Bt cry1Ia8抗虫基因对结球甘蓝的转化及其表达

 以结球甘蓝(Brassica oleracea L. var. capitata L. ) 的下胚轴和具柄子叶为外植体, 通过根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) 介导法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) 杀虫晶体蛋白基因cry1Ia8导入结球甘蓝中, 共获得38株卡那霉素抗性植株。PCR和Southern blot检测证实cry1Ia8基因已经成功导入并整合到甘蓝的基因组中; RT2PCR和Western blot检测表明, cry1Ia8基因在转录和翻译水平有一定的表达; 转化植株叶片离体饲喂敏感小菜蛾( Plutella xylostella) 和对Cry1Ac蛋白表现抗性的小菜蛾的试验表明, 该基因不仅对敏感小菜蛾有很强的抗性, 对抗性小菜蛾也具有较强的抗性。     

Cry1Ac 青花菜对小菜蛾的抗性和产卵行为的影响

利用3 个Cry1Ac 蛋白表达量不同的青花菜株系,研究了其对抗性小菜蛾和敏感小菜蛾的抗
性和产卵选择行为的影响。实验室结果表明：在非Bt 青花菜对照上,抗性小菜蛾和敏感小菜蛾的存活率
差异不显著;在Cry1Ac 蛋白表达量为167 ng·g^-1 的Bt 青花菜上,敏感小菜蛾的死亡率达到100%,而抗
性小菜蛾的死亡率仅为18%;在Cry1Ac 蛋白表达量为224 ng·g^-1 和246 ng·g^-1 的Bt 青花菜上,抗性小
菜蛾和敏感小菜蛾的死亡率均达到100%。抗性小菜蛾和敏感小菜蛾在不同Cry1Ac 蛋白表达量的Bt 青花
菜上的产卵量没有显著差异,表明Cry1Ac 蛋白表达量对小菜蛾的产卵行为没有影响。温室试验结果与实
验室结果基本一致。     

转Cry1Ac青花菜回交后代鉴定方法研究

转Bt基因青花菜在遗传分离后代中的鉴定方法,对于准确筛选阳性单株和抗虫材料具有重要影响。利用5份青花菜材料、1份阳性对照（转Cry1Ac基因纯合材料）和5份回交父本（阴性对照）为试验对象,在基因水平上对Cry1Ac进行普通PCR扩增,蛋白水平上采用Bt-Cry1Ab/1Ac转基因检测试纸条测定,表观上采用小菜蛾离体饲虫试验进行抗性鉴定,比较阐明了3种方法的鉴定效果和优缺点。结果表明,3种方法分别从5份青花菜回交材料的159个分离单株中检测到82、77和75份阳性株,经卡方显著性检验,各材料阳性单株与非阳性单株分离后代均符合孟德尔遗传规律。分析表明,小菜蛾离体饲虫试验对于鉴定转Cry1Ac后代抗虫效果准确可靠,但需要很好地控制实验条件;Bt-Cry1Ab/1Ac转基因检测试纸条灵敏度高,可快速观察到Bt毒蛋白的实际表达量,基本不受条件限制,但必须控制人为误差;普通PCR扩增能够鉴定阳性株,但不能反映实际抗虫效果,必须结合小菜蛾饲虫试验或Bt毒蛋白水平上的检测才能实现精准鉴定。     

转Bt 基因早熟春甘蓝抗虫材料的获得

采用农杆菌介导法，将Bt cry1Ia8 抗虫基因转入早熟春甘蓝自交系F2011 中，共获得37 株卡那霉素抗性植株，其中23 株经PCR 检测呈阳性；Southern blot 检测结果表明，cry1Ia8 基因已成功整合到甘蓝基因组中；RT-PCR 和Western blot 检测结果表明，cry1Ia8 基因在RNA 水平和蛋白质水平均得到表达；对转基因植株进行ELISA 检测，其Bt 毒蛋白含量在201.9～241.3 ng·g-1（FW）之间；离体饲虫试验结果表明，转基因植株对敏感小菜蛾和Cry1Ac 抗性小菜蛾均具有较好的抗
性，且Bt 毒蛋白表达量越大，植株抗性越强。     

