金银花复方制剂对人工感染NDV雏鸡免疫器官T淋巴细胞及其亚群以及B淋巴细胞的影响

为了研究金银花复方制剂对人工感染NDV雏鸡免疫器官T淋巴细胞及其亚群以及B淋巴细胞的影响,本试验以21日龄雏鸡为研究对象,随机分成感染组、中药治疗组、空白组。中药治疗组饮水给予复方金银花制剂。应用流式细胞仪检测技术,细胞培养技术研究了金银花复方制剂对人工感染NDV雏鸡免疫器官(胸腺、脾脏、腔上囊)T淋巴细胞及其亚群以及B淋巴细胞的影响,旨在揭示金银花复方制剂对人工感染NDV雏鸡免疫器官细胞免疫和体液免疫功能的影响及其机理。研究结果发现,金银花复方制剂能够提高人工感染NDV雏鸡免疫器官胸腺及脾脏CD3~+、CD4~+T淋巴细胞百分率,使CD4~+/CD8~+T淋巴细胞值升高,提高免疫器官脾脏及腔上囊B淋巴细胞百分率,表明金银花复方制剂能够提高雏鸡的免疫功能。     

金银花复方制剂对新城疫病毒感染雏鸡免疫器官抗体生成细胞数量的影响

为探讨金银花复方制剂对新城疫病毒(NDV)感染雏鸡免疫器官抗体生成细胞数量的影响,本实验采用免疫酶组织化学法对NDV感染雏鸡免疫器官抗体生成细胞数量进行检测。结果显示,在NDV感染初期,NDV感染组雏鸡免疫器官抗体生成细胞数量与对照组雏鸡相比明显降低,表明NDV感染抑制了雏鸡的免疫功能;金银花复方制剂治疗组雏鸡免疫器官抗体生成细胞数量明显高于NDV感染组雏鸡,并且从第7天开始抗体生成细胞数量迅速恢复到对照组雏鸡的水平,表明金银花复方制剂提高了雏鸡的免疫功能。     

金银花复方制剂对新城疫病毒感染雏鸡免疫器官淋巴细胞增殖功能的影响

为探索金银花复方制剂对新城疫病毒(NDV)感染雏鸡免疫功能的影响,应用细胞培养技术及MTT法,对感染NDV雏鸡、金银花复方制剂治疗雏鸡的胸腺和脾脏T细胞,法氏囊和脾脏B细胞增殖功能进行检测。结果发现,在NDV感染初期,NDV感染组雏鸡免疫器官T、B细胞增殖功能与对照组雏鸡相比明显降低,后期有所恢复,表明NDV感染使雏鸡免疫器官淋巴细胞数量减少,抑制了雏鸡的免疫功能;金银花复方制剂治疗组雏鸡免疫器官T、B细胞增殖功能从病毒感染后第3天起不同程度地高于NDV感染组雏鸡,并且后期接近对照组雏鸡水平,表明金银花复方制剂能通过刺激雏鸡免疫器官淋巴细胞的增殖,增强机体的免疫功能。     

鸡体内鹅源新城疫病毒抗原的免疫组织化学检测

为研究鹅新城疫（ND）的发病机理,用3株鹅新城疫病毒强毒株分别人工感染25日龄雏鸡,以单克隆抗体介导的免疫组化（IHC）法检测攻毒鸡体内NDV抗原的分布及定位,研究了鹅新城疫病毒（NDV）对鸡的组织嗜性。结果显示。在试验鸡多种组织器官中均能检测到NDV抗原,病毒抗原主要定位于淋巴细胞、网状细胞、巨噬细胞、肝细胞及各种上皮细胞的胞浆内。结果表明,鹅NDV强毒株对鸡是一种泛嗜性病毒。     

中药复方在鸡胚水平上抗鸡新城疫病毒的作用研究

本试验以中药百花蛇舌草、金银花等清热解毒药为主药,辅以黄芪、甘草等补气药组成中药复方,以水萃取浓缩制备中药复方流浸膏。以鸡新城疫病毒（NDV）为模式病毒,在鸡胚水平上以鸡胚平均死亡时间（MDT）和鸡胚尿囊液血凝价作为检测指标。结果表明,中药复方流浸膏与NDV感作和不感作均对NDV有明显的抑制作用,延长鸡胚死亡时间,降低血凝价,为临床用药提供了试验依据。     

