能力均稳定，且者是抗ＥＤＳ－７６病毒的特异性抗体，不与其它多种禽病毒发生交叉反应。其中Ｃ４＾１３，Ｃ１１＾１５分泌的抗体是ＩｇＧ２ａ，Ｃ１１＾１３分泌的抗体是ＩｇＧ１。这５株细胞株所分泌的抗体都有较强的中和活性。     

分泌抗细粒棘球蚴原头蚴抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用感染包虫的绵羊肝包囊中的活原头蚴腹腔接种ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，８个月后取鼠脾细胞与Ｓｐ２／ｏ骨髓瘤细胞融合。经ＩＨＡ筛选，获得１４个阳性杂交瘤细胞株，对其中３株进行了克隆和进一步研究。结果表明，５Ｃ５与细颈囊尾蚴、脑包虫和肝片吸虫抗原均不发生交叉反应，腹水抗体的ＩＨＡ效价为１：２０４８，属ＩｇＧ２ｂ亚类：３Ｃ５和６Ｃ４与细颈囊尾蚴和脑包虫有轻度交叉反应，腹水抗体的ＩＨＡ效价为１：１２８，均属ＩｇＭ类。     

应用酶标SPA Dot-ELISA同时检测牛羊血吸虫病和肝片吸虫病

采用给雄性家兔注射黄牛、水牛、山羊ＩｇＧ混合液（１∶１∶１）制备的兔抗黄牛、水牛和山羊ＩｇＧ连接酶标ＳＰＡ，解决了酶标ＳＰＡ与牛羊血吸虫和肝片吸虫免疫复合物相结合的技术关键，并制成了可同时用于牛羊血吸虫病和肝片吸虫病诊断的酶试剂。建立了Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ同时检测牛羊血吸虫病和肝片吸虫病技术，能测出人工感染１～１５０条虫体７～４２ｄ病畜抗体，阳性检出率达１００％。     

有丝分裂原对离体boPBMC增殖和分泌Ig的作用

应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，ＥＬＩＳＡ和ＦＡＣＳ研究了离体奶牛外周血单核细胞（ｂｐＰＢＭＣ）对有丝分裂原的免疫应答。ＰＷＭ和ＣｏｎＡ能不同程度地诱导ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌Ｉｇ；而ＳＥＢ只能使ｂｏＰＢＭＣ高度增殖而不分泌Ｉｇ（Ｐ〉０．０５）。ＰＷＭ诱导的ｂｏＰＢＭＣ经１２ｄ培养，其中ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比率为２．９：１；而ＳＥＢ诱导的细胞为０．３：１。离体ｂｏＰＢＭＣ主要分泌ＩｇＭ和ＩｇＧ１，只有     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原，建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测，接种后４天时均呈阴性反应，７天时８只鸡呈阳性反应，１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、     

应用肝片吸虫ES抗原检测实验感染山羊IgG的动态水平

用肝片吸虫排泄分泌抗原（ＥＳＡg）的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测人工感染肝 吸虫的山羊血清中特异性ＩgＧ抗体动态变化。ＥＳＡg用量为１３．８ug/孔，抗体稀释１ ０００倍，二抗１：２０００稀释（３．５ug/孔），ＨＲＰ标记的葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ＊）工作浓度为１：４０。检测结果表明，２组实验山羊（第１组每只羊口服２００ 个 囊蚴，第２组每只羊口服５００个囊蚴）在感染后第３周血清中的持异ＩgＧ即开始升高最     

穴位接种猪TGE苗家兔β—EP与免疫活性细胞动态研究

本试验用酶标组化方法对穴位接种猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）苗家兔外周血，脾，淋巴结的β－内啡肽（β－ＥＰ）进行了动态定量和定位研究，外周血β－ＥＰ在穴位注苗后３０ｍｉｎ有一个峰值，迅速下降后缓慢升高，第５天达第２个峰值，然后缓慢下降；脾和淋巴结仅在注苗后５天出现一个峰值。首次发现活化Ｔ细胞存在β－ＥＰ阳性反应细胞，而Ｂ细胞不存在。     

抗鼠隐孢子虫单克隆抗体的研究

利用鼠隐孢子虫卵囊脱囊物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，经过３￣４次有限稀释法克隆化，获得５株持续分泌抗体的杂交瘤细胞株。所获抗体均属ＩｇＧ１。ＩＦＡ检测结果表明：２Ｇ７株单抗作用于卵囊壁抗原，而ＩＡ４、２Ｅ７、３Ｇ３、４Ａ７株单抗作用于子孢子表面抗原。诱生腹水经过反复冻融、冻干及硫酸铵沉淀后，抗体活性无明显变化。５株单抗均不与贝氏隐孢子虫及柔嫩艾美尔球虫产生交叉反应，与小孢隐     

抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得２株（２Ｂ６株，５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，其能诱生ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按１∶１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗，免疫接种ＳＰＦ鸡和普通京白公鸡，然后用ＩＢＤＶ野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒，保护率分别为８／８、１４／１４，从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。     

半胱胺引起绵羊外周血液β－内啡肽和几种主要代谢激素的变化

在４头装置长久性胃肠道瘘管和临时性颈静脉血管插管公绵羊研究表明，经十二指肠瘘管灌注半胱胺（８０ｍｇ／ｋｇ体重）后５ｄ内外周血液的血浆ＳＳ浓度降低３３．６８％（２３３．１±４．４ｐｇ／ｍｌ对１５４．６±＋５．２ｐｇ／ｍｌ，Ｐ＜０．０１）；胃泌素水平升高２３．９％（Ｐ＜０．０５），ＧＨ、胰岛素分别升高１２４．２％（Ｐ＜０．０１）和１４４．０８％（Ｐ＜０．０１）；Ｔ３、Ｔ４水平分别增加７１．８％（ｐ＜０．０１）和１７．５５％（Ｐ＜０．０５）；β－ＥＮＤ水平第３天升高５８．１１％（５７．２９±１．６９ｐｇ／ｍｌ对３２．４４±２．５０ｐｇ／ｍｌ，Ｐ＜０．０１），第５天回落（Ｐ＜０．ｍ）。本实验证明半胱胺可抑制反刍动物ＳＳ水平，使外周血液ＧＨ、胃泌素、胰岛素、Ｔ_３、Ｔ_４和β－ＥＮＤ水平均相应升高，提示促进了反刍动物的消化代谢水平。