防治茄二十八星瓢虫Bt菌株的筛选及杀虫活性分析

以从湖北宜昌、襄阳、荆州、广东东莞、安徽安庆5个地区采集得到的52份土样为试材,分别采用温度筛选法、镜检法、PCR-RFLP法和SDS-PAGE等方法,分离了土壤中的苏云金芽孢杆菌,并鉴定了分离出的Bt菌株的基因型,通过茄二十八星瓢虫二龄幼虫的室内杀虫试验测定分离株的杀虫活性,同时分析了部分Bt菌株的伴孢晶体蛋白,以期挖掘新的Bt菌株资源,筛选出对茄二十八星瓢虫具有高毒力的Bt菌株.结果 表明:分离得到10株含cry3基因的菌株,3株含cry7基因的菌株和2株含cry8基因的菌株,得到1株对茄二十八星瓢虫二龄幼虫有高毒力的Bt菌株,当其伴孢晶体悬浮液的浓度在40 mg·mL-1时,校正死亡率最高可达40.42％;发现YC-2-20、GD-4-1均表达分子量约为67 kDa的晶体蛋白;GD-5-7表达分子量约为130 kDa和80 kDa的晶体蛋白;YC-12-6表达分子量约为130 kDa和70 kDa的晶体蛋白.试验筛选出的Bt菌株为农业生产中茄二十八星瓢虫的绿色防控提供了可应用的菌株及基因资源,同时对延缓害虫抗药性的产生也具有重要意义.     

沈阳地区小菜蛾对五种常用杀剂的抗性测定

选用5种常用药剂(阿维菌素、Bt、高效氯氰菊酯、氟虫腈和多杀菌素)对沈阳地区小菜蛾进行了抗性监测.结果表明:沈阳地区小菜蛾品系对5种常用药剂均有不同程度的抗性,对高效氯氰菊酯的抗性水平最高,LC50达到201.683 μg/mL;而对氟虫腈的抗性水平最低,LC50仅为0.139 μg/mL;对Bt、阿维菌素、多杀菌素抗性水平较低,LC50分别为0.327、6.296、0.514μg/mL.     

昆虫激素调控害虫对Bt杀虫蛋白的抗药性

正2020年6月12日,中国农业科学院蔬菜花卉研究所蔬菜虫害防控创新团队在Nature Communications上在线发表了题为"MAPKdependent Hormonal Signaling Plasticity Contributes to Overcoming Bacillus thuringiensis Toxin Action in an Insect Host"的研究论文。该研究发现昆虫激素水平升高可以激活MAPK信号途径反式调控多个中肠受体基因差异表达,从而导致小菜蛾对苏云金芽胞杆菌(Bt)杀虫蛋白Cry1Ac的高抗性。该研究首次揭示了昆虫激素可以参与害虫抗药性的新功能     

杀虫剂对哈尔滨地区小菜蛾幼虫的毒力研究

以小菜蛾为研究对象,采用浸叶法研究了6种杀虫剂对哈尔滨地区小菜蛾的室内毒力活性。结果表明:氯虫苯甲酰胺的毒力最高,LC50仅为0.99mg/L,高效氯氰菊酯的毒力最低,LC50达到50.08mg/L,6种药剂对小菜蛾的毒力从大到小依次为氯虫苯甲酰胺多杀菌素苏云金芽孢杆菌(Bt)丁酯脲阿维菌素高效氯氰菊酯,故氯虫苯甲酰胺可作为哈尔滨地区小菜蛾防治的首选药剂。     