中药复方提取物的抗病毒效果试验

近期,郑州周边部分肉鸡养殖户遭遇鸡传染性法氏囊炎与非典型新城疫混合感染,25～35日龄突然发病,主要症状为食欲减退,缩颈嗜眠,重症者出现扭头、伏地、软腿等神经症状,排乳白、黄、绿色稀粪,发病率达60%,死亡率达15%。结合剖检病理变化特点、实验室病毒学、细菌学和血清学检测,确诊为传染性法氏囊病和非典型新城疫感染。采用中药复方提取物治疗取得良好效果。中药复方提取物中药制剂,具有清热解毒、行气化血、宣肺祛痰、补脾益气、生津止渴等功效,本试验观察了中药复方提取物对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)和非典型新城疫病毒(NDV)的抑制作用,证明中药复方提取物具有明显的抗病毒效果。     

金银花复方制剂对新城疫病毒感染雏鸡外周血液免疫学变化的影响

为研究金银花复方制剂对新城疫病毒(NDV)感染雏鸡外周血液免疫学变化的影响,采用免疫荧光试验、流式细胞术、间接ELISA法和放射免疫法对NDV感染雏鸡、金银花复方制剂治疗雏鸡的外周血液淋巴细胞数量、免疫球蛋白及细胞因子含量进行检测。结果显示,雏鸡感染NDV后,其外周血液CD4+、CD8+T淋巴细胞和B淋巴细胞数量及IgG、IgM、白细胞介素(IL-2)含量均较未感染雏鸡明显降低,γ-干扰素(IFN-γ)含量较未感染雏鸡明显升高,提示NDV感染能够引起雏鸡外周血液免疫功能紊乱;金银花复方制剂能够显著提高感染雏鸡外周血液CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞数量及IgG、IgM、IL-2含量,降低IFN-γ含量,表明该复方制剂能够改善NDV感染雏鸡外周血液的免疫功能。     

应用间接免疫酶组化法诊断鹌鹑新城疫

新城疫(ND)是极易传染的毁灭性传染病,最常侵害鸡和其他禽类,有关鸡新城疫的诊断方法很多,但鹌鹑新城疫的发病特点与鸡新城疫有些差异,有关应用间接免疫组化法诊断鹌鹑新城疫未见报道。我们采用间接免疫组化法检测NDV抗原在人工感染、自然感染病例的患鹑体内的分布特点,以期为诊断鹌鹑新城疫提供依据。 1 材料与方法 1.1 NDV种毒 A株NDV,由我院微生物教研室从病死鹌鹑分离并确证为NDV;F_(48)E_8株NDV由中监所引进。以上两毒株用前经鸡胚传代,分离病毒于     

中草药在鸡胚成纤维细胞(CEF)上对新城疫病毒的作用研究

分离并培养鸡胚成纤维细胞(CEF),并感染新城疫病毒(NDV),通过观察细胞病变,检测在CEF上,复方中草药对NDV的影响。结果表明,中草药对新城疫病毒的中和、预防、治疗作用的最小抗病毒浓度分别是0.061mg/ml、0.244mg/ml、0.976mg/ml。     

鸡源AID基因的克隆及其抗新城疫病毒作用

APOBEC家族成员中AID蛋白具有DNA/RNA编辑酶功能,同时具有抑制病毒增殖的作用,但具体机制尚不明了。本研究首先根据NCBI公布的鸡全基因组序列进行生物信息学分析,预测鸡AID的基因序列并通过设计PCR引物,成功在鸡法氏囊cDNA样品中扩增出鸡AID基因(chAID)。通过建立并优化chAID的实时定量RT-PCR(rRT-PCR)检测方法,对鸡体内AID基因的表达以及其分布情况进行检测;同时通过Western blot试验对chAID蛋白在鸡细胞中的表达进行检测。试验显示,chAID基因能够在鸡细胞以及组织脏器中正常表达。新城疫病毒(NDV)感染鸡原代成纤维细胞、淋巴细胞后能够引起内源性chAID基因水平的上调;SPF鸡感染NDV后,chAID基因在不同组织脏器中均出现上调现象,以免疫器官最为显著。为了进一步验证chAID基因对NDV增殖的影响,进一步检测在细胞中过表达chAID基因对NDV增殖的影响。研究结果表明:重组chAID蛋白具有抗NDV病毒活性,本研究为进一步研究鸡chAID奠定了基础。     

