黄瓜高频再生体系的建立

【目的】建立黄瓜的高频再生体系,为黄瓜种质的遗传转化奠定基础。【方法】分别以华北型黄瓜种质26号、欧洲型黄瓜种质14-1为材料,研究不同激素组合、AgNO3质量浓度、苗龄、子叶切割方式及外植体接种方式对黄瓜子叶节不定芽诱导的影响。【结果】华北型黄瓜种质26号再生的最适激素组合为4.0mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达85.00%和2.51;欧洲型黄瓜种质14-1再生的最适激素组合为3.0mg/L 6-BA+2.0mg/L ABA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达86.70%和2.77;5d苗龄的黄瓜子叶作为外植体时诱导不定芽的状态最佳;切除子叶端部2/3且基部附带有1mm子叶柄、以叶背向下子叶柄微插入的方式进行接种再生效率最高。【结论】建立了黄瓜种质14-1和26号材料的高频再生体系,再生率均可达85%以上。     

2种基因型大白菜高效子叶离体不定芽再生研究

以2个优质大白菜材料德高早熟长江5号(DG)和双耐(SN)的子叶为外植体,研究了不同激素配比、苗龄和AgNO3浓度对子叶不定芽再生的影响,建立了2种大白菜的子叶不定芽高效再生体系,为进一步有效的利用基因工程技术改良大白菜品种奠定了基础.结果表明:与6-BA相比,TDZ对诱导子叶不定芽再生更有效.在单独附加细胞分裂素(6-BA或TDZ)的MS培养基上,不能诱导子叶不定芽的分化.DG在MS+ 1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/LNAA+6 mg/L AgNO3分化培养基上再生频率最高,为73.80％,最适苗龄为6d,平均再生系数为4.27.SN在MS+1 mg/L TDZ +0.4 mg/L NAA+6 mg/L AgNO3分化培养基上再生频率最高,为59.09％,最适苗龄为6d,再生系数为4.03.     

白菜类作物子叶高频再生体系的建立

以大白菜品种北京80号、油青矮脚45天菜心、四季菜心王的带柄子叶为外植体,研究不同基因型、苗龄、激素组合、预处理条件及琼脂质量浓度对不定芽再生的影响。结果表明,北京80号的最佳培养基为MS+5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+2mg/L AgNO3,再生频率为83.6%;油青矮脚45天菜心和四季菜心王的最佳培养基为MS+0.2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA+2 mg/L AgNO3,再生频率分别为73.1%和83.2%。3个基因型的带柄子叶在0.5～1mg/L 2,4-D中预处理3d,再生频率达84%以上。4～5d苗龄的外植体诱导不定芽效果较好。琼脂的质量浓度以12g/L为宜。通过不定芽继代培养和生根驯化建立白菜类作物较高再生频率的再生体系。     

榨菜子叶和带柄子叶再生植株的研究

以榨菜子叶及带柄子叶等为外植体,在添加不同激素的MS培养基上,经不定芽诱导,不定芽伸长,生根等步骤,获得了完整的再生植株.结果表明:4 d苗龄的子叶再生能力最强,带柄子叶的最佳苗龄为5～6 d.子叶和带柄子叶分别在MS BA 2 mg/L NAA 0.4 mg/L AgNO3 5 mg/L和MS BA 2 mg/L NAA 0.2 mg/L AgNO3 5 mg/L的培养基中不定芽分化的效果较好.不同基因型间对子叶外植体的再生影响不大,但对带柄子叶的再生影响较明显.     

大白菜“早熟5号”不定芽再生体系的优化

选用大白菜品种“早熟5号”为材料,分析了外植体、苗龄、AgN03和植物激素对其不定芽再生的影响.结果表明:不同外植体类型中,采用4～5d苗龄的带柄子叶为外植体再生频率最高,添加AgN03后在3～7 mg/L的浓度范围内外植体分化率大幅度提升,分化率最高达到78.33％,带柄子叶于MS+6- BA 5 mg/L+ NAA 1 mg/L+ AgNO33 mg/L培养基上不定芽分化率最高,达到86.41％.     

雪里蕻高效再生体系的建立

以雪里蕻(Brassica juncea Coss. var. multiceps Tsen et Lee)子叶、带柄子叶、子叶柄和下胚轴为外植体,在添加不同植物生长调节剂的MS培养基上进行分化培养.结果表明:在4种外植体中,带柄子叶不定芽分化能力最强.子叶和带柄子叶不定芽分化的最适培养基分别为MS+2 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3和MS+2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3.带柄子叶和子叶不定芽分化的最佳苗龄都为5 d.AgNO3能显著地促进带柄子叶不定芽的分化,以5 mg/L的浓度为最佳.不同基因型对带柄子叶不定芽分化影响不大,但对子叶影响较明显.不定根诱导的最佳培养基为MS+0.2 mg/L NAA.     

