南极冰藻Pyramidomonas sp．和Chlorophyceae L-4的优化培养

设计温度、光强、盐度、pH值、营养盐等培养条件,测定其对南极冰藻中2种绿藻Pyramidomanassp.和Chloro phyceaeL-4生长的影响。研究结果表明,f/2培养基为适合这2种南极绿藻生长的适宜培养基。Pyramidomonassp.最适生长温度为2～6℃,pH为9.0;ChlorophyceaeL-4的最适生长温度为-3～6℃,pH为8.0～8.5。2种南极绿藻生长最适光强为7.0～60.0μE·m-2·s-1,最适盐度为22～33。选择NaNO3为培养基中的氮源,适合Pyramidomonassp.的浓度为0.88mmol·L-1。氮源浓度在0.56～1.47mmol·L-1,对ChlorophyceaeL-4生长影响不明显。适宜2种南极绿藻生长的磷酸盐浓度为0.13mmol·L-1。     

卤虫无节幼体谷胱甘肽转硫酶部分活性及性质

采用紫外分光光度法测定了卤虫无节幼体谷胱甘肽转硫酶(GST)的活性,并研究温度、pH对GST活力的影响及酶的冷、热稳定性。试验结果表明,卤虫无节幼体内存在GST,酶的最适温度为45℃,最适pH为7.0,该酶高温下不稳定,60℃时酶基本失活。低温下较稳定,4℃保存12 h,活力下降50%;-20℃保存12 h,活力下降20%。     

罗非鱼鳃组织中脂肪氧合酶的性质研究

试验结果表明脂肪氧合酶最适反应温度为30℃,最适pH为10.0和4.0。在pH10.0的条件下,最适底物浓度为2.5×10-4mol/L,Km值为0.073mmol/L,Vmax值为3.08×104U/mgprotein.min。EDTA对该酶有较强的抑制作用。而在pH4.0的条件下,最适底物浓度为5×10-4mol/L,BHA、BHT、TBHQ等抗氧化剂有较强的抑制作用。     

翼茧形藻的培养条件

在实验室条件下通过单因子和正交试验,研究了温度、光照、盐度、pH值和氮、磷、铁、硅等营养盐对翼茧形藻(Amphiprora alata)生长繁殖的影响。结果表明:翼茧形藻生长的适宜温度为10～38℃,最适温度为30℃;适宜光照为500～10 000 lx,最适光照为5 000～10 000 lx;适宜盐度为2～80,最适盐度为60;适宜pH值为4～9,最适pH为7.5。经方差实验,在天然海水中添加10 mg.L-1NaNO3-N、2 mg.L-1NaH2PO4-P、0.2mg.L-1FeC6H5O7-Fe、40 mg.L-1Na2SiO3-Si,培养效果最佳。     

南极磷虾粗酶液中蛋白酶的基础酶学性质研究及抑制剂的开发

本研究探讨了反应温度、pH、金属离子(Zn~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Al~(3+)和Ca~(2+))对南极磷虾粗酶液中蛋白酶活性的影响,研究了苯甲基磺酰氟(PMSF)、EDTA·2Na、碘乙酰胺(IAM)和甲苯磺酰–苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)对蛋白酶活性的抑制效果。结果显示,南极磷虾粗酶液中蛋白酶的最适反应温度为40℃;最适反应pH值为8.0;当金属离子浓度为0.5 mmol/L时,Zn~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)和Al~(3+)金属离子对蛋白酶酶活的抑制率分别为55.02%、55.02%、35.39%、20.67%和41.12%,而Ca~(2+)离子对蛋白酶活有明显的促进作用;PMSF和EDTA·2Na对蛋白酶酶活具有较为显著的抑制作用,PMSF的浓度为8.0 mmol/L时,抑制率为60%;EDTA·2Na浓度为0.6 mmol/L时,抑制率为86.67%;IAM在低浓度时有一定的抑制作用;TPCK低浓度时抑制效果不明显,浓度升高时有一定的抑制作用。在5~30℃的温度范围内,随着温度升高,EDTA·2Na对蛋白酶酶活的抑制效果逐渐增加。本研究阐明了影响南极磷虾粗酶液蛋白酶酶活的因素,开发了针对南极磷虾粗酶液中蛋白酶活性的抑制剂,为南极磷虾在食品领域的开发利用提供了基础理论数据。     

