Cry1Ac 青花菜对小菜蛾的抗性和产卵行为的影响

利用3 个Cry1Ac 蛋白表达量不同的青花菜株系,研究了其对抗性小菜蛾和敏感小菜蛾的抗
性和产卵选择行为的影响。实验室结果表明：在非Bt 青花菜对照上,抗性小菜蛾和敏感小菜蛾的存活率
差异不显著;在Cry1Ac 蛋白表达量为167 ng·g^-1 的Bt 青花菜上,敏感小菜蛾的死亡率达到100%,而抗
性小菜蛾的死亡率仅为18%;在Cry1Ac 蛋白表达量为224 ng·g^-1 和246 ng·g^-1 的Bt 青花菜上,抗性小
菜蛾和敏感小菜蛾的死亡率均达到100%。抗性小菜蛾和敏感小菜蛾在不同Cry1Ac 蛋白表达量的Bt 青花
菜上的产卵量没有显著差异,表明Cry1Ac 蛋白表达量对小菜蛾的产卵行为没有影响。温室试验结果与实
验室结果基本一致。     

几种苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白对黑龙江省主要蔬菜害虫小菜蛾活性分析

利用已克隆的3种Bt cry基因cry1Ca、cry1Ia、cry2Ab和1种野生菌株HD-73(cry1Ac)表达的4种Bt Cry杀虫晶体蛋白,对小菜蛾进行生物活性分析,并将Cry1Ac杀虫晶体蛋白分别与其它3种蛋白按1:1的比例组合,对小菜蛾进行生物活性测定.结果表明:单独使用Cry1Ac的活性最高,LC50为2.39 μg/mL,Cry1Ac与Cry2Ab混合对小菜蛾的具有较高的毒力,LC50为48.91,高于其它组合.     

转Bt 基因早熟春甘蓝抗虫材料的获得

采用农杆菌介导法，将Bt cry1Ia8 抗虫基因转入早熟春甘蓝自交系F2011 中，共获得37 株卡那霉素抗性植株，其中23 株经PCR 检测呈阳性；Southern blot 检测结果表明，cry1Ia8 基因已成功整合到甘蓝基因组中；RT-PCR 和Western blot 检测结果表明，cry1Ia8 基因在RNA 水平和蛋白质水平均得到表达；对转基因植株进行ELISA 检测，其Bt 毒蛋白含量在201.9～241.3 ng·g-1（FW）之间；离体饲虫试验结果表明，转基因植株对敏感小菜蛾和Cry1Ac 抗性小菜蛾均具有较好的抗
性，且Bt 毒蛋白表达量越大，植株抗性越强。     

双抗虫基因转化欧美杨107的研究

以欧美杨107为试材,采用农杆介导法进行双抗虫基因(Bt Cry1Ac基因+API慈姑蛋白酶抑制剂基因)的遗传转化研究,探讨了影响欧美杨107的遗传转化的不同因素,初步建立了欧美杨107品种高效组织培养再生体系及遗传转化体系。结果表明:经PCR检测和虫试效果,证明了目的基因已经整合到欧美杨107的基因组中,从转基因株系中筛选出生长发育正常并抗虫能力强的优良株系。     

利用pmi作为筛选基因对辣椒进行Bt基因转化的研究

根据Cry2Aa2的保守基因序列设计引物,从而扩增出完整的Cry2Aa2序列,连接到含有磷酸甘露糖异构酶基因（pmi）的表达载体pCAMBIA1301-PMI上,采用农杆菌介导的方法转化辣椒,利用甘露糖筛选体系对辣椒转化体进行筛选,对转基因植株进行分子生物学检测和抗虫试验,72h后统计抗虫情况。结果表明：获得了含有Cry2Aa2转基因植株;食用转Bt基因辣椒叶片和果实的斜纹夜蛾幼虫的校正死亡率均高于阴性对照,且大多表现出僵化和厌食的状态,对转基因的辣椒伤害较小,说明Bt基因成功导入辣椒中。     

