孕酮处理对蛋鸡蛋壳钙化过程中CaBP-d28k基因表达的影响

实验旨在研究孕酮对蛋鸡CaBP-d28k基因表达的影响。对产蛋高峰期蛋鸡进行孕酮和孕酮受体拮抗剂(RU-486)处理,利用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR),测定在蛋壳形成过程中输卵管子宫部钙结合蛋白(CaBP-d28k)、孕酮受体(PGR)的表达量;同时对血液中钙离子和孕酮浓度变化进行测定。结果表明:孕酮处理后,血液中钙离子浓度显著降低(P<0.05),输卵管子宫部CaBP-d28k表达量也显著降低(P<0.05);孕酮受体拮抗剂处理后,血液中钙离子浓度显著升高(P<0.05),输卵管子宫部CaBP-d28k表达量极显著升高(P<0.01)。结果提示,在蛋壳钙化过程中,孕酮对CaBP-d28k表达和钙离子转运起负调控作用。     

蛋鸡不同产蛋期生殖器官中OC17,OC116和OCX32 mRNA相对定量研究

Ovocleidin-17(OC17),Ovocleidin-116(OC116)和Ovocalyxin-32(OCX32)是蛋壳中的特异性基质蛋白,对蛋壳的钙化有重要的调节作用。本试验采用RT-PCR、RT-QPCR分别检测了蛋鸡在产蛋初期、高峰期和后期的卵巢、输卵管的伞部、膨大部、峡部以及子宫部OC17、OC116和OCX32的表达量变化。结果显示:在不同产蛋期3个基因在输卵管峡部和子宫部的表达量均显著或极显著(P0.05或P0.01)高于其他组织;卵巢和输卵管中OC17、OC116和OCX32在产蛋高峰期,初期和后期的表达量变化存在显著或极显著差异(P0.05或P0.01);3个产蛋期OCX32在5个组织中的表达量均极显著高于OC17和OC116(P0.01)。研究结果揭示了蛋壳特异性基质蛋白基因OC17、OC116和OCX32在不同产蛋期蛋鸡生殖器官中的表达规律,为蛋壳形成的分子机理研究提供了理论依据。     

子宫内膜炎患牛子宫内膜PGR和ESR-1 mRNA的表达特征

为探讨卵巢激素及其子宫内膜受体在奶牛子宫内膜炎中的作用,以产后6～10d健康及患急性化脓性子宫内膜炎的中国荷斯坦奶牛为研究对象,通过ELISA法检测子宫内膜中PGF2a,血清中孕酮和雌二醇浓度,SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测子宫内膜PGR和ESR-1mRNA的表达。结果显示,病牛子宫内膜PGF2α水平为（6.503±0.122）μg/L,血清孕酮为（0.816±0.281）μg/L,血清雌二醇为（35.462±2.523）μg/L,而对照组分别为（14.408±0.285）,（0.543±0.142）,（37.6±1.317）μg/L;子宫内膜炎患牛组PGF2a水平极显著低于对照组（P〈0.01）,孕酮含量显著高于对照组（P〈0.05）,PGF2a与孕酮水平呈显著负相关（r=0.893）,雌二醇含量组间差异不显著。PGR基因的mRNA水平极显著高于对照组（P〈0.01）,而ESR-1基因的mRNA水平低于对照组,且差异极显著（P〈0.01）。上述结果表明,孕酮浓度显著升高及PGR mRNA高表达,可能抑制子宫收缩;ESR-1mRNA低表达使子宫新陈代谢减慢,子宫内膜合成PGF2a功能下降,这些改变有可能促进了产后子宫内膜炎的发生发展。     

蛋鸡输卵管子宫部蛋壳钙化节律及其分子调控途径

高产蛋鸡具有近似24 h的产蛋规律(近日节律),被排出卵巢的卵在输卵管各部位具有相对固定的停留时间,其中停留于子宫部的时间最长。时钟基因是生物钟的最基本组成单位,其节律性表达预示着生物钟的存在,研究发现时钟基因调控动物繁殖周期,并且在鸡输卵管子宫部中节律性表达,输卵管子宫部是蛋壳形成的主要部位,可以推测生物钟存在于输卵管子宫部,时钟基因通过发条机制调控蛋壳形成相关离子、离子通道蛋白、离子结合蛋白、蛋壳特异性基质蛋白等下游蛋壳形成相关基因节律性表达,从而保证蛋壳按序合成和蛋鸡产蛋的连续性。     