鳙中焦磷酸盐水解酶的初步研究

本文采用离子色谱方法检测添加的焦磷酸四钠（TSPP）在新鲜碎鳙鱼肉中所发生的水解过程,并研究了焦磷酸盐水解酶（PPase）粗酶的特性。研究结果表明,添加到新鲜碎鳙鱼肉中的TSPP能被水解为单磷酸（Pi）;鳙鱼鱼肉中存在PPase,并且是水溶性蛋白。PPase粗酶水解TSPP的最适温度为50 ℃,最适pH为8.0。Mg2+、Mn2+和Co2+均可以激活PPase,但是Mg2+激活酶能力最强。Mg2+浓度为1mol•L-1时,PPase活性达到了0.023μmol•min-1•mg-1,显著高于其他两种金属离子的激活作用。葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）能够强烈抑制PPase活性;EDTA-Na2在浓度小于1 mol•L-1能激活酶,但浓度大于1 mol•L-1时却能够强烈抑制PPase活性。     

壳聚糖固定化海洋微生物YS2071脂肪酶及其酶学性质

采用壳聚糖为载体,优化了海洋微生物YS2071脂肪酶的壳聚糖固定化条件。结果显示,在壳聚糖浓度为2% (m/v)、氢氧化钠浓度为12% (m/v)、乙酸浓度为1% (v/v)、戊二醛浓度为0.25% (v/v)、与戊二醛交联的时间为12 h及添加2 ml (1120 U)的游离脂肪酶时,固定化脂肪酶的活力最高,其活力回收率达到69.4%。对游离脂肪酶与固定化脂肪酶的酶学性质进行比较,结果显示,游离脂肪酶的最适反应温度为40℃,而固定化脂肪酶的最适反应温度为45℃,固定化脂肪酶的温度稳定性明显优于游离脂肪酶。最适反应pH均为8.0,脂肪酶经过固定化之后,酸碱耐受性增大。重复利用10次的固定化脂肪酶的酶活力保留率仍高于65%。固定化脂肪酶贮藏半衰期为96 d,而游离脂肪酶的贮藏半衰期是33 d。固定化脂肪酶与游离脂肪酶的酶活力保留率在不同有机试剂中表现出不同的稳定性。     

对虾血细胞中一氧化氮合成酶鉴定与分析方法研究

通过硝基蓝四唑(NBT)还原法和血细胞形态法两种一氧化氮合成酶的鉴定方法,以日本对虾(Penaeus japonicus)作为研究对象,对日本对虾血细胞中的一氧化氮合成酶进行初步鉴定,并优化硝基蓝四唑(NBT)还原法测定对虾血细胞中一氧化氮合成酶的实验条件.结果显示,当L-精氨酸浓度为2.5 mmol/L,脂多糖(LPS)质量浓度为100 μg/mL,Ca2 浓度为2.5 mmol/L时,NBT法测定一氧化氮合成酶活力的结果最佳.同时,还建立了两种针对一氧化氮合成酶活力的分析方法-L-瓜氨酸分析法和亚硝酸盐分析法,并对其测定条件进行了优化.结果表明,对虾血细胞在4 ℃下与L-精氨酸和LPS孵育8 h后测定的结果最为理想.利用这4种方法能够有效地鉴定和分析对虾血细胞中的一氧化氮合成酶,这为深入了解一氧化氮合成酶在对虾先天性免疫中的地位及其在对虾抗病力中的作用提供了理论依据.     

