杀螺药物菸酰苯胺衍生物及其类似物的合成研究

杀螺药物菸酰苯胺衍生物及其类似物的合成研究胡金玉，黄立信（中国预防医学科学院寄生虫病研究所２０００２５）钉螺是传播血吸虫病的媒介，因而，杀灭钉螺是消灭血吸虫病的重要措施。改造现用杀螺药物的结构是寻找高效、低毒、价廉和使用方便的杀螺药物的有效途径。杀螺...     

杀螺药物研究──碳酸酯、氨基甲酸酯类化合物的合成及其构效关系初步探讨

合成了碳酸酯类化合物23个和苯氨基甲酸苯酯类化合物7个。杀螺初筛试验发现，8个碳酸酯化合物具有杀螺活性，其中，化合物I1和I11，10ppm的杀螺率为100％和96．7％。碳酸苯酯的苯环上，用硝基或3个以上的氯原子取代，有利于增强该类化合物的杀螺作用。杀螺效果较好的三氯苯碳酸酯改变成同电异素体类似物，苯氨基甲酸酯后，杀螺作用明显下降。     

N—甲基—D，L—天冬氨酸（NMA）对育肥猪生长激素基因表达的影响

以肥育猪为对象，探讨了日粮中添加50mg/kgN－甲基－D，L－天冬氨酸（NMA）对其生长激素（GH）基因表达的影响。结果表明，添加NMA后，肥育猪日增重提高了9．31％（P＜0．01）；料重比降低了7．16％（P＜0．02）；血清GH含量提高了92．54％（P＜0．01）；垂体GH－mRNA水平提高了153．03％（P＜0．01）；下丘脑cAMP水平降低了21．89％（P＜0．01）；腺垂体中cAMP水平升高88．57％（P＜0．05）。     

抗肝片吸虫病药物化合物：N—（2′，4′，5′—三氯）苯基—2—羟基—3，5，6—三氯苯磺酰胺的杀虫活性研究

本文研究了治疗牛、羊等家畜肝片吸虫病药物N－（2′，4′，5′－三氯）苯基－2羟基－3，5，6－三氯－苯磺酰胺化合物的杀虫机理，通过实验及药物分子的结构分析，初步认为其杀虫机理是对线粒体氧化磷酸化反应的解偶联作用；采用氧电极法、测线粒体呼吸过程中磷的变化以及测ATP酶活性等方法研究其对线粒氧化磷酸化反应的解偶联作用，结果表明：标题药物化合物是较好的解偶联剂，其解偶联活性高于典型的解偶联剂DNP。     

黄芩苷对自噬介导H6N6禽流感病毒致病损伤的作用

探究黄芩苷对H6N6亚型禽流感病毒诱导小鼠肺脏致病损伤的作用。选用40只昆明小鼠随机分为4组，即对照组、模型组、黄芩苷治疗组、3-MA抑制剂组。通过HE染色观察肺组织病理形态学变化，ELISA法检测血清中IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α的含量，透射电镜检测小鼠肺脏中自噬体的水平，Western blot检测肺组织LC3、Beclin-1及ATG7蛋白表达水平，免疫荧光法检测肺组织LC3蛋白表达水平，免疫组化法检测肺组织LC3、Beclin-1及ATG5蛋白表达水平，RT-qPCR检测肺组织自噬关键基因LC3、Beclin-1、ATG3、ATG5、ATG7及ATG12 mRNA转录水平。结果显示，经黄芩苷治疗后能显著缓解H6N6亚型禽流感病毒对小鼠肺组织的损伤，血清中IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α含量显著下降(P<0.01),肺组织中自噬体数量减少，LC3、Beclin-1、ATG5及ATG7蛋白表达水平显著下降(P<0.01),肺组织中LC3、Beclin-1、ATG3、ATG5、ATG7及ATG12 mRNA转录水平显著下降(P<0.01)。结...     