松花菜DH系下胚轴不定芽高频再生体系的建立

以松花菜DH系2-1、2-4、2-16下胚轴为外植体,研究其高频离体再生体系.比较不同浓度植物生长调节剂、不同时期苗龄外植体及不同浓度AgNO3添加剂对不定芽再生频率的影响.结果表明:2-1和2-4在6-BA为2 mg/L、NAA为0.1和0.2 mg/L的分化培养基上不定芽诱导再生率最高,2-16在NAA为0.1 mg/L、6-BA为1mg/L培养基上不定芽的再生频率最高;平放在分化培养基上的下胚轴一端即形态学上端分化出芽;4 mg/L AgNO3能提高松花菜下胚轴不定芽分化率.     

菜用大豆高效离体再生体系的优化

为筛选较易再生的菜用大豆品种,为遗传转化建立良好的再生体系,以‘春丰早’、‘浙农6号’、‘浙农8号’、‘沪宁95-1’、‘辽鲜1号’和‘台湾75’为材料,研究外植体类型、激素配比、接种时间、接种方式以及基因型对再生频率的影响。结果表明：不同外植体类型中,子叶—子叶柄的再生频率最高;B5培养基+10 mg·L-1 TDZ+005 mg·L-1 NAA+50 mg·L-1 AgNO3为最佳培养基;种子发芽10 d为最佳接种时间;子叶—子叶柄垂直接种时再生频率较高;不同品种中,‘浙农8号’再生频率最高,达8089%;最佳生根培养基为1/2 B5+05 mg·L-1 NAA。     

辣椒子叶和下胚轴的离体培养及高效再生体系的建立

采用 9 个辣椒品种(Capsicum annuum L.)的子叶和下胚轴,分别离体培养在附加不同激素及化合物的MB5培养基上,对苗龄、基因型、不同外植体、激素组合和 AgNO3等对外植体不定芽诱导分化和芽伸长的影响进行研究。结果表明,苗龄对外植体不定芽分化的方式有直接影响;AgNO3的加入可使芽分化率平均提高 20 %～30 %,并缩短外植体再生时间;子叶的不定芽分化率高于下胚轴;B5维生素有利于芽的生长和芽伸长率的提高。通过结果比较,筛选出了辣椒子叶和下胚轴离体再生的较好芽分化培养基为 MB5+5 mg/L、6-BA+0.5 mg/L、IAA+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;芽伸长培养基为 MB5+3 mg/L、6-BA+1 mg/L、IAA+2 mg/L、GA3+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;生根培养基为 1/2 MS+0.2 mg/L、IAA+0.1 mg/L NAA。     

黄灯笼辣椒组织培养研究

以黄灯笼辣椒子叶和下胚轴为外植体,研究了不同激素组合、苗龄、AgNO3（不同浓度）等对辣椒再生的影响。结果表明：①10～15d苗龄的外植体分化频率最高;②添加5．0mg／L的AgNO3可有效地减轻外植体或愈伤组织褐化程度;③最佳芽诱导分化培养基为MS＋BA5．0mg／L＋IAA1．0mg／L;④最佳芽伸长垮养基为MS＋BA3．0mg／L＋IAA1．0mg／L＋GA34．0mg／L;⑤最佳生根培养基为MS＋IAA0．5mg/L。     

加工番茄子叶和下胚轴离体植株再生的研究

以加工番茄BO 2和BO 4无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,以M S为基本培养基,研究了不同浓度的ZT,6-BA与不同浓度的IAA组合对外植体芽诱导的影响。结果表明,在不同浓度的ZT和IAA组合中,对2个番茄品种的子叶和下胚轴外植体芽诱导均以M S+1.0 m g/L ZT+0.05 m g/L IAA培养基为最好,BO 2品种子叶和下胚轴的出芽率分别为32.7%和24.5%,BO 4品种的分别为37.3%和28.2%;在不同浓度的6-BA和IAA组合中,诱导BO 2外植体出芽率最高的培养基是M S+2.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/L IAA,子叶和下胚轴的出芽率分别为27.3%和14.5%;诱导BO 4品种子叶和下胚轴出芽率最高的培养基分别为M S+1.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/LIAA和M S+2.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/L IAA,子叶和下胚轴的出芽率均为28.2%;在M S+0.1 m g/L IAA培养基上,加工番茄BO 2再生芽1周左右就能长出根,形成完整的小植株。     