CaBP-D28k在蛋鸡生殖器官中的表达及其与蛋品质性状的关联分析

研究采用荧光定量PCR技术对Ca BP-D28k在蛋鸡生殖器官中的表达量进行分析,并利用SSCP技术寻找Ca BP-D28k的SNPs位点,继而与蛋品质性状进行关联分析。结果表明:1 Ca BP-D28k在各部位的表达情况为:输卵管子宫部输卵管伞部卵巢输卵管膨大部输卵管峡部。以卵巢为参照基准1,输卵管子宫部Ca BP-D28k表达量约为其73倍,差异极显著(P0.01),输卵管峡部、膨大部与卵巢Ca BP-D28k表达量差异显著(P0.05)。2 Ca BP-D28k第三外显子存在A5115G的突变位点,共检测到3种基因型(AA、AG和GG)。AG型蛋壳强度极显著高于AA和GG型(P0.01),GG型哈氏单位与AA和AG型存在显著差异(P0.05)。结果表明,Ca BP-D28k在蛋鸡生殖器官中有相对量的差异,并与蛋壳形成过程中钙离子的转运有密切联系;AG型为调控蛋壳强度和哈氏单位的优势基因型,研究结果为SNPs辅助选择育种提供了理论基础。     

传染性支气管炎病毒感染对蛋雏鸡输卵管雌激素受体及孕激素受体表达的影响

以不同传染性支气管炎病毒（肾型IBV-河北分离株与呼吸型IBV-M41）分别感染蛋雏鸡,通过测定输卵管蛋白分泌部及子宫雌激素受体（Estrogen receptor,ER）和孕激素受体（Progesterone receptor,PR）的表达水平,来探讨IBV早期感染（10d）对抑制蛋鸡输卵管发育的作用机制。结果显示,IBV感染降低子宫和蛋白分泌部ER mR-NA、PR mRNA的表达水平,即致子宫ER mRNA和PR mRNA的表达低于检测水平;蛋白分泌部ER mRNA和PR mRNA的表达水平显著降低（P〈0.01）,且M41的作用幅度较肾型IBV更为显著（P〈0.01）。结果表明,IBV可通过降低ER和PR的表达水平,抑制输卵管对雌激素的应答能力而影响输卵管的发育。     

不同产蛋周龄肉种鸡血清类固醇激素代谢水平分析

该试验旨在研究不同产蛋周龄肉种鸡各级卵泡发育的变化及血清类固醇激素的代谢差异。随机选择开产期（24周龄），产蛋高峰期（28周龄）及产蛋后期（47周龄）的肉种鸡各6只，通过液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）检测不同产蛋周龄肉种鸡血清中类固醇激素水平。结果表明：与产蛋高峰期相比，产蛋后期肉种鸡卵巢内小黄卵泡数目极显著增加（P<0.01），血清中孕酮在开产期浓度最高，极显著高于产蛋高峰期（P<0.01）;11-脱氧皮质醇和睾酮的含量在产蛋高峰期最高；开产期次之，而产蛋后期含量最低；孕酮和雌二醇的水平在产蛋高峰期最低，而在产蛋后期含量升高；在产蛋后期，雌二醇的含量极显著高于产蛋高峰（P<0.01），孕酮水平显著高于产蛋高峰期（P<0.05）；雌二醇水平在产蛋后期显著高于开产期（P<0.05）;17-羟基孕烯醇酮随着产蛋周龄的增加，含量逐步增加，但不同周龄间差异不显著。结果表明产蛋中后期肉种鸡产蛋量下降可能与小黄卵泡向等级卵泡发育受到阻碍及雌二醇和孕酮水平的显著增加相关。     