花木害虫粉纹夜蛾抗生物农药Bt抗性机制的研究进展

苏云金芽孢杆菌(Bt)产生的伴孢晶体蛋白(Cry毒素)具杀虫活性,对昆虫有高度选择性而对人畜无害,已开发成生物农药广泛使用。随着Bt农药全世界大量,应用,部分昆虫产生了抗药性。粉纹夜蛾在我国广泛分布且危害较大,已发现其对Bt农药和转Bt基因植物产生抗性。本文比较粉纹夜蛾抗Bt毒素细胞与敏感细胞的各项差异,应用蛋白组学和mRNA组学的方法技术,分析发现敏感细胞与抗性细胞的大部分差异蛋白,都与糖蛋白、胞质结合蛋白、脂蛋白、脂多糖蛋白相关,提示昆虫对Bt抗性的形成可能与膜蛋白有关。     

二化螟高毒力苏云金杆菌菌株的筛选

以高毒力苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)为供试菌株,以二化螟为试虫,初步研究了30个Bt菌株对1~2龄二化螟幼虫的毒力效果,进而以筛选出的5株较高青力Bt菌株进行2~3龄二化螟幼虫青力试验,以筛选出适合黑龙江省二化螟防治的Bt菌株。结果表明:Bt14菌株在饲喂菌液168h后,二化螟的校正死亡率可达90%以上,毒力回归方程为y=0.6121x+0.8789,R2=0.9989,LC50=5.4×106芽孢/mL,致死剂量与其它菌株差异显著,表明该菌株对防治二化螟具有很好的应用前景。     

不同类型蔬菜中矿质元素含量的比较研究

采用火焰原子分光光度法,测定了保定市市售的3种类型共16种蔬菜中的Ca、Cu、Zn、Fe、Mn 5种矿质元素,为指导人们日常饮食提供科学依据.结果表明:不同类型蔬菜中矿质元素含量不同,叶菜类蔬菜中的(Ca、Cu、Zn、Fe、Mn含量高于果菜类蔬菜、根茎类蔬菜;而不同品种的蔬菜其矿质元素的含量也存在很大差异,油菜中的Ca和Mn含量最高,分别为7.6 g/100g和8.98 mg/100g;Zn含量最高的为香麦16.72 mg/100g,其次为菠菜12.63 mg/100g,洋白菜的Zn含量最低仅为0.73 mg/100g;菠菜中Fe含量最高138.43 mg/100g,其次为香麦111.11 mg/100g.综合分析结果,香麦、菠菜、油菜的Ca、Cu、Zn、Fe、Mn含量要高于其它种类的蔬菜.     

鸡腿蘑菌丝体的同工酶研究

用8种不同培养基配方，培养鸡腿蘑菌丝体，其同工酶分析结果表明，鸡腿蘑菌丝体酯酶(EST)同工酶谱差异明显，过氧化物酶(POD)同工酶谱差异明显。     

侧耳属3种食用菌解剖学性状比较

以PDA培养基和棉籽壳为培养料,培养了姬菇、榆黄蘑和鲍鱼菇,并对其解剖结构进行了比较,结果表明,姬菇、榆黄蘑和鲍鱼菇菌丝均具有锁状联合,子实体菌柄都侧生,每个担子顶部产生4个担孢子,孢子内含油滴,孢子印皆为白色。姬菇和鲍鱼菇菌盖颜色为灰黑色,榆黄蘑为黄色,姬菇和榆黄蘑菌丝生长快,姬菇菌丝浓密,榆黄蘑和鲍鱼菇菌丝稀疏,鲍鱼菇菌丝能产生黑色分生孢子。姬菇和榆黄蘑子实体小而多,出菇早、产量高,鲍鱼菇子实体较大内部组织紧密,担子、担孢子梗粗壮,孢子饱满油滴大。     

香菇子实体形态分化过程

采用香菇菌株Cr-02为实验材料。简易开放式生料栽培为栽培方法，观察到了香菇子实体形态发育的全过程。初步将之分为纽结期、褐变期、成型期和成熟期四个时期，确定了子实体形态分化的关键时期是褐变期。     

槭树科植物在昆明地区园林中的应用

槭树科植物树姿优美、叶形秀丽,大多极具观赏价值。我国槭树科植物资源丰富,其中云南是槭树科种类最多的省份,有61种。通过对昆明地区主要公园的绿地调查,表明槭树科植物在昆明绿地中应用品种单一、资源利用不充分。针对存在的问题,对昆明槭树科植物的应用提出野生资源的开发利用与开发保护并重、建立和完善相应的种植养护措施等建议。     