翘嘴红鲌胃、肠道及肝胰脏主要消化酶活力的研究

对翘嘴红鲌胃肠道及肝胰脏的淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶3种主要消化酶活力进行初步研究。结果表明:胃、肠道、肝胰脏的淀粉酶的最适pH均为6.0;脂肪酶的最适pH分别为8.0、8.0、7.5;胃蛋白酶最适pH为2.0,肠道、肝胰脏蛋白酶的最适pH分别为7.0、7.5。同时研究了在最适pH条件下,不同反应温度对3种主要消化酶的活性影响。结果表明:翘嘴红鲌淀粉酶在肝胰脏、肠道、胃的最适温度分别为30℃,30℃,25℃;脂肪酶的最适温度分别为40℃,30℃,35℃;蛋白酶的最适温度分别为50℃,50℃,40℃。在一定的温度范围内,3种消化酶的活力均呈先上升后下降趋势。最适反应温度下翘嘴红鲌脂肪酶与淀粉酶的活力分布均呈现肝胰脏>肠道>胃,蛋白酶活力肠道与胃接近,大于肝胰脏蛋白酶活力。     

几种盐碱因子对青蛤的致毒效应

盐碱水具有缓冲性能差、主要离子比例不稳定、碳酸盐碱度(Carbonate Alkalinity,CA)和pH高等特点。青蛤(Cyclina sinensis)生长快、抗逆性强、耐盐范围广,是一种在盐碱水中颇具养殖前景的品种。寄予为今后在盐碱水中开展青蛤养殖提供数据的目的,本文应用静态急性毒性实验的方法,研究了96 h内水体中不同K+、Ca2+、Mg2+浓度及CA和pH对青蛤死亡率的影响。结果显示:当K+浓度低于11.3 mg.L-1(对照水平的1/22)和高于838.7 mg.L-1(对照水平的3.34倍)时,青蛤的死亡率均超过了90%;其半致死浓度(LC50)分别为40.8 mg.L-1和541.2 mg.L-1。当Ca2+浓度为4.5 mg.L-1(对照水平的1/64)和4 600 mg.L-1(对照水平的16倍)时,其死亡率均为34%左右。当Mg2+浓度为0和3078 mg.L-1(对照水平的3.38倍)时,其死亡率均仅为8.5%左右。CA方面,其值低于40 mmol.L-1时,青蛤的死亡率不超过5%,其值为80 mmol.L-1时,青蛤的死亡率也仅为20%。而pH方面,其值超过9.5时,青蛤开始急剧死亡。研究认为:影响青蛤存活的主要限制因子为K+和pH。此外,青蛤对CA的耐受性较强,表明其确实具有在盐碱水中开展养殖的前景。     

甲氰菊酯对尼罗罗非鱼组织乙酰胆碱酯酶、谷丙转氨酶和谷胱甘肽活性的影响

用急性染毒法研究6种浓度(0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5 μg/L)的甲氰菊酯对(34.89±9.99)g的尼罗罗非鱼(Tilapia nilotica)分别处理6、12、24、48、96 h后,其组织内乙酰胆碱酯酶(AChE)、谷丙转氨酶(GPT)和谷胱甘肽( GSH)的动态变化.结果显示:AChE活性在...     

The dietary effects of a fermented vegetable product on glutathione peroxidase activity and lipid peroxidation of Japanese flounder Paralichthys olivaceus

ABSTRACT:   To study the dietary effects of fermented vegetable product (FVP) on the protection against lipid peroxidation of various tissues in Japanese flounder, Paralichthys olivaceus . The fish were fed on experimental diets with or without FVP for 4 weeks. The glutathione concentrations in serum or liver had a tendency to increase on FVP-feeding fish. The FVP-feeding fish showed higher glutathione peroxidase (GPx) activity of liver than the control fish, and the GPx activity was increased by the administration of 6 mg/kg body weight/day FVP ( P  < 0.05). Conversely, fish fed on FVP containing diets exhibited significantly ( P  < 0.05) lower lipid peroxidants of serum and liver than the control fish. The FVP is suggested to suppress lipid peroxidation in the administrated fish, which led to enhancement of antioxidant effect against cultured fish.     