ESR1与PGR基因在不同繁殖力小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢轴的表达研究

本试验旨在揭示ESR1和PGR基因在小尾寒羊多羔性状中的作用,深入研究绵羊多羔性状的机理。采用半定量反转录-聚合酶链式反应结合实时荧光定量PCR技术检测ESR1和PGR基因在不同繁殖力小尾寒羊群体12个组织(小脑、下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏)中的表达差异。结果表明:ESR1和PGR基因在不同繁殖力小尾寒羊群体的12个组织中均有表达;ESR1和PGR基因分别在小尾寒羊子宫和输卵管中高表达;多羔小尾寒羊子宫、输卵管、卵巢和下丘脑组织中ESR1基因的表达量与单羔小尾寒羊无显著差异(P0.05);多羔小尾寒羊输卵管、子宫、卵巢和下丘脑组织中PGR基因的表达量极显著高于单羔小尾寒羊群体(P0.01)。结果提示,PGR基因可能参与小尾寒羊多羔性状的调控。     

小鼠营养性肥胖对其生殖器官中mPRα、mPRβ、mPRγ基因表达的影响

为探究营养性肥胖对小鼠生殖器官发育及孕酮膜受体基因在子宫、卵巢、输卵管中表达的影响,试验通过饲养昆明雌鼠40只,随机分为高脂组(n=20)和普通组(n=20),分别给予高脂饲料与普通饲料,构建小鼠的营养性肥胖模型。小鼠喂养8周后,通过测量体重,高脂组比对照组提高28.47%(P 0.01),肥胖模型构建成功,并采集子宫、卵巢、输卵管进行称重,再通过定量PCR测定mPRα、mPRβ、mPRγ在子宫、卵巢、输卵管的表达。结果发现:8周后,高脂小鼠子宫和卵巢体重较对照组分别降低68.39%和75.27%(P 0.05);高脂组子宫和输卵管中mPRα表达量较对照组分别降低8.65%和46.50%(P 0.05),高脂组卵巢中m PRα表达量较对照组降低45.25%(P 0.05);高脂组小鼠卵巢、输卵管、子宫中mPRβ表达量较对照组分别降低59.26%、10.25%和8.96%(P 0.05);高脂组在卵巢、输卵管中m PRγ表达量较对照组分别降低10.16%、59.15%(P 0.05),高脂组子宫中mPRγ表达量较对照组降低48.65%(P 0.05)。结果说明营养性肥胖通过对小鼠子宫、卵巢、输卵管体重的影响进而降低孕酮膜受体基因的表达。     

M41型IBV对输卵管中雌激素、孕激素受体及胰岛素生长因子-Ⅰ表达的影响

本试验通过相对定量RT-PCR检测接种M41型鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)对蛋鸡输卵管各部分(蛋白部、峡部、伞部和子宫)雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA表达的影响,研究IBV早期感染(10 d)抑制蛋鸡输卵管发育的作用机制。结果显示,输卵管各部均有ER、PR和IGF-Ⅰ mRNA的表达,染毒组ER、PR mRNA的表达量较正常对照组显著减少(P＜0.05),而IGF-Ⅰ的表达量较正常对照组显著增加(P＜0.05)。可见IBV可通过降低ER和 PR mRNA的表达水平,抑制输卵管对雌激素的应答能力而影响输卵管的发育;而IGF-Ⅰ可能是以自分泌、旁分泌方式在输卵管局部起作用,是输卵管生长的调节因子。     

海兰褐蛋鸡卵巢与输卵管ESR基因定量研究

为了研究海兰褐蛋鸡卵巢、输卵管漏斗部(以下简称漏斗部)与输卵管子宫部(以下简称子宫部)雌激素受体基因表达水平,试验采用荧光定量PCR技术检测蛋鸡的卵巢、漏斗部与子宫部的雌激素受体表达情况。结果表明:漏斗部组织ESR1 mRNA表达水平与其他两组相比差异极显著(P0.01);子宫部、卵巢组织ESR1 mRNA表达水平差异不显著(P0.05)。说明雌激素受体与漏斗部功能可能存在着密切的关系。     

