虎源猫瘟热病毒的分离和鉴定

为了分离并鉴定发病虎粪便和脾脏中的1株疑似猫瘟热病毒(FPV),试验将金标记FPV试纸条初步鉴定阳性的虎粪样经无菌处理,接种于猫肾传代(CRFK)细胞。结果表明:经细胞传代成功分离猫瘟热病毒,命名为FPV-HLJ;该毒株接种细胞后能够产生明显细胞病变(CPE);病毒细胞培养液能凝集猪红细胞(凝集效价达26～28),但不能凝集鸡红细胞;电镜观察可见大量外观呈圆形或六边形,大小20～23nm的病毒粒子;对该病毒VP2全基因克隆并测序,该基因全长均为1755个核苷酸,编码584个氨基酸,与FPV标准毒株CU-4(GenBank登录号M38246)VP2基因大小相同,其决定抗原性、血凝性和宿主特异性的几个关键位点的氨基酸符合FPV的氨基酸序列特征,证明该毒株为猫瘟热病毒。     

利巴韦林对猫细小病毒体外抑制作用的研究

<正>猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)又称猫泛白细胞减少症病毒、猫瘟热病毒或猫传染性肠炎病毒。动物感染FPV后主要的临床表现为高热、呕吐、肠炎、腹泻和白细胞数目严重减少,是一种急性病毒性传染病[1]。FPV是目前细小病毒属中感染范围最广、致病性最强的一种病毒,广泛存在于世界各地,主要感染猫科与鼬科等多种动物,其中以幼猫和水貂最     

甘肃省猫泛白细胞减少症流行现状调查

猫泛白细胞减少症又称为猫瘟热(以下简称猫瘟),是由猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)引起的猫及猫科动物的一种急性高度接触性传染病.临床表现为发热、呕吐、腹泻、脱水及白细胞严重减少和肠炎.FPV在自然条件下可以感染猫,也可以感染狐、狮、豹和浣熊等珍稀野生动物,给养猫爱好者和野生动物保护造成巨大威胁.     

HA/HI和ELISA方法检测金钱豹血中猫瘟热抗体的比较

猫瘟热(Feline d istemper)是由猫细小病毒引起的一种以发热、白细胞显著减少、呕吐和腹泻为主要特征的传染病。该病主要感染猫科和鼬科多种动物,具有高度接触传染性,其中以幼小易感动物的发病率和死亡率为最高。由于该病对野生动物的威胁不像犬瘟热那样有较大的危害,对该病的检测诊断手段报道也不多见。试验采用HA/HI和ELISA法对成都动物园12只金钱豹血中抗体进行了检测,现报道如下。1材料与方法1.1材料金钱豹血清样品,来自成都动物园;诊断抗原,由四川农业大学预防兽医系微生物实验室保存的猫瘟热病毒(Feline d istemper virus,FPV)…     

鸭坦布苏病毒E蛋白Domain Ⅲ单克隆抗体胶体金试纸条的创制及应用

为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒（DTMUV）的方法,以2株（B9D7B8G10和B9D10C7株）抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进行纯化并鉴定;以纯化的B9D7B8G10株单克隆抗体作为标记抗体,通过调节单克隆抗体浓度与pH确定胶体金探针最佳结合条件;同时,在硝酸纤维素膜（NC膜）检测带包被纯化的B9D10C7株单克隆抗体,质控带包被山羊抗小鼠IgG抗体,建立检测DTMUV胶体金免疫层析试纸条;成功建立试纸条后,对试纸条敏感性、特异性、重复性和稳定性进行检测,并与RT-PCR检测方法进行比较,对200份临床疑似感染样品进行检测。结果显示：制备的胶体金试纸条在15 min内即可完成检测,最低检测稀释度为1:50,且不与鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅星状病毒、禽白血病病毒发生交叉反应;应用试纸条和RT-PCR方法分别对200份临床疑似样品进行检测,两者符合率达98%。结果表明,制备的胶体金试纸条敏感性高、特异性强、稳定性好、重复性好,为DTMUV的快速检测提供了...     

猫泛白细胞减少症病毒的研究进展

猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia,FP)也叫猫瘟热、猫传染性肠炎、猫细小病毒感染,简称猫瘟.此病是由猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus,FPV)引起的,猫特别是幼龄猫易感的一种发热性、高度接触性、致死性传染病.     