金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明金银花抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药3种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在3种不同的加药方式中,不同浓度的金银花提取液均能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价,其作用效果与提取液浓度呈正比例相关。结果表明,金银花提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

中药制剂对禽流感病毒H9N2、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和鸡毒支原体的攻毒保护试验

采用以野菊花、穿心莲、柴胡等10味中药提取的中药制剂,连续给22日龄SPF鸡口服5 d后,以禽流感病毒H9N2、新城疫病毒F4、传染性支气管炎病毒强毒株M41和支原体S6强毒分别攻击,观察SPF鸡临床症状、发病率、病理学变化和分离病毒。结果表明,此中药制剂75 mg/只口服组,新城疫病毒、禽流感病毒和传染性支气管炎病毒攻击后发病率分别为12.5%,0%,10%;37.5 mg/只剂量口服组发病率分别为50%,10%,10%,且低剂量组病毒分离阳性。攻击支原体后,以上两个剂量组SPF鸡病变指数分别3.5和5.5,研究证实本中药制剂可以控制以上4种病原所致的家禽呼吸道病的发生。     

鸡瘟毒清对鸡新城疫病毒的抑制作用

采用中药制剂鸡瘟毒清(由金银花、黄芩、黄芪、黄连、丹皮等10余味中草药组成)对鸡新城疫病毒进行体内和体外抑制实验。体内抑毒实验选用21日龄艾拔益加肉鸡,随机分为5组,每组32只,直接攻毒,攻毒前7 d开始给药,直至35 d,测定治愈率;体外抑毒实验选用11日龄SPF鸡胚,随机分为3组,每组12枚,攻毒给药后感作30 min,继续孵化,测定保护率。结果显示,中药制剂鸡瘟毒清对鸡新城疫病毒有较好的抑制作用,其中体内抑毒实验高剂量组治愈率高达91%,体外抑毒实验保护率达66.7%。     

金银花在肉鸡饲料中的应用效果研究

采用对比试验,将60只7日龄哈巴特肉鸡随机分为2组（对照组和试验组）,每组10个重复,每个重复3只,饲养在不锈铜笼中。对照组和试验组分别饲基础喂日粮、添加0．3％金银花基础日粮,结果表明,试验期间试验组与对照组鸡的日采食量、日增重、饲料转化率、周末体重差异不显著（P〉0．05）。添加0．3％金银花在7—21日龄与21-42日龄时,肉鸡的日增重分别比对照组提高3．98％和1．33％;胸腺、法氏囊、脾脏脏器指数分别比对照组提高6．94％、4．93％、2．86％,差异不显著（P〉0．05）.     

The screening and evaluation of herbs and identification of herbal combinations with anti-viral effects on Newcastle disease virus

1. A total of 25 “heat-clearing and detoxifying” herbs used in Chinese medicine were investigated for their cytopathic effects on the growth of Newcastle Disease virus (NDV) in a chicken fibroblast cell line.

2. The 5 herbs with the highest virus inhibitory effects were Herba agastaches, Flos chrysanthemi indici, Rhizoma anemarrhenae, Astragalus root and Baikal skullcap root and these were used in herbal formulations. Anti-NDV activities of 4 formulations were tested on the growth of NDV in the DF-1 fibroblast cell line.

3. Formulation II, containing Baikal skullcap root, Astragalus root, Anemarrhena rhizome (1:1:2) and formulation IV containing Anemarrhena rhizome, Astragalus root and Flos chrysanthemi indici (1:1:1), which had strong anti-NDV activity in vitro, were used to determine the in vivo inhibitory effects of NDV-infection in chickens. After treatment with the two formulations serum IgY titres against NDV were improved, and morbidity was reduced in the NDV-infected chickens.

4. The results suggest that the components in formulations II and IV acted synergistically to improve resistance to Newcastle disease and provide a basis for the developing an anti-NDV herbal medicine.