L—肉碱的研究进展及其在生产中的应用

L－肉碱（L－3－羟－4－N－三甲铵乙酸）为一水溶性氨基酸，属于B族维生素，称为“维生素BT”。L－肉碱是动物体内与脂肪酸代谢有关的化合物，它可以促进动物生长，改善饲料转化率，节约蛋白质和氨基酸，防止脂肪肝的产生，减轻仔猪腹泻，提高仔鸡成活率，对治疗心血管疾病有显著疗效，同时对扫刍动物，水产养殖和特种养殖亦有一定效果。它的主要功能：（1）促进长链脂肪酸的β－氧化；（2）刺激中链脂肪酸的氧化；（3）调节线粒体内酰基COA／COA的比率，为脂肪酸合成提供乙酰基原料；（4）排除机体因酰基积累而造成的代谢毒性（5）参与精子的成熟过程；（6）促进脂溶性维生素及Ca,P的吸收；（7）参与支链氨基酸代谢。L－肉碱作为一种新型饲料添加剂，有着广阔前景。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）CH—1a株N基因的分子克隆,？…

根据已发表的ＰＲＲＳＶＩＡＦ－ｅｘｐ９１株的核酸序列，设计了一对特异性引物，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增了ＰＲＲＳＶＣＨ－１ａ株的Ｎ基因，经补平和磷酸化后，克隆到ｐＵＣ１８ＳｍａＩ位点上，经电泳分析，酶切和ＰＣＲ鉴定证实后，进行序列测定，序列分析表明ＣＨ－１ａ株与ＩＡＦ－ｅｘｐ９１株（美洲型）Ｎ基因核苷酸同一性为９３．２％，氨基酸同一性高达９６．７％，而与ＬＶ株（欧洲株）核苷酸同一性为６３％，氨基酸同一性仅     

犬瘟热病毒小熊猫株H、F和N基因的克隆及表达

根据GenBank中发表的犬瘟热病毒（CDV）的核苷酸序列，设计并合成了扩增CDVH、F和N基因的3对引物，经RT—PCR分别扩增获得了CDV小熊猫株（LP株）H、F和N基因，并对H、F及N基因进行了克隆和序列测定。序列分析表明，CDV LP株属于强毒谱系，与CDV流行株的亲缘关系近．H基因含有较多潜在的糖基化位点．F和N基因相对比较保守。将CDV LP株H、F和N基因克隆入真核表达栽体pVAX1的CMV启动子下游，构建了CDV基因疫苗表达载体pVAXLPH、pVAXLPF、pVAXLPN，体外转染BHK-21细胞．用间接ELISA方法检测到目的蛋白的表达。用构建的3个表达质粒免疫小鼠，从小鼠血清中检测到了抗CDV抗体．初步证实用CDVH、F和N基因作为核酸疫苗免疫动物，可以激活机体的免疫应答。     

禽流感灭活疫苗(H5N2,N28株)和重组禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫鸡和鸭后抗体消长规律的比较研究

禽流感灭活疫苗（H5N2，N28株）和重组禽流感灭活疫苗（H5N1，Re-1株）各3批，以重组禽流感灭活疫苗（H5N1，Re．1株）推荐的免疫程序和剂量分组免疫5周龄SPF鸡和5周龄非免疫鸭。免疫后定期采集血样，测定血清HI抗体效价，分别计算各免疫组鸡和鸭HI抗体效价的几何平均数，绘制各批疫苗免疫鸡和鸭后HI效价消长曲线，并分别对两种疫苗免疫鸡和鸭后各时期的HI抗体效价进行t检验。结果为：①免疫后1周，各免疫组均未测到HI抗体；②鸡免疫后4～5周，HI抗体效价达到峰值1：2^6.0～1：2^7.0，随后2周下降相对较快，平均每周下降0．3—0．7个滴度，之后HI抗体效价缓慢下降，直到试验结束，平均每周下降0．04～0．17个滴度；③鸭首次免疫后第3周各免疫组HI抗体效价达到1：2^4.0～1：2^5.3，加强免疫（首次免疫后第3周）后，HI抗体效价迅速升高。加强免疫后第3周（首次免疫后第6周）HI抗体效价达到最高值1：2^10.6-1：2^11.7，且在峰值水平维持3周，之后1周下降相对较快，平均下降1．2～2．7个滴度，然后缓慢下降，到首免后24周平均每周下降0．28～0．39个滴度，24周除049H5N2批疫苗免疫组外，其他各批免疫鸡HI抗体效价均小于1：2^4.0；④免疫后3周内，两种疫苗刺激鸡产生的HI抗体效价均高于相应批次疫苗免疫鸭产生的HI抗体效价，免疫后第2周相差1．9—2．3个滴度，免疫后第3周相差1．6～2．0个滴度；⑤两种疫苗免疫鸡和鸭后，各时期HI抗体效价t检验差异均不显著（P〉0．05）。以上结果表明，两种疫苗免疫SPF鸡和非免疫鸭后，HI抗体效价消长规律一致，两种疫苗免疫后各个时期的HI抗体效价在统计学上差异均不显著（P〉0．05）。     