犬瘟热病毒单克隆抗体的研制及胶体金试纸条检测方法的建立

本研究利用原核表达、纯化的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)N 蛋白免疫BALB/C小鼠,成功筛选到两株分泌CDV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为D3、D6。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性、特异性良好,能识别不同来源的犬瘟热病毒株,单抗亚类均为IgG1。以D3作为金标抗体,D6作为检测抗体,兔抗鼠IgG作为质控线抗体,制备犬瘟热病毒胶体金检测试纸条,检测犬瘟热病毒敏感性为1000TCID50,能有效检测区分犬瘟热病毒、犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒2型(Canine adenovirus type 2,CAV2)、狂犬病病毒(Rabies virus,RV)。综上,本研究建立的胶体金试纸条检测方法,灵敏度高、特异性强,适用于犬瘟热病毒临床快速诊断。     

猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定

猫瘟热病毒又称猫泛白细胞减少症病毒（FPV）,是引起猫及猫科动物的一种急性高度接触性传染病。我们在2005年12月收集到1例疑似猫泛白细胞减少症的急性期粪便,用FPV抗原金标记试纸条检测为强阳性,该粪便经处理后接种到FK81单层细胞上成功地分离到一株病毒,经鉴定为FPV,命名为BJ—JB-8。报告如下。     

猫泛白细胞减少症的研究进展

猫泛白细胞减少症也叫猫瘟热、猫传染性肠炎、猫细小病毒感染,此病是由猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus,FPV)引起的猫特别是幼龄猫的一种发热性、高度接触性、致死性传染病.该病以体温升高、呕吐、腹泻和白细胞减少为主要特征,传染性极强.猫泛白细胞减少症病毒属于细小病毒科,为单股线状DNA病毒.FPV是目前肉食兽细小病毒中感染范围最宽、致病性最强的一种,是肉食兽细小病毒中的主要病毒之一.     

浅谈猫瘟热的诊断与防治

猫瘟热(Felinedistemper)又名猫泛白细胞减少症(Felinepanleukopenia)或猫传染性肠炎(Felineinfectiousenteritis),是由猫细小病毒(Felinepanleukopeniavirus,FPV)引起的一种高度接触性传染病,多发生于冬末至春季,是危害猫科动物的主要疾病之一.     

猪瘟病毒抗原胶体金快速检测试纸的研究

应用胶体金标记技术(Immunogold Labelling Technique)与免疫层析技术相结合,在玻璃纤维膜、硝酸纤维膜的检测线(T)和对照线(C)上分别喷上胶体金与猪瘟(CSF)单克隆抗体(Ab2)的偶联物、CSF单克隆抗体(Ab2)和羊抗鼠IgG多克隆抗体,制成检测CSF抗原的"猪瘟抗原胶体金快速检测试纸".用该试纸检测"猪瘟弱毒活疫苗"和猪瘟脾淋弱毒苗均显阳性,而对猪源性的其它病毒、细菌抗原均显阴性.经临床测试,该试纸具有微量、特异、快速、简便和结果容易判定的优点,可作为检测猪瘟抗原的一种新试剂.     

柱状黄杆菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

为建立一种通过胶体金免疫层析技术快速检测柱状黄杆菌的方法,试验采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20 nm的胶体金颗粒,将其标记纯化的抗柱状黄杆菌单克隆抗体(McAb)制备出金标抗体结合垫。纯化的兔抗柱状黄杆菌多克隆抗体(PcAb)和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)与质控线(C)上,制备出胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性及稳定性进行测定。结果显示,该试纸条检测灵敏度为1×10³ CFU,检测时间为3.5 min,制备的试纸条与迟钝爱德华氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌均无交叉反应,且稳定性好。本研究首次成功建立了柱状黄杆菌胶体金快速检测方法,所制备的试纸条具有灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于柱状黄杆菌的检测。     

猪δ冠状病毒胶体金试纸条检测方法的建立

为建立一种方便、快捷、实用的检测猪δ 冠状病毒(PDCoV)方法,本研究利用原核表达猪δ 冠状病毒N 蛋白,以纯化的N 蛋白免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤细胞技术研制2株分泌PDCoV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为E8、A10。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性及特异性良好,E8亚类为IgG2a,A10亚类为IgG1。以E8作为金标抗体,A10作为检测抗体,兔抗鼠作为质控线抗体,制备猪δ 冠状病毒胶体金检测试纸条,检测猪δ 冠状病毒敏感性为100TCID50,检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪δ 冠状病毒阴性对照均为阴性。本研究建立的胶体金试纸条检测方法敏感性及特异性良好。该检测方法的建立,为猪δ 冠状病毒(PDCoV)流行病学调查提供一种方法,同时为规模化养殖集团及基层兽医组织提供一种检测猪δ 冠状病毒产品。     

猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡的研制

应用胶体金免疫层析技术,结合胶体金定量读数仪研制出一种快速定量检测猪血清中猪瘟抗体水平的检测卡。该检测卡以胶体金标记高灵敏的猪瘟重组E2蛋白,同时在NC膜上包被同一蛋白,经正交实验确定最适条件,同时通过与对照线的颜色对比,应用胶体金定量读数仪,可对样本中猪瘟抗体水平进行定量。该检测卡检测方法简便、快速、稳定性好。与猪圆环病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征等常见猪疫病抗体均无交叉反应。检测71份猪血清样本结果与ELISA结果的符合率达90.1%。结果表明,实验研制的猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡可用于基层兽医站和养殖企业的检测。     

犬狂犬病毒抗体胶体金检测试纸卡的研制

为快速检测犬狂犬病毒IgG抗体,应用狂犬病毒G蛋白作为捕获抗原,鼠抗狂犬病毒G蛋白单克隆抗体和羊抗犬IgG分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗体检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与快速荧光灶抑制实验检测值对比总符合率为82.1%。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测犬狂犬病毒IgG抗体,可为临床诊断和宠物犬狂犬疫苗免疫效果的评价提供参考。     

氟喹诺酮类药物胶体金试纸的研制

用针对抗氟喹诺酮类(fluoroquinolones,FQs)药物的广谱性单克隆抗体建立了可以同时检测11种FQs药物的胶体金免疫层析方法。该试纸条用20 nm的胶体金标记单抗,将诺氟沙星－卵清蛋白喷涂在检测线上,羊抗小鼠二抗喷涂在质控线上。该胶体金试纸对猪肉和虾中环丙沙星、恩诺沙星和氧氟沙星的检测限都是30 ng/g,对诺氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、麻保沙星、洛美沙星、达氟沙星、沙拉沙星和二氟沙星8种药物在以上两种样品中添加浓度为100 ng/g时都可被检出,整个检测过程包括样品前处理的时间可在20 min内完成。试验结果表明符合对这11种FQs药物在鸡肉和虾中残留现场大量筛查的要求。     

快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金免疫层析方法的建立

为建立一种快速、简便、灵敏的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒,标记抗PRRSVN蛋白的单克隆抗体(MAb) 2D7制备免疫检测探针,将抗PRRSVN蛋白的MAb 1G7和羊抗鼠IgG抗体印迹在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,经条件优化,组装成胶体金免疫层析试纸条.本研究制备的PRRSV胶体金试纸条的最低检测限度为103.0 TCID50/mL;在特异性试验中,试纸条检测PRRSV呈阳性,其它主要猪病病原均为阴性;不同批次试纸条重复检测,结果无差异;对现地猪场送检的150份病料进行PRRSV病原检测,与RT-PCR相比较,试纸条的特异性和敏感性分别为98.13％和88.37％.两种方法的一致性Kappa值为0.882.建立的PRRSV抗原胶体金免疫层析检测方法具有良好的的敏感性、特异性、重复性及现地应用性.该试纸条的研制为PRRS的快速诊断及免疫预防提供了技术手段.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金检测试纸卡的研制

为快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-3D10株和4H11株分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗原检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与PCR方法对比总符合率为93．3％。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,可为临床诊断提供参考。     

黄曲霉毒素B_1胶体金快速定量检测试剂盒的研发

本研究旨在应用胶体金免疫层析技术,结合胶体金定量读数仪研制出一种快速定量检测谷物和饲料中黄曲霉毒素B_1含量的胶体金快速定量检测试剂盒。该试剂盒以胶体金标记高特异性单抗,与偶联抗原进行正交试验,确定适宜条件,同时通过与对照线和试验线的颜色对比,应用胶体金定量读数仪,对样本中黄曲霉毒素B_1含量进行定量检测。结果表明,黄曲霉毒素B1胶体金快速定量检测试剂盒检测方法简便、快速、稳定性好,且可得出具体数据,避免了人肉眼观察的差异;与常见霉菌毒素无交叉反应,样品检测结果与高效液相色谱法检测结果的相对误差在20%以内。由此可见,本试验研制的黄曲霉毒素B_1胶体金快速定量检测试剂盒可用于谷物和饲料中黄曲霉毒素B_1含量的快速定量检测。