免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗

试验选取自身蛋白制备克盐酸伦特罗克伦特罗载体抗原,免疫动物后产生高效价的特异性抗体,纯化抗体与胶体金结合成免疫金,制备成简易的检测试纸条。通过检测试纸条敏感性、保存期、金标抗体工作浓度选择、操作方法对比、实验检测及与单抗金标试纸条平行检测等试验,证明建立的免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗具有实用性、可靠性和稳定性。自身全血清作载体可使抗盐酸克伦特罗的ELISA效价高达4万以上。免疫金试纸法对盐酸克伦特罗的最小检测量为40ng·mL-1,试纸条在室温保存150d不影响检测结果。实验检测86份ELISA试剂盒阴性样品和42份阳性样品,其符合率分别为100%和95.2%。市售单抗金标试纸条检测结果与ELISA法的阳性符合率为95%(19/20)。     

猪瘟胶体金快速诊断试纸条的研制

采用柠檬酸钠还原法制备胶体颗粒,用猪瘟(CSF)抗体标记纯化,并包被在玻璃纤维膜上,另外将纯化的CSF抗体和羊抗鼠抗体包被在硝酸纤维膜上,组装成CSF快速检测条,对猪瘟病毒进行检测.结果表明:使用所研制的CSF快速检测条检测收集的70份待检样品,共检出猪瘟阳性病例26例,而经病毒分离鉴定阳性病例有28例,阳性符合率达92.8%;将5份阳性猪瘟病毒稀释后用试纸条和ELISA方法进行敏感性实验,结果表明,诊断试纸条的敏感性较高,用试纸条对鸽新城疫病毒、鸡减蛋综合症病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒进行检测,无交叉反应.     

猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌多重PCR检测方法的建立和应用

根据已发表的猪呼吸道疾病主要致病菌猪链球菌(SS)、胸膜肺炎放线杆菌(APP)和副猪嗜血杆菌(HPS)基因序列合成3对特异性引物,通过单一PCR和三重PCR体系及条件优化,建立这3种致病菌的三重PCR检测方法,并对200份临床表观健康猪鼻拭子样品用三重PCR方法进行检测。结果显示:建立的三重PCR方法能对同一样品中的SS、APP、HPS 3种病原菌的DNA模板进行扩增,无交叉反应;对猪体内常见的猪多杀性巴氏杆菌、猪大肠杆菌、猪放线杆菌、猪葡萄球菌、猪丹毒杆菌、猪沙门氏菌进行扩增,并无任何扩增产物;对SS、APP、HPS细菌纯培养物的检测敏感性分别为1×10~4CFU/ml、1×10~3CFU/ml、1×10~3CFU/ml;对人工模拟SS、APP、HPS感染组织样品的敏感性均为1×10~4CFU/ml。三重PCR方法对200份临床表观健康猪鼻拭子样品的检测结果显示:SS阳性160份,阳性率80.0%;APP阳性3份,阳性1.5%;HPS阳性45份,阳性22.5%。分别用细菌分离法和三重PCR法对30份临床病料进行检测,两者检测结果的符合率达到93%。建立的三重PCR可在4.5 h左右得到检测结果。     

检测猪瘟病毒胶体金和量子点试纸条的初步研制

为建立快速、简便检测猪瘟病毒(CSFV)抗体的方法,本研究采用胶体金和量子点免疫层析技术,将纯化的重组CSFV E2蛋白作为捕捉抗原,以纯化的抗CSFV E2蛋白多克隆抗体和HRP兔抗猪IgG分别包被于硝酸纤维素膜上,作为质控线(C线)和检测线(T线),优化反应条件,制备免疫层析试纸条,用于临床检测。结果表明,制备的2种试纸条都可用于检测CSFV标准阳性血清,使用不同批次试纸条进行检测,结果无差异。2种试纸条与CSFV阳性血清反应呈阳性,与伪狂犬病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和圆环病毒2型(PCV2)反应呈阴性;胶体金试纸条在临床样品中阳性检出率为84.38%(81/96),与CSFV抗体检测ELISA试剂盒检测阳性符合率为92.05%(81/88);量子点试纸条阳性检出率为87.50%(84/96),与ELISA试剂盒检测阳性符合率为95.45%(84/88)。本研究制备的2种试纸条都具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性。     

鸡新城疫免疫胶体金诊断技术的研究

为了建立一种快速、简便的检测鸡新城疫病毒(NDV)的胶体金免疫层析法(GICA),采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的ND抗体,并包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的ND抗体和纯化的兔抗鸡抗体包被在硝酸纤维素膜上,组装成ND快速检测试纸条.用本试验研制的ND快速检测试纸条检测收集的24份样品,其结果与HA结果一致,符合率100%;当病毒HA效价在1∶40以上时,试纸条均能检测为阳性;ND快速检测试纸条与已知的马立克病(MD)病料和鸡传染性法氏囊病(IBD)病料的上清液无交叉反应出现,且保存6个月后重复性100%.试验证明,建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可用于鸡新城疫诊断,具有广泛应用价值.     