铜对体外仔猪软骨细胞增殖和自分泌IGF—I、IGFBP的影响

体外分离、培养仔猪关节软骨细胞，然后在细胞培养液中分别添加0、7．8、15．6、31．2、62．5μmol/L铜。结果表明，软骨细胞在4种浓度的铜中可存活并增殖，而且能增加胰岛素样生长因子（IGF－I）、胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP3）的分泌量。但随铜浓度的增加，其存活率、增殖率、^3H-TdR掺入率及IGF－I、IGFBP3的分泌量有明显的差异。且以培养液中添加31．2μmol/L铜对软骨细胞的增殖作用最强，增殖率、^3H-TdR掺入数、IGF－I、IGFBP3的分泌量显著高于对照组9P＜0．01）。表明31．2μmol/L铜浓度是促进体外软骨细胞增殖和自分泌IGF－I、IGFBP3的最适浓度。     

赤羽病病毒N基因硫氧还蛋白融合表达载体的构建与表达

为获得赤羽病病毒(Akabane virus，AKAV)的核蛋白重组抗原，根据其基因序列(S mRNA)设计合成了1对特异性引物，对AKAV N基因进行RT-PCR扩增，产物大小约为696bp，回收纯化后，将其克隆至pMDl8-T质粒栽体中，经核苷酸序列分析，与已报道的多株AKAV编码核衣壳蛋白N的S mRNA基因比较后发现，所测定毒株的核苷酸序列与TIN毒株的同源性高达98．3％，推测的氨基酸同源性为97．6％，证实为AKAV的N基因。将该基因片段亚克隆插入pBAD／Thio TOPO表达栽体，转化TOPl0细胞，成功地构建了AKAV N基因重组表达栽体。经L-araboinose诱导表达，可稳定、高效地表达AKAV核蛋白抗原。表达蛋白为融合蛋白，分子质量约42．5ku，其表达产量约占茵体总蛋白的28％，融合蛋白中含有AKAV特异性核蛋白抗原，可作为ELISA包被抗原。     

禽流感H5N1新灭活苗在生产应用中免疫抗体变化规律的初步调查

2012年下半年以来，禽流感H5N1疫苗的毒株替换为H5N1（Re-4株＋Re-6株）。为了解该疫苗在生产应用中抗体变化情况，以期更好地为实际生产服务，对固始县的3个蛋鸡场72．2个鹅场进行跟踪调查及实验室监测。     

豚鼠对猪细小病毒弱毒苗抗体反应的研究

用不同批次、不同剂量、不同保存时间的猪细小病毒N株弱毒苗接种豚鼠，观察豚鼠对PPV N株弱毒苗的抗体反应。结果4种不同剂量和3个不同批次的PPV N株弱毒苗接种豚鼠后第14天均产生抗体反应，其PPV HI效价在1：16－1：64之间，0.1ml和1ml 剂量接种豚鼠产生的PPV HI抗体水平相近，抗体持续长达12个月以上。在4℃保存0天、12个月和－20℃保存2年、3年的PPV N株弱毒苗接种豚鼠，其PPV HI价在1：16－1：32之间，说明该苗在4℃至能保存12个月，－20℃能保存3年以上。比较了不同批次疫苗接种猪和豚鼠所产生的抗体反应，结果两者相似。用3批引起豚鼠产生抗体反应的PPV N株弱毒苗接种768头后备母猪，共产仔7136头，其中健活仔6575头，平均每窝产健活仔8．56头，产死仔仅0．73头。证明豚鼠是监测PPV弱毒苗抗体的首选实验动物。     