西葫芦双单倍体自交一代离体再生研究

以西葫芦DH12-11409双单倍体植株自交后代种子为试材,研究不同激素组合、外植体类型和苗龄对诱导西葫芦不定芽再生以及不定芽生根的影响。结果表明,取5d龄西葫芦双单倍体黄绿色子叶的子叶节为外植体,在MS+30g/L Suc+8g/L Agar+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基上诱导不定芽效果最好,诱导率高达90.0%,分化系数为8.5;生根培养基则以MS培养基中添加0.05或0.1mg/L NAA为宜;5~6片真叶再生植株经驯化移栽成活率高达90.0%,为再生植株驯化移栽的最佳时期。     

花椰菜再生体系的优化

以子叶和上胚轴为外植体,研究了不同激素浓度下花椰菜离体培养的再生体系.结果表明,上胚轴作为外植体时不定芽分化率较高,在不加IAA或添加0.5 mg/L IAA的培养基上均能达到100%,最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IAA.子叶作为外植体时不定芽分化率低,最高为40%.     

除虫菊愈伤组织诱导研究

以除虫菊种子获得的无菌苗的不同器官为外植体,研究几种基本培养基及NAA、2,4-D或其与BA、KT的组合对愈伤组织的诱导效果,结果表明：不同类型基本培养基中MS有利于子叶、真叶和下胚轴,White有利于根愈伤组织的诱导和生长。不论除虫菊的哪一部分作为外植体,培养基pH值均为5.8较为合适。不同器官外植体诱导愈伤组织的最适植物生长调节剂组合不同,子叶为1.0 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L KT,真叶为1.0-2.0 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/LKT,根为0.5 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L BA或KT,而下胚轴在1.0-2.0mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L BA,0.5-1.0 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L KT,1.0 mg/L NAA＋0.5 mg/L BA,0.5mg/L NAA＋0.5 mg/L KT,0.5 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L BA或KT均可100%诱导愈伤组织。     

薄皮甜瓜自交系高效组织培养技术的研究

以薄皮甜瓜自交系为试材,探讨了不同部位外植体、苗龄、激素组合等因素对植株离体再生的影响。其结果是以4~6日龄的无菌苗的子叶柄、下胚轴上端外植体适于不定芽的较高频率分化;两种外植体分化存在明显极性现象,近生长点处为感受外源激素的敏感部位;MS、6-BA 1.5~2.5 mg/L、ZT 1.0~3.0mg/L、NAA 0.1~0.2 mg/L之间配比适于不定芽的分化,分化率达60%~70%;MS+KT 1.5~2.5 mg/L+GA 2.0 mg/L利于丛生芽的伸长生长;高效生根培养基为MS+IBA 1.0 mg/L。     

不结球白菜子叶离体培养再生植株

用矮脚黄的子叶建立了不结球白菜高频率再生体系。在ＭＳ＋６－ＢＡ１０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ培养基上，外植体分化率达７０％，每一外植体可产生９．６个不定芽。研究了各种因素对子时离体再生植株的影响，发现１１～１５ｄ苗龄的子叶分化效果最佳。ＭＳ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ对根的诱导最好。     

代代花子叶不定芽形态发生的研究

以代代花（ＣｉｔｒｕｓａｕｒａｎｔｉｕｍＬ．ｖａｒ．ａｍａｒａＥｎｇｌ．）的种子胚为外植体，接种在仅含ＢＡ２ｍｇ／ＬＭＳ培养基上，能形成多芽苗，平均每胚２．６个．少数幼苗，还可以从下胚轴处长出许多不定芽．另外还可以从子叶近基部腹面的中央部位以及近基部的边缘长出一些不定芽．接种在附加ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ培养基上的种胚，不能形成幼苗，但能使子叶产生愈伤组织，出愈率达９１．７％．仅附加２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ的培养基，子叶最后仅形成呈黄色炸裂状的疏松物．将上述幼苗的下胚轴、子叶、上胚轴等切成小段进行培养，可在外植体上直接形成不定芽．对种子胚子叶不定芽的形态发生进行了组织细胞学观察，表明子叶的不定芽是由上表皮下的叶肉细胞分裂分化而来     

杜仲愈伤组织诱导的研究

采用杜仲优树的幼叶、嫩茎及种子无菌苗的下胚轴、子叶、真叶、根为外植体,以B5和MS为基本培养基,添加1.0mg/LNAA和0.3mg/LBA,进行了不同外植体种类、外植体大小、试验接种方式、外植体采样时间、光照条件、培养基pH值共6种因素对杜仲愈伤组织诱导的影响试验。结果表明,在杜仲愈伤组织诱导中,田间材料幼叶取样时间以3月中旬为好,幼茎的取材时间以4月中旬以前最佳;无菌苗以下胚轴、子叶、真叶诱导效果较好;诱导愈伤组织的培养基pH值以6.3较适宜;培养室的光照条件以12h光照、12h暗培养较有利于愈伤组织诱导;茎段的大小和接种方式以0.7cm长度横放方式诱导效果较好。