BDE3胁迫对翡翠贻贝（Perna viridis）SOD、MDA和GSH的影响

采用半静态试验方法,研究不同质量浓度的一溴联苯醚（BDE3）（1 μg·L-1、10 μg·L-1和100 μg·L-1）胁迫1 d、3 d、7d和15 d且清洁海水释放3 d和7 d后,翡翠贻贝（Perna viridis）外套膜和内脏团超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）质量摩尔浓度和谷胱甘肽（GSH）质量分数的变化规律。结果表明,BDE3胁迫后低浓度组翡翠贻贝两组织SOD活性均受到诱导（P〈0.01）,诱导率随胁迫时间延长而下降,中、高浓度组外套膜对BDE3响应比内脏团灵敏;BDE3对翡翠贻贝外套膜b（MDA）的影响总体呈诱导后抑制趋势,对内脏团b（MDA）的影响表现抑制-诱导反复变化,其中低浓度组第3天时诱导率最高（26.04%）,高浓度组第7天时抑制率最高（14.92%）;翡翠贻贝外套膜w（GSH）在（BDE3）迫下,低浓度组一直被诱导（P〈0.01）,中、高浓度组总体呈诱导后抑制作用,内脏团中高浓度组w（GSH）胁迫第1天受到显著抑制（P〈0.05）,随暴露时间的延长,低浓度组w（GSH）显著增加（P〈0.01）,中、高浓度组出现诱导抑制的不规律变化。释放阶段结束后仅个别浓度组恢复至对照组水平。     

Role of exogenous glutathione in teleost fish and its effects on antioxidant defense responses in rainbow trout exposed to 3,3',4,4'-tetrachlorobiphenyl

Intraperitoneal injection of glutathione (GSH) is shown to effectively increase tissue glutathione content in two teleost species, the rainbow trout and the American eel. GSH uptake into teleost tissues is a distinct piscine feature of GSH biochemistry compared with mammalian species where little or not uptake occurs of exogenously added GSH. Enhancement and depletion of tissue GSH status was used as a tool to examine the effects of altered GSH content on other cellular antioxidants in 3,3,4,4-tetrachlorobiphenyl (TCB) exposed rainbow trout. -Tocopherol content was unchanged and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), an indicator of lipid peroxidation, changed little in liver and muscle of trout exposed to TCB and the various GSH treatments. However, -tocopherol levels in muscle and superoxide dismutase activities in the various tissues were significantly higher in controls and TCB-saline treated fish than in GSH deficient and lipoate supplemented TCB exposed trout. GSH status thus appears to affect some cellular antioxidant defenses in TCB exposed trout.     

Glutathione and its Related Enzymes in the Nile Fish

Glutathione (GSH) and related enzymes, glutathione transferase (GST), glutathione peroxidase (GPx) and glutathione reductase (GR) form an important phase 2 biotransformation enzymes system. The objective of this study was to compare this enzymes system in three fish species from the river Nile, Oreochromis niloticus, Claris lazera and Cyprinus carpio in order to establish the main differences and to purify and characterize GST from the liver of O. niloticus.The level of GSH and the activity of GST, GPx and GR in the liver, kidney and gills of the three fish species were examined. A simple reproducible procedure for the purification of GST from the liver of O. niloticus to homogeneity, which includes chromatography on DEAE- cellulose followed by affinity chromatography on GSH-sepharose was established. The molecular mass was found to be 25,460 Da by SDS-PAGE. The Michaelis-Meneten constants (K_m) of the enzyme for GSH and CDNB were 0.35 mM and 0.42 mM, respectively. The affinity purified enzyme exhibited maximum pH at pH 8.0 and increasing pH above 8.0 did not affect the observed maximum. The purified enzyme acts readily on CDNB, less readily on some standard transferase substrates (1,2-dichloro-4-nitrobenzene and p-nitrophenethyl bromide) and not at all on others (bromosulphophthalein and p-nitrobenzyl chloride). Bromosulfophthalein, cibacron blue and hematin inhibited CDNB-conjugating activity of the purified enzyme with IC₅₀ 0.079, 3.98 and 0.126 μM, respectively.     

