杂交水稻种子纯度鉴定方法对比研究

种子纯度是水稻种子质量的核心指标,准确鉴定种子纯度对种子质量标准化、品种审定、假种辨别、产权纠纷等具有重要作用。本文概述并分析了杂交水稻种子纯度鉴定的几种常用方法及其优缺点,并对目前应用最广泛的田间种植鉴定和SSR分子标记鉴定方法进行了比较分析,认为SSR分子标记技术适用于大规模、快速、准确鉴定杂交水稻种子纯度。     

利用SSR分子标记技术鉴定和分析茄子杂种F_1的纯度

【目的】分析、鉴定茄子杂种F1纯度,为提高茄子杂交育种效率提供参考依据。【方法】在育苗期,采用SSR分子标记技术对栽培茄×栽培茄正、反杂交种和野生茄×栽培茄杂交种进行纯度鉴定及亲缘关系分析。【结果】从124对SSR引物中筛选出15对在亲本间存在差异、扩增稳定、条带清晰的引物;从210株杂种F1单株中共鉴定出208株真杂种,杂种纯度为99.0%,鉴定结果与田间性状调查结果一致;栽培茄×栽培茄正、反交组合的F1与亲本的亲缘关系均较近,遗传关系差别微小;野生茄×栽培茄组合的F1与父本的亲缘关系均较远,且表现出偏母本遗传。【结论】SSR分子标记技术能快速、准确鉴定茄子杂交后代的纯度,可作为分子标记辅助育种手段用于指导选择符合茄子育种目标的优良杂交品种选育。     

一种快速低廉的PCR探针标记方法

【研究目的】探针标记技术是分子生物学和基因工程研究中常用实验技术,需要发展高效、快速、低成本、安全、简捷的DNA探针标记方法;【方法】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,电泳和Southern杂交检测探针标记结果;【结果】电泳检测发现标记产物在电泳时相对非标记的对照表现明显滞后,表明探针标记成功;电泳条带清晰明亮,表明探针标记效率高;Southern杂交条带清晰,说明该方法标记的探针可用于Southern等分子杂交实验;【结论】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,是一种低成本、高效、快速的DNA探针标记方法。     

利用SSR分子标记鉴定杂交稻种子齐两优918纯度

种子纯度是杂交水稻种子质量的核心指标。微卫星技术(SSR分子标记技术)因其具有稳定性好、准确可靠、易于操作等优点在种子纯度鉴定中得到了越来越广泛的应用。采用48个SSR分子标记对杂交水稻组合齐两优918的双亲及F1之间的多态性进行筛选和纯度检测技术研究,为种子生产以及种子上市销售做好质量监督,杜绝质量风险。经过筛选得到如下结果:在对48对引物进行筛选后,发现有5对引物在双亲间显示稳定多态性,在杂种F1上表现为父母本共显性条带,表明该5对引物适宜于齐两优918杂交种子纯度鉴定,可用于种子质量监控。     

一种快速鉴定稻种纯度新方法

<正>加强种子纯度检测,严格控制流通过程中杂交水稻种子质量,对水稻生产至关重要。目前对杂交水稻种子的真伪和纯度鉴定通常是在海南省进行田间种植鉴定。但田间种植鉴定需在水稻的整个生育期进行,鉴定周期长,而且异地鉴定费用高,此外,海南特殊的气候条件也影响鉴定的准确性。近年来,随着生物技术的不断发展,微卫星分子标记(SSR)在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中具有广阔的应用前景。     

杂交油菜宁杂11号种子纯度SSR标记快速检测方法(英文)

[目的]建立杂交油菜宁杂11号种子纯度SSR标记快速检测方法。[方法]本研究以杂交油菜新品种宁杂11号为研究对象,利用SSR分子标记技术建立杂交种纯度快速检测方法,同时结合田间种植鉴定作为对比验证。[结果]筛选出共显性标记引物Na10-E02,建立了杂交油菜宁杂11号种子纯度SSR标记快速检测方法:种子利用夜间萌发,碱裂解法快速提取DNA,PCR反应2 h,电泳1.5 h,简化的银染法染色10 min,从获取样品种子到出检测结果只需要不到一天的时间,一个熟练科技人员每个工作日至少可以完成6×96=576粒种子的检测量。利用这套技术对生产中大面积制种的9个样品纯度检测结果与田间种植鉴定的实际纯度结果极显著正相关,相关系数达到0.984(P0.01)。[结论]表明这套技术可以用于宁杂11号杂种纯度的快速准确鉴定。     

SSR分子标记在杂交稻种子纯度及杂株类型定量鉴定中的应用

传统的田间小区种植纯度鉴定方法由于时间滞后不能满足种子企业的需求,而现有的SSR分子标记检测杂交水稻种子纯度的方法,虽能有效鉴定出杂交种的父、母本,但不能将一些混杂的杂株、串粉所致的杂交种区分开,也无法满足种子企业的全面质量信息需求。结合自身工作实践,介绍了一种利用筛选的多对SSR分子标记深入检测杂交水稻种子纯度及开展杂株类型定量鉴定的方法,这种方法不仅能更精确的检测杂交水稻种子纯度,还能将种子所含的杂株类型及其各自占比鉴定出来,为种子企业提供更准确、更全面的质量信息和可操作性强的加工处理办法。本方法广泛适用于各种子企业对主营骨干水稻品种的质量监控和生产经营决策。     