TGEV的sM、M和N基因克隆及特征分析

参照(3enBank中收录的TGEV sM、M和N基因序列各设计1对特异引物，经RT-PCR扩增获得了TS株的相应基因片段，分别约为346、932和1217bp，其大小与预计的目的片段相符。与其他毒株的相应基因相比较，并经剪接后，TS株的sM、M和N基因全长分别为248、789和1149bp，各编码82个、262个和382个氨基酸；TS株与Purdue株、TF1株和96-1933株的sM基因核苷酸序列同源性分别为95．2％、92．7％和90．2％；推导氨基酸的同源性分别为95．9％、97．2％、98．8％；与Purdue株、TFl株、TGEVH株和96-1933株的M基因核苷酸序列同源性分别为95．2％、98．0％、99．6％和95．0％；推导氨基酸的同源性分别为97．0％、97．3％、98．5％、93．5％；与Purdue株、TF1株、FS722／70株、Korea株、TO14株、TC；EVH株和96-1933株的N基因核苷酸序列同源性分别为98．1％、97．7％、99．0％、98．3％、99．2％、99．0％和95．9％，推导氨基酸的同源性分别为97．9％、98．4％、99．0％、97．7％、99．5％、96．2％、96．6％。并对TS株基因间的保守序列和sM、M和N基因及其编码的相应氨基酸的结构特征进行了分析，发现sM和N基因在TGEV中保守；并提示在我国不仅存在有2个不同亚基因型的TGEV，而且我国的TGEV可能是输入性的。     

鸭源H9N2亚型流感病毒NS基因的克隆及表达

根据GenBank中收录的H9N2亚型流感病毒的NS基因序列设计合成了1对引物NSU／NSL，利用RT—PCR扩增出了H9N2株NS基因；将该基因片段克隆到pMD18-T载体上，并对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定。结果，获得了NS基因片段的阳性重组子，扩增的NS基因包含NS1基因完整的阅读框架和部分NS2基因，其序列与GenBank中收录的其他分离株NS基因比较，同源性达96％～99％。再将克隆的NS基因插入到原核表达载体pET-28a后，转化E．coli BL21(DE3)感受态细胞，在IPTG诱导下获得了预期的蛋白表达，所表达蛋白质的分子质量约为30ku。     

H9亚型禽流感病毒分离株A／Chick／Shandong／6／96的基因序列分析

对1株H9N2亚型禽流感病毒（AIV）A／Chick/Shandong/6/96（H9N2）进行了全病毒基因序列分析。结果表明，该毒株8个基因的核苷酸序列皆与1994年分离株A／Chicken/Beijing/1/94（H92）具有很高的同源性（96．0％－98．6％）；推导其血凝素（HA）裂解位点处的氨基酸序列为A－R－S－S－R，完全符合H9 AIV欧亚分支中的类A／Chicken/Beijing/1/94亚分支的特征；虽然其神经氨酸酶（NA）基因与A／Rhicken/Beijing/1/94（H9N2）相比，出现了9个核苷酸的缺失，然而其同源性仍然较高，为97．3％；而与欧亚分支中的类A／Chicken/Korea/323/96和类A／Quail/HongKong/G1/97亚分支的同源性却相对较低，分别为92．0％和84．2％；其它基因的比较情况也大体相近。提示该毒株是由1994年分离株进化而来，在遗传演化上属于H9亚型流感病毒欧亚分支中的类／A／Chicken/Beijing/1/94(H9N2)亚分支。     