Antibrowning of the Adductor Muscles of Bay Scallop by Glutathione During Hot Air Drying

ABSTRACT

Browning in the adductor muscle of bay scallop (Argopecten irradians) tends to occur during hot air drying due to polyphenoloxidase (PPO) and Maillard reaction and decreases the sensory quality and commercial value of bay scallop adductor muscles (BSAM). In the present study, the effects of glutathione on the browning inhibition of BSAM were evaluated. The PPO activity in BSAM was inhibited by 97.8 with 0.08% glutathione. The browning of BSAM pretreated with glutathione was evaluated during hot air drying. Compared with the control, BSAM pretreated with glutathione resulted in less drying time and browning during hot air drying. The results indicate that pretreatment with glutathione may be a promising method of BSAM browning inhibition during hot air drying.     

玻璃化冻存对斑马鱼卵母细胞的影响

采用比色法测定了在不同玻璃化冻存液中冻存1、2、4、8d时斑马鱼卵母细胞中谷胱甘肽含量和三磷酸腺苷酶的活性,以研究玻璃化冻存对卵母细胞谷胱甘肽含量和线粒体三磷酸腺苷酶活性的影响。试验结果显示,V4组斑马鱼(玻璃化液组分是:1.5mol/L甲醇、6.0mol/L乙二醇、0.25mol/L蔗糖)卵母细胞冻存1、2、4、8d后存活率最高[分别为(48.89±2.58)%、(39.35±1.34)%、(24.18±2.32)%和(14.56±1.64)%],显著高于其他组。经玻璃化冻存后,斑马鱼卵母细胞谷胱甘肽含量和线粒体三磷酸腺苷酶活性均随冻存天数的增加而显著下降(P0.05)。V4组的谷胱甘肽含量[(13.37±0.59)mg/g]和线粒体三磷酸腺苷酶活性较高,线粒体Ca~(2+)-三磷酸腺苷酶[(3.823±0.144)U/mg]、Mg~(2+)-三磷酸腺苷酶[(4.503±0.144)U/mg]和Na~+/K~+-三磷酸腺苷酶[(7.520±0.198)U/mg]活性最高。各组细胞的活性随着冻存天数的增加而逐渐下降。试验结果表明,玻璃化冻存不能完全避免低温和冷冻保护剂的毒性和对卵母细胞的损伤。     

氨氮对黄河鲤肝组织中谷胱甘肽代谢的影响

以黄河鲤幼鱼为研究对象,研究氨氮胁迫对肝组织中谷胱甘肽代谢的影响。研究结果表明:氨氮胁迫诱导黄河鲤幼鱼肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量升高,谷胱甘肽还原酶(GR)活性提高,有效将GSSG还原为GSH,表明谷胱甘肽代谢与黄河鲤对氨氮胁迫的耐受性密切相关。     

罗非鱼谷胱甘肽过氧化物酶1基因的克隆与分析

采用cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技术,克隆了罗非鱼（Oreochromis niloticus）谷胱甘肽过氧化物酶1（glutathione pemxidasel,GPx1）基因完整的编码序列（complete coding sequence,CDS）。GPx1基因全长984bp,5’uTR56bp,CDS576bp,3’UTR352bp,PolyA20bp;第791—885位碱基（位于3’UTR）形成1个硒半胱氨酸插入序列（selenocysteine insertion sequence,SECIS）,协助174～176位密码子TGA（UGA）编码1个硒半胱氨酸（Sec）。GPx1包含191个氨基酸,分子量21．8kDa,等电点8．04,无信号肽和潜在的N．糖基化位点。蛋白结构分析表明该基因编码蛋白为非跨膜蛋白。序列比对显示,GPx1单体具有Sec、Trp、Gln和Asn构成的催化四联体。罗非鱼GPx1与其他脊椎动物GPx1相比较,核苷酸序列相似性为43．2％-58．2％,氨基酸序列相似性为58．1％～80．6％。进化分析显示,处在分类学上不同纲的脊椎动物GPx1分别占据了不同分支。利用Swiss-Model预测了罗非鱼GPx1的3D结构,序列分析显示,GPx1可以形成1个同源四聚体。