胶体金免疫层析法快速诊断犬弓首蛔虫病

[目的]建立了一种能快速诊断犬弓首蛔虫病方法。[方法]以胶体金标SPA和犬弓首蛔虫（Toxocara canis）抗原蛋白制备免疫层析试纸条,并对其灵敏度和特异性进行评价。采用该试纸条和虫检法对200份犬血清样本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。[结果]组装的犬胶体金免疫层析试纸条的最低检测线为0.20μg/ml,灵敏度很好;与犬的其他寄生虫病的阳性血清进行反应,均成阴性;对200份犬血清样本的阳性检出率为10%,而虫检法的阳性检出率为2%。[结论]胶体金免疫层析法诊断犬弓首蛔虫病具有操作简便、灵敏度高、特异性强的优点,可用于犬弓首蛔虫病的快速检测。     

二温式PCR检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌方法的建立与应用

为了探索简便、快速确诊猪传染性胸膜肺炎的方法,根据猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)apx IV基因序列,设计合成1对特异性引物,建立聚合酶链反应(PCR)检测APP的方法。采用该方法对APP和其他6种猪病病原核酸进行检测,结果只对APP扩增出与预期大小相符的422bp DNA片段,而对其他6种猪病病原核酸的扩增结果为阴性。该PCR最低可检出10pg的APP DNA。对送检的46份可疑病猪组织进行检测,结果有19份样品为阳性,27份为其他病原感染。     

动物布鲁氏菌病不同初筛及确诊方法组合检测差异性比对分析

为探讨布鲁氏菌病采用先初筛、后确诊不同方法及试剂组合检测结果的差异性，对实验室保存的133份牛、羊血清，以英国布病参考实验室RBT、SAT、APHA-cELISA方法为标准确定布病阳性血清73份、阴性血清60份。选择4种初筛方法共6种试剂、2种确诊方法共3种试剂，按照先初筛，对结果阳性样品再确诊的检测程序对确定的133份血清样品分别用6种方法(9种试剂)进行检测，结果表明：用18种组合方法检测牛阳性血清样品，符合率100%的有3种，检测结果假阴性率为0～53.33%;用12种组合方法检测羊阳性血清样品，符合率100%的有2种组合方法，检测结果假阴性率为0～50.00%。用所有方法检测牛阴性血清样品，符合率100%的有1种方法(试剂),检测结果假阳性率为0～77.78%;检测羊阴性血清样品，符合率100%的有4种方法(试剂),检测结果假阳性率为0～41.67%。应用不同的初筛、确诊组合方法检测同批样品，结果出现了多样性。建议布病初筛可优先选择iELISA、RBT、FPA,确诊可优先选择cELISA。     

烟草漂浮育苗旧苗盘残留物TMV带毒检测

为了建立烟草漂浮育苗旧苗盘残留物中烟草花叶病毒TMV的检测方法，以TMV病苗干根为材料，采用直接研磨法、液氮研磨法和浸泡研磨法制样，效果分别用三抗体夹心法（TAS—ELISA），TMV试纸条和枯斑寄主法检测灵敏度．结果表明，3种方法制备的样品都能用TAS-ELISA和试纸条检测出阳性，且3种制样方法间的差异小；3种制样方法制备的样品都具有侵染力，浸泡研磨法最强，直接研磨法次之，液氮研磨法最弱．TAS—ELISA，TMV试纸条和枯斑寄主接种的检测下限分别为千病根占健康根质量的0．01％，0．10％和0．10％．     

广州市部分区域猫泛白细胞减少症流行现状调查

[目的]了解猫泛白细胞减少症病毒在广州家猫和流浪猫中的流行情况,分析FPV威胁广州家猫和流浪猫的潜在风险。[方法]采用猫泛白细胞减少症免疫胶体金快速检测试纸条和PCR检测方法对广州5家动物医院采集的3 004份猫样品进行检测与分析。[结果]猫泛白细胞减少症免疫胶体金快速检测试纸条检出10份疑似猫泛白细胞减少症阳性样品,采用猫泛白细胞减少症PCR检测方法检出13份猫泛白细胞减少症阳性样品。13份阳性样品来源于96份具有临床症状且未免疫样品,49份家猫样品中有6份呈阳性,47份流浪猫样品中有7份呈阳性,阳性率分别为12.2%(6/49)和14.9%(7/47),发病季节以9~10月多发,发病年龄集中在0~6月龄。[结论]与外界接触和未免疫疫苗可能是导致猫感染FPV的重要原因。因此,家猫加强疫苗接种,减少与未知免疫背景的猫只接触,减少家猫感染FPV的潜在风险。