SLCO1C1和SLCO4C1基因与绿壳蛋鸡不同产蛋期壳色相关性研究

为探究SLCO家族基因与绿壳蛋壳色的关系,试验以产绿壳蛋母鸡为试验样本,分别收集产蛋前期(150日龄)和产蛋后期(500日龄)的鸡蛋、心脏、肝脏、脾脏、肌肉、卵巢、壳腺组织和血样样品,采用色差仪测定壳色数值;ELISA方法检测血清中血红素加氧酶1(HO-1)的含量;利用荧光定量PCR测定HO-1和SLCO家族基因的表达。结果显示：产蛋前期蛋壳L^*值极显著低于产蛋后期(P<0.01),而b^*值极显著高于产蛋后期(P<0.01);产蛋前期血清中HO-1含量和壳腺中HO-1表达量极显著高于产蛋后期(P<0.01);SLCO1C1和SLCO4C1在壳腺中特异性表达,SLCO1A2在肝脏中特异性表达;产蛋前期SLCO1C1和SLCO4C1 mRNA表达量显著高于产蛋后期(P<0.05)。结果表明HO-1基因表达与酶活性下降造成绿壳蛋鸡壳色变浅,SLCO1C1和SLCO4C1可能是胆绿素合成和转运的重要基因。     

非正常蛋产生原因的分析

只有蛋黄蛋白，没有蛋壳形成的鸡蛋。其发生的原因有5种情况：①日粮中钙量长期不足，并使骨骼中的血钙已不能再度调用时，直接造成无壳蛋的发生；②蛋鸡感染了大肠杆菌、沙门氏杆菌，病原菌在消化道内大量繁殖，使肠道吸收功能下降，导致钙量吸收严重不足；③蛋壳腺细胞遭到病毒破坏发生变形，使蛋壳形成严重障碍；④鸡体钙盐不能有效利用，如产蛋鸡内服金霉素等药物后跟血钙结合，形成难溶性钙盐排出体外，从根本上影响蛋壳的形成；⑤蛋在输卵管子宫部中停留时间不足，如产蛋鸡因急性应激反应，使上枚蛋在子宫中停留时间过长，额外沉积了不需要的钙，从而导致本枚蛋不能及时进入子宫部形成蛋壳。     

出生后发育时期济宁青山羊乳腺中ERα和PR的分布及其mRNA表达

本研究旨在探讨济宁青山羊出生后发育过程中乳腺组织内雌激素受体α(ERα)和孕激素受体(PR)免疫阳性细胞的分布及平均光密度和mRNA分子水平的表达规律.应用SP免疫组化法和图像分析方法检测ERα和PR在济宁青山羊乳腺内的分布;以GAPDH为内参基因,qRT-PCR方法检测ERα和PR mRNA的相对表达量.结果表明,ERα和PR阳性染色主要见于乳腺组织内的血管内皮细胞、基质细胞和腺管上皮细胞的细胞核中,偶见胞浆阳性着色,180日龄在腺泡上皮细胞亦可见PR阳性表达;ERα和PR平均光密度自出生～性成熟期呈现逐渐上升的趋势,且性成熟期显著高于出生当天和初情期(P＜0.05),但与180日龄相比无显著差异(P＞0.05).qRT-PCR结果显示,ERα mRNA的表达量自出生～性成熟期呈现逐渐上升趋势,性成熟期最高,极显著高于出生当天和初情期(P＜0.01),180日龄略有下降.PR mRNA表达量自出生当天～性成熟期较低且组间差异不显著(P＞0.05),180日龄的表达量最高且极显著高于其他的3组(P＜0.01).济宁青山羊出生后发育过程中,ERα对腺管伸长和上皮分化以及PR对腺管分支和腺泡发育起促进作用.     

葛根素对乳腺组织雌激素及孕酮受体基因表达的影响

试验通过研究葛根素对乳腺组织中孕酮激素受体基因和雌二醇受体基因表达的影响,探讨葛根素对乳腺发育的影响,采用荧光定量RT-PCR方法检测小鼠乳腺组织中孕酮受体基因和雌二醇受体基因的表达.结果:与对照组相比,葛根素组小鼠ER表达量显著高于对照组(P＜0.05),而葛根素试验组小鼠PR表达量与对照组相比差异不显著(P＞ 0.05).结论: 葛根素具有上调乳腺组织ER表达的作用,这是其促乳腺发育的作用机理之一.     