日粮中添加L—NAME对肉鸡腹水综合征发生的影响及其机理

应用低温环境和日粮中添加三碘甲腺原氨酸（3，3，5－triiodothyronine,T3)诱发肉鸡腹水综合征，同时通过日粮添加一氧化氮合酶抑制剂L－NAME，研究了抑制NO的合成对肉鸡肺动脉压及肉鸡腹水综合征发生的影响。180羽AA肉鸡随机等分为对照组（C）、试验组（A、B），参试鸡14日前按常规条件饲养。14日龄后C组鸡按常规条件饲养，A、B组鸡舍温按每日1－2℃逐步降至12℃，同时日粮中添加T3 1．5mg/kg以诱发腹水综合征。另外，B组肉鸡从14日龄起在日粮中添加100mg/kgL－NAME至试验结束。分别于3、4、5、6周龄测定各组肉鸡肺动脉平均压（mean pulmonary arterial pressure,mPAP)、红细胞压积、右心全心比、血浆一氧化氮（NO）和内皮素（endothelin-1,ET-1)水平并记录腹水综合征发病率。结果显示：低温添加T3处理后，A、B组肉鸡腹水综合征发病率增加，但B组高于A组；A、B组肉鸡mPAP从5周龄起高于C组（P＜0．05）；A、B组右心全心比的升高分别在6、5周龄时出现，B组右心全心比的升高比A组提前1周；B组 肉鸡血浆NO水平低于A组，差异不显著；A、B组肉鸡血浆ET－1水平高于C组（P＜0．05）；在6周龄时，A组肉鸡心率明显降低，B组肉鸡心率明显升高。随着肺动脉高压和右心肥大的出现，心率的升高可能促进了右心衰竭和肉鸡腹水综合征的发生。上述结果提示，抑制NO的合成可能促进了肉鸡肺动脉高压，右心肥大的形成和肉鸡腹水综合征的发生。     

鸡传染性支气管炎病毒四川分离株N基因DNA免疫质粒的构建

采用SDS-蛋白酶K法抽提鸡传染性支气管炎病毒(IBV)四川分离株SAIBWJ的基因组RNA，参照基因库中的N基因序列设计了1对引物，扩增出了单一的DNA产物。将该产物插入pUC18载体的HindⅢ和BamHⅠ酶切位点。构建了pUC-NWJ质粒。序列测定结果表明，获得的克隆质粒包含了全部N基因。再将N基因亚克隆到pcDNA3．1( )载体的HindⅢ和XhoⅠ酶切位点，构建了IBVSAIBWJ N基因的DNA免疫质粒pcDNA-NWJ。     

H9N2亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及其序列特征

用RT—PCR技术扩增到H9N2亚型禽流感病毒分离株A／Chicken／Shanghai／F／98(简称F株)的核蛋白(NP)全基因。18个毒株NP基因核苷酸序列比较结果显示，以Q／HK／G1／97为代表的、并和同期香港发生的人流感事件有直接联系的毒株相互间同源率达98．3％一99．3％，而F株与它们的同源率为92．2％一92．8％。遗传进化分析结果表明，F株独成一组，可暂时划分到类C／Ko／323／96亚系。从目前已发表的H9N2毒株NP基因数据不能确定F株的来源。     

禽流感油乳剂灭活疫苗的研究

笔者对禽流感病毒（AIV）H5N4H7N3的一些生物学特性进行了测定，其EID50分别为．10－6．7×02毫升10-7.7×0．2毫升AIVH5N4凡经不同感染途径对28天龄AA鸡的LD50少别为：肌肉注射10×0．2毫升；滴眼、滴鼻10×0．2毫升；经肌肉注射对28天龄石歧杂黄鸡的LD50为10×0．2毫升。病毒用0．1％的福尔马林处理48小时或用0．2％的福尔马林处理24小时可使AIVH5N4完全灭活。两株病毒分别用8、9、10、11天龄的鸡胚孵育，其中以11天龄接种后收获的绒毛尿囊液含病毒量最多，含病毒的绒毛尿囊液在－20℃或－70℃保存时都很稳定。将两株病毒灭活…