香菇多糖分离纯化技术研究

从不同方面对香菇多糖的分离、纯化条件进行了优化研究。结果表明 :香菇颗粒的粒径为 2 - 3mm ,原料 /水 (W /W) =1:2 0～ 1:2 5时 ,乙醇终浓度在 70 %左右时效果最佳 ,可以得到较多的多糖粗品。BECM法脱蛋白的结果表明 ,杂蛋白的去除率为 99 98%。甲醇分级沉淀后的多糖分为L1,L2 ,L3三个级分 ,分别测其比旋 ,并用酸完全水解L1,L2 ,L3,作纸层析结合苯酚—硫酸法的测定结果表明 ,L1,L2 ,L3的葡聚糖含量分别为6 8 0 9%,79 2 5 %,10 0 %。比较自然干燥法 ,高温烘干法 ,真空低温冷冻干燥法的干燥结果发现 ,自然干燥法耗时太长且干燥不彻底。而高温烘干法则会使多糖严重降解。真空低温冷冻干燥法虽然能耗较多 ,但条件温和 ,应是制备有活性生化制品的有效方法。     

玉米秸秆基质对无土栽培莴苣生长的影响

以美国大速生菜为试材,以腐熟与未腐熟玉米秸秆替代草炭作为莴苣无土栽培基质中的主要材料,研究其对莴苣产量、叶面积、干物质量、光合速率、根系活力、维生素C和硝酸盐含量的影响。结果表明:T3处理(腐熟玉米秸秆∶蛭石=3∶1)基质配方最有利莴苣的生长。     

莲瓣兰原生地萌发胚培养真菌污染控制的优选

以莲瓣兰杂交种子原生地共生萌发突破种皮的胚为试验材料,采用正交试验设计研究次氯酸钠浓度、灭菌时间、灭菌次数及超声波处理时间对莲瓣兰胚培养过程中真菌污染控制及胚培养情况的影响。结果表明:莲瓣兰胚培养过程中以次氯酸钠浓度∶灭菌时间∶灭菌次数∶超声波处理时间(4%∶15 min∶1次∶6 min)的配比胚被真菌污染的污染率最低为16.0%,但是胚成活率较低仅为14.3%,不宜作为莲瓣兰胚培养的灭菌条件;经过正交试验设计优选出莲瓣兰胚培养过程中胚成活率作用大小为次氯酸钠浓度超声波处理时间灭菌时间灭菌次数,以次氯酸钠浓度∶灭菌时间∶灭菌次数∶超声波处理时间(1%∶20 min∶2次∶3 min)的配比胚成活率高达93.3%,同时胚被真菌污染率仅为19.00%,可以作为莲瓣兰(Cymbidium torliseplum)杂交种子原生地共生萌发突破种皮的胚培养灭菌条件,在此条件下胚能够从培养基中吸收营养物质,经过培养胚生长发育成根状茎。     

Promalin和高效抽枝宝影响甜樱桃成枝力试验

以意大利早红、红灯、拉宾斯、乌克兰早大果、奇好、胜利六个樱桃品种为试材，刻芽后，分别对其进行涂抹Promalin和高效抽枝宝处理，研究这两种植物生长调节剂对甜樱桃成枝力的影响。结果表明，Promalin对红灯、意大利早红、乌克兰早大果、奇好樱桃成枝力的促进效果好于高效抽枝宝，说明植物生长调节剂的复配使用有增效作用。但在拉宾斯和胜利樱桃上，高效抽枝宝的效果要好于Promalin。     

唐菖蒲花序发育特性的研究

唐菖蒲６个切花品种花序生长发育与叶数的增加呈特定的关系,在２～３叶期花序分化开始后,首先是小花数迅速增加,至５叶期停止增加,而花茎开始迅速伸长生长,单个小花生长发育加快,同时已分化的小花从花序顶端开始发生不同程度的败育,导致切花的每穗花数降低。