Bt cry1Ia8抗虫基因对结球甘蓝的转化及其表达

 以结球甘蓝(Brassica oleracea L. var. capitata L. ) 的下胚轴和具柄子叶为外植体, 通过根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) 介导法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) 杀虫晶体蛋白基因cry1Ia8导入结球甘蓝中, 共获得38株卡那霉素抗性植株。PCR和Southern blot检测证实cry1Ia8基因已经成功导入并整合到甘蓝的基因组中; RT2PCR和Western blot检测表明, cry1Ia8基因在转录和翻译水平有一定的表达; 转化植株叶片离体饲喂敏感小菜蛾( Plutella xylostella) 和对Cry1Ac蛋白表现抗性的小菜蛾的试验表明, 该基因不仅对敏感小菜蛾有很强的抗性, 对抗性小菜蛾也具有较强的抗性。     

抗虫相关基因KTI 对青花菜的转化及其对小菜蛾抗性的分析

 以青花菜（Brassica oleracea L. ssp. italica）下胚轴为外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方 法将来源于杨树的Kunitz 型丝氨酸胰蛋白酶抑制剂（KTI）基因导入青花菜品系‘09LR-11’中,获得13 株卡那霉素抗性植株。以KTI 特异引物对转基因植株进行PCR 检测,其中8 株为KTI 阳性植株。Southern blot 分析进一步表明,基因KTI 已成功整合到青花菜基因组中。RT-PCR 检测表明,KTI 在转基因青花菜 中已成功表达。通过室内叶片离体试验和田间观察,初步证明转KTI 青花菜对小菜蛾幼虫具有一定抗性     

农杆菌介导Cry1Ac基因转化菊花

 用农杆菌介导法, 以茎段(节间) 为外植体, 将含有苏云金芽孢杆菌(Bt) 毒蛋白Cry1Ac基因的植物遗传载体导入菊花(切花菊) 品种‘日本黄’中, 得到126株抗性植株, PCR检测及基因组DNA的Southern杂交分析表明Cry1Ac基因已整合到菊花总DNA中, 共获得6株转基因植株。利用棉铃虫做转基因植株的盆栽和叶片平皿试验, 发现其中2株对棉铃虫具有很高抗性, 校正死亡率达90%以上; 1株对棉铃虫具有高抗性, 校正死亡率达80%以上; 3株对棉铃虫抗性较明显, 校正死亡率44.7%～60.9%。     

芥蓝和结球甘蓝分别与甘蓝型油菜杂交的后代结实性及Rfo传递效率比较

为明确甘蓝与甘蓝型油菜种间杂交的生殖隔离程度是否与甘蓝的变种类型有关,以2份Ogura CMS芥蓝和4份Ogura CMS结球甘蓝为母本,分别与2份含有Ogura CMS育性恢复基因Rfo的甘蓝型油菜杂交,获得的种间杂种加倍后,再分别与母本芥蓝和结球甘蓝回交,调查F1、BC1两个世代材料的结实性和Rfo基因的传递效率。结果表明,芥蓝与甘蓝型油菜种间杂交F1代、BC1代的亲和指数都显著高于结球甘蓝（P < 0.05）,是结球甘蓝的2倍以上,且在芥蓝材料中Rfo基因的传递效率高于结球甘蓝。进一步比较BC1回交后代Rfo阳性单株的育性、遗传背景回复率,芥蓝的育性大多显著好于结球甘蓝（P < 0.05）,26株BC1单株遗传背景回复率在0.50 ~ 0.84之间;而结球甘蓝两个BC1单株（15Y1和15Y4）遗传背景回复率分别为0.53和0.59。上述结果说明,芥蓝较结球甘蓝更易与甘蓝型油菜杂交获得后代,且异源目的片段的传递效率更高,因此芥蓝可作为结球甘蓝与甘蓝型油菜杂交的桥梁材料,加速甘蓝型油菜中优异性状的转育进程。     