玉米品种“家佳荣2号”杂交种子纯度的SNP分子鉴定

【目的】验证SNP分子标记中HRM技术鉴定结果的可靠性,为杂交玉米种子纯度鉴定方法的选择提供参考。【方法】以杂交种家佳荣2号及其父母本、近似杂交组合JR02为材料,采用田间小区种植鉴定和SNP分子标记中的HRM技术两种方法对杂交玉米家佳荣2号的同一批种子样品进行纯度鉴定。【结果】田间小区种植纯度鉴定结果为97.8%,SNP分子标记纯度鉴定结果为97.1%。【结论】SNP分子标记中的HRM技术鉴定结果可靠,可作为杂交玉米种子的纯度鉴定方法之一。     

一种简便快速制备水稻PCR模板的方法及其应用

目前在水稻分子生物学实验中DNA提取的常用方法有CTAB提取法和SDS提取法。CTAB提取法提取的DNA质量高而且量大，主要用于RFLP、Southem杂交等实验；SDS方法提取的DNA杂质略多，也可以大量提取，适合用于基于PCR的分子标记实验。但这两种DNA提取方法所需成本较高，技术性强，叶片用量大，难以满足水稻育种实践的需要，实用性不强。因此，在水稻分子育种实践中，急需一种叶片用量小、提取程序简单快捷的方法提取DNA，以满足开展分子标记辅助选择育种、分子标记快速检测种子纯度等应用研究的需要。许多分子标记都基于PCR技术，如AFLP、SSR、RAPD、SNP、EST等。目前已开发出大量的水稻SSR标记。由于水稻基因组中存在着丰富的SSR标记而且多态性较好，在水稻群体分子标记连锁图谱构建、基因定位、QTL分析等研究中广泛应用，在水稻种子纯度鉴定和分子标记辅助选择育种方面已有研究报道。本文报道了一种简便的DNA提取方法，既能快速提取DNA。又只需要少量叶片，同时利用SSR标记鉴定了“两优培九”种子的纯度。     

利用优化的SSR分子标记技术检测杂交水稻万优481纯度

[目的]通过降低试验药剂、减少PCR循环时间、提高琼脂糖利用指数等,建立经济、快速、低污染的杂交水稻纯度鉴定体系。[方法]将杂交水稻万优481、亲本万3A和万恢481在光照培养箱内温度发芽(30℃,长到5 cm左右),用CTAB法提取DNA;按优化的PCR体系和电泳方法,用亲本万3A和万恢481的DNA从24对引物中筛选出多态性好的引物P18,用引物P18对杂交水稻万优481样本进行纯度鉴定。[结果]利用优化的SSR分子标记技术准确鉴定出万优481的纯度为98.5%,与田间鉴定结果相符,凝胶电泳成像带谱清晰,同时,与常用方法相比,酶等试验药品使用量减少20%~25%,试验所用时间较常用方法减少了50%以上。[结论]利用优化的SSR分子标记技术体系鉴定杂交水稻种子纯度,经济、快速且鉴定的结果清晰、可靠,同时大大减少琼脂糖等试验残渣的产生,降低了对环境污染,值得推广、应用。     

SSR标记技术鉴定新食葵6号品种纯度的研究

[目的]通过利用SSR分子标记技术测定向日葵种子纯度,以期为生产加工应用提供准确、便捷的杂交种种子纯度鉴定方法提供依据.[方法]该研究以新食葵6号及其双亲的DNA为模板,通过DNA提取、PCR扩增反应和 制作电泳的步骤,进行了约100对SSR物分子标记的筛选.[结果]SSR多态引物标记532在新食葵6号母本分别产生特异条带大小为496bp,父本特异标记条带大小为451 bp;引物标记574在母本上特异条带大小为364 bp,父本上的特异标记条带大小为384 bp,同时室内分子鉴定的纯度和田间鉴定纯度基本一致;通过SSR分子标记方法可出可得到区分父本、母本和杂交种的引物标记532和574,这2个引物标记可有效用于鉴定上述新食葵6号杂交种种子的纯度,辨别种子的真伪.[结论]该方法具有简单,快速、准确、重演性高的优点,目前该方法已成为向日葵品种鉴定的主要方法.     