     

复方中草药饲料添加剂对黄羽肉鸡免疫性能的影响

以1日龄商品代苏禽黄鸡为试验素材,随机分成3个处理组,每组50只。组1为添加抗生素组,组2为添加自配复方中草药组,组3为对照组。试验结果表明：添加复方中草药有提高胸腺、脾脏、法氏囊重量及其指数的趋势,其中第3周末,中草药组的脾脏重量及其指数显著高于抗生素组和对照组;试验组在免疫新城疫疫苗7 d后,血清中的抗体效价均显著高于对照组,这种差异中草药组一直持续到本次试验免疫后的第21 d。     

康泰宁对雏鸡免疫性能及抗氧化能力的影响

为了研究中药康泰宁制剂对雏鸡免疫功能及抗氧化能力的影响,试验将120羽京白雏鸡随机分为4组,分别为康泰宁高(1.2%)、中(0.8%)、低(0.4%)中药剂量组和对照组。在28,49日龄时,每组随机抽取6羽雏鸡剖杀,摘取胸腺、法氏囊和脾脏称重计算免疫器官指数,测定血清中新城疫(ND)抗体效价,并对血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量进行测定。结果表明:康泰宁能显著提高雏鸡免疫器官指数。其中、高剂量组雏鸡新城疫抗体效价显著高于对照组;高剂量组SOD和CAT活性显著高于对照组,MDA含量显著降低。说明中药康泰宁可增强雏鸡免疫功能,并有效提高雏鸡抗氧化能力。     

中药口服液防治鸡新城疫临床效果试验

将筛选出具有抗病毒作用的黄芪、黄芩、板蓝根等中药制成口服液,用于鸡新城疫防治试验。结果表明,中药口服液防治鸡新城疫具有较好疗效,中药治疗组鸡死亡率极显著低于对照组,且以中药口服液疗效最佳。同时,中药治疗组可提高蛋鸡生产性能。     

Vitamin A deficiency impairs cytotoxic T lymphocyte activity in Newcastle disease virus-infected chickens

The effect of vitamin A deficiency on cytotoxic T lymphocyte (CTL) activity was investigated during the acute phase of disease 7 days after primary inoculation and 1 day after secondary inoculation in chickens with or without Newcastle disease virus (NDV, La Sota strain) infection. Day-old chickens with limited vitamin A reserves were fed purified diets containing either marginal (ad libitum) or adequate (pair-fed) levels of vitamin A, and at 3 weeks of age half of the chickens in each group were infected with NDV. Cytotoxic activity was investigated during the acute phase of disease (7 days after primary inoculation) and 1 day after secondary inoculation, in an assay system with either peripheral blood lymphocytes (PBL) or nonadherent splenocytes as effector cells and adherent splenocytes from the same animal as target cells. After primary inoculation, cytotoxic activity could only be demonstrated in nonadherent splenocytes. Vitamin A deficiency resulted in significantly reduced CTL activity at all effector/target cell ratios tested. After reinfection CTL activity could also be demonstrated in PBL, but only from chickens fed the control diet, suggesting a diminished pool of CTL in vitamin A deficiency. The results of this study indicate that vitamin A deficiency impairs CTL activity - a part of the cell-mediated defense system - and this may have important implications for recovery from viral infection.     

Effect of vitamin A deficiency on the activity of macrophages in Newcastle disease virus-infected chickens

The effect of vitamin A deficiency on the activity of peritoneal macrophages (PM) was investigated in noninfected and Newcastle disease virus (NDV)-infected chickens. Day-old chickens with limited vitamin A reserves were fed diets containing either marginal (120 retinol equivalents (RE)/kg) or adequate (1200 RE/kg) levels of vitamin A. At 4 weeks of age, half of the chickens in each group were infected with the La Sota strain of NDV and PM were isolated 11 or 12 days later. These were used for counting the uptake of fluorescein isothiocyanate-labeled yeast cells as an indicator of phagocytic activity and for measuring the reduction of nitroblue tetrazolium (NBT), which provides an estimate of oxygen-dependent killing of microorganisms. Vitamin A deficiency impaired NBT reduction and, to a lesser extent, phagocytosis in both infected and noninfected chickens. NDV infection increased phagocytosis and NBT reduction in normal and, to a lesser extent, in vitamin A-deficient chickens.