菜薹与萝卜附加系回交后代外源萝卜染色体的FISH 检测

采用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH），以萝卜基因组特异序列pURsN 作探针，分别与19 份菜薹与萝卜附加系回交后代BC4A3d 进行杂交，检测回交后代中外源萝卜染色体的存在情况。结果显示：只有1 份材料BC4A3d-45 没有杂交信号，其他18 份材料均得到1 个杂交信号，表明除了BC4A3d-45 没有附加外源萝卜染色体之外，其余18 份材料均含有1 条外源萝卜染色体；该结果与分子标记鉴定结果一致。     

Development and bioassay of Cry1Ac-transgenic eggplant (Solanum melongena L.) resistant to shoot and fruit borer

Summary

Eggplant (Solanum melongena L.) is an important fruit vegetable, commercially cultivated in the tropics and subtropics. However, the most serious constraint on eggplant production is damage caused by eggplant shoot and fruit borer (ESFB). The development of resistant transgenic plants, using an insecticidal crystal protein gene, is an available crop protection option. A Cry1Ac gene obtained from the National Research Center for Plant Biotechnology (NRCPB), New Delhi, India, was transformed via Agrobacterium-mediated gene transfer into an improved inbred line of eggplant (IVBL-9). Hypocotyls proved to be the most effective and suitable explants, with a transformation frequency of 17.3% and 2.9 shoots per explant. PCR and Southern blot analyses confirmed the presence of a single copy insertion of the Cry1Ac gene in seven independent transgenic plants. The insertion of a single copy of the gene was also confirmed by segregation analysis of T₁ seed from T₀ plants. ELISA analyses revealed the presence of the Cry1Ac protein, and quantitative estimates confirmed significant levels of Cry1Ac protein (2.46 – 4.33 ng ml^–1 leaf extract) expressed in all seven transformed plants. High levels of expression of this insecticidal protein resulted in significant larval mortality and in the reduced growth of any surviving larva on transformed eggplant tissue.     

欧洲山芥皂苷合成关键酶基因Bv-beta-AS 克隆及表达分析

 以能够产生抗虫皂苷的高抗小菜蛾资源G 型欧洲山芥（Barbarea vulgaris R. Br.）B44 为材料,利用RACE 技术克隆出皂苷合成关键酶beta–香树脂合成酶的基因（Barbarea vulgaris beta-amyrin synthase,Bv-beta-AS）。该基因编码区序列长为2 289 bp（GenBank 登录号JQ172795）,推导其编码762个氨基酸;在基因组水平上长度为4 107 bp （GenBank 登录号JQ172796）,含有15 个内含子。Bv-beta-AS编码的氨基酸具有beta–香树脂合成酶基因家族的保守序列,即DCTAE 序列和QW 特征序列,氨基酸多序列比对和进化树分析表明,该基因与拟南芥beta–香树脂合成酶基因的相似性最高,为74%。利用荧光定量PCR 对欧洲山芥在小菜蛾诱导下该基因的表达进行研究,结果表明,该基因受虫害诱导时上调表达,但是上升到12 h 达顶峰后随时间推移呈回归的趋势。从序列特征和表达模式上推测,Bv-beta-AS 可能是抗虫皂苷合成途径的一个关键酶的基因。     

氟虫腈防治小菜蛾、瓜绢螟药效试验

药效试验表明，5％氟虫腈是防治小菜蛾，瓜绢螟的优良药剂，667m^2用量25－35ml时，防治效果最好，持效时间长，且对小菜蛾低龄幼虫防效明显好于对高龄幼虫的防效。     

小菜蛾、甜菜夜蛾的抗药性现状及治理对策

综述了长江流域小菜蛾、甜菜夜蛾对各类农药的抗性现状及其抗性治理对策,并针对田间小菜蛾、甜菜夜蛾常与其它害虫混发的特点,提出了具体的防治办法。     

小菜蛾、甜菜夜蛾的抗药性现状及治理对策

综述了长江流域小菜蛾、甜菜夜蛾对各类农药的抗性现状及其抗性治理对策，并针对田间小菜蛾、甜菜夜蛾常与其它害虫混发的特点，提出了具体的防治办法。