利用SSR分子标记鉴定杂交水稻真伪与纯度

[目的]寻找快速有效鉴定杂交水稻种子真伪与纯度的方法,以提高鉴定的效率。[方法]利用SSR分子标记鉴定杂交水稻种子中优88、协优88和全丰优88的真伪和纯度,并将鉴定结果与田间鉴定结果进行比较。[结果]杂交种的DNA带谱中均含有两个亲本的互补带,说明杂交种为真种子。中优88的SSR分子标记和田间鉴定的纯度分别为97．43％和97．60％;协优88的SSR分子标记和田间鉴定的纯度分别为98．00％和98．10％,全丰优88的SSR分子标记和田间鉴定的纯度分别为96．29％和96．60％,3个杂交种的SSR分子标记鉴定和田间鉴定的结果基本上一致,没有明显的差异,说明用SSR检测杂交水稻种子纯度是完全可行的。[结论]SSR分子标记在杂交水稻种子真伪与纯度鉴定上具有较好的应用价值和前景。     

SSR标记在油菜隐性核不育杂交种的纯度鉴定研究

[目的]利用SSR标记对油菜隐性核不育杂交种的纯度进行鉴定。[方法]以贵州省油菜科学研究所选育的甘蓝型油菜"油研系列"为材料,利用简化的SSR标记技术对制种样品进行纯度分析。[结果]筛选出了2对条带清晰、易于统计的SSR引物;大田生产F1杂种群体的纯度鉴定结果表明,SSR鉴定的结果清晰可辨,可信度高,能较准确地反映种子的真实纯度。[结论]该试验为SSR标记在油菜种子纯度鉴定中的进一步应用奠定了基础。     

豫玉22玉米杂交种子纯度的SSR和SNP分子比较鉴定

为研究豫玉22玉米杂交种子的SSR和SNP两种分子标记纯度鉴定方法,为快速有效鉴定玉米种子纯度提供依据。采用SSR荧光标记法和SNP分子标记的KASP技术对豫玉22玉米杂交种子进行基因组DNA提取、引物筛选、基因型分析、纯度鉴定。豫玉22的SSR特异性引物为umc2007y4和bnlg161k8,纯度鉴定结果为97.92%。SNP特异性引物MaSNP64和MaSNP245纯度鉴定结果是98.44%。SSR和SNP分子标记鉴定豫玉22玉米杂交种子纯度的最佳方法,为拓展玉米杂交种纯度鉴定方法具有指导意义。     

4个加工番茄新品种SSR指纹图谱的构建与品种鉴定

[目的]探明加工番茄主要品种的遗传变异,建立准确高效的种子纯度鉴定方法.[方法]利用SSR引物对4个加工番茄杂交品种及其8个亲本进行PCR扩增,经4;的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,进行带型分析.[结果]从34对SSR引物中筛选出10对扩增产物具有稳定多态性的引物,这些引物分布在番茄整个基因组,每对引物可以检测到2～4个数目不等的多态性片段,共28个多态性片段,平均2.8个,片段大小介于60～150 bp,成功构建出4个加工番茄杂交种及其8个亲本的指纹图谱,并鉴定出了这4个杂交种的共显性标记.[结论]这些标记不仅可用于亲本材料和杂交品种的真伪鉴别,还可为杂交种纯度的鉴定提供可靠的方法,对亲本知识权的保护及杂交种推广具有重要意义.     

茄子SSR多态性标记筛选及杂交种纯度鉴定

[目的]建立一套快速、准确、高效的茄子杂交种纯度鉴定方法,为其制种过程中除伪存真及大面积推广应用提供技术支持.[方法]挑选已公布的48对SSR引物对2个茄子杂交种15-16和1-7的亲本进行多态性标记筛选,选取有效引物对茄子杂交种进行纯度鉴定,并结合田间植株纯度鉴定,验证SSR分子标记纯度鉴定的有效性.[结果]在48对SSR引物中,有12对引物在杂交种15-16亲本材料中存在多态性,其多态性引物带型呈互补带型的有8对(SM14、SM15、SM17、SM20、SM29、SM30、SM34和SM45);有5对引物在杂交种1-7亲本材料中存在多态性,其多态性引物带型呈互补带型的有4对(SM15、SM20、SM24和SM29).分别选取2对呈互补带型的SSR引物进行杂交种纯度鉴定,结果显示杂交种15-16和1-7的纯度分别为99%和100%,与田间种植鉴定结果一致.[结论]采用SSR分子标记检测茄子杂交种纯度具有准确、高效的特点,可为茄子杂交制种过程中真假杂种鉴定提供技术支持.     

利用SSR标记鉴定抗虫三系杂交棉邯杂429的纯度

以三系杂交棉邯杂429及其亲本为试验材料,进行了SSR分子标记。从196对引物中筛选到3对带型稳定、在杂交种中呈现双亲互补型的SSR引物,为该杂交种纯度的快速鉴定奠定了基础。结果表明：利用SSR分子标记技术结合单粒棉种DNA快速提取方法,可以快速、准确地鉴定棉花杂交种的种子纯度。     

陆两优996种子纯度的SRAP指纹图谱鉴定

利用270对SRAP引物对陆两优996和2个亲本的DNA指纹图谱,获得能在父、母本间表现出多态性的特异SRAP标记引物有54对,其中差异性条带136个。利用Me3Em8引物,条带在杂交种完全互补,对200株样本进行了纯度鉴定,结果鉴定纯度为97.50%,与田间种植鉴结果97.50%(海南鉴定)一致,表明SRAP标记技术适用于种子纯度鉴定。