妊娠期母鼠暴露BPA对子代断乳雌鼠生殖激素水平与受体含量以及卵巢DNA甲基化的影响

为探究母鼠妊娠期暴露双酚A(bisphenol A,BPA)对子代雌鼠生殖激素的影响及BPA与机体发生作用的分子机制。通过灌服不同剂量的BPA制造孕鼠BPA暴露模型,然后计算子代小鼠断乳时的死亡率、卵巢与子宫系数;放射免疫法检测血清中雌二醇(E_2)、孕酮(P_4)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)含量;qPCR法检测卵巢DNA甲基转移酶1(Dnmt1),DNA甲基转移酶3A(Dnmt3A),DNA甲基转移酶3B(Dnmt3B),孕酮受体(PgR)及雌激素受体α(EsR1)mRNA表达。结果显示,子代雌鼠的相关指标与母鼠妊娠期BPA暴露存在非单调性剂量-反应关系;卵巢系数、E_2含量与BPA剂量呈现"U"型关系;子宫系数,血清P_4、FSH、LH水平,卵巢ERβ含量,卵巢Dnmt1、 Dnmt3A、 Dnmt3B mRNA相对转录水平与BPA剂量呈现"波浪式"关系;卵巢PgR、EsR1 mRNA相对转录水平与BPA剂量呈现"倒U"型关系;且BPA暴露组与空白组相比有极显著差异(P0.01)。这表明BPA可能通过增强子代雌鼠DNA甲基化酶的转录活性使生殖激素分泌紊乱,造成子代生殖损伤。     

蜂王浆对初情期前雌性日本大耳兔生长发育的影响

本研究旨在探讨蜂王浆对雌性日本大耳兔初情期前的生长发育影响。将36只50日龄雌性日本大耳兔随机分为高剂量蜂王浆组(H-RJ)、低剂量蜂王浆组(L-RJ)以及对照组(C),每组12只。高、低剂量组分别按体质量0.2%和0.1%的量每天进行空腹灌胃蜂王浆,对照组灌胃体质量0.1%的生理盐水。每周同一时间空腹称重。40d后,所有兔子耳静脉取血后各组处死6只,摘取心脏、左侧卵巢和左侧子宫称重,并冷冻保存右侧卵巢和右侧子宫。采用放免法测定血清中雌二醇(E2)、促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、孕激素(P4)、催乳素(PRL)和睾酮(T)的含量;用实时荧光定量PCR检测右侧卵巢中雌激素β受体(ERβ)mRNA和右侧子宫中雌激素α受体(ERα)mR-NA的表达。结果表明:灌胃蜂王浆12d后,对照组兔子没有换毛现象,低剂量和高剂量组分别有75%和67%的兔子换毛;蜂王浆对体质量和心脏、左侧子宫、左侧卵巢的脏器系数无显著影响(P>0.05)。试验组血液中E2浓度极显著高于对照组(P<0.01),而其它性激素无明显差异(P>0.05)。试验组ERα在子宫和ERβ在卵巢的表达量均低于对照组,对照组与高剂量组的差异极显著(P<0...     

妊娠期环境雌激素双酚A暴露对子代成年雌鼠的生殖损伤作用

为探究母鼠妊娠期暴露双酚A(BPA)对子代成年雌性小鼠生殖损伤作用及DNA甲基转移酶(DNMT)基因表达量的影响,将120只妊娠母鼠随机分为6组,每组20只。各组分别在母鼠孕0.5～17.5 d内按0、2.5、5、10、20、40 mg·(kg·d)~(-1)剂量灌胃BPA。每组随机选取10只子代成年(56 d)雌鼠,麻醉后处死,收集血液、子宫和卵巢;统计子鼠成年时子宫和卵巢指数;HE染色观察子代雌鼠卵巢的组织形态学变化;放射性免疫法检测子代雌鼠血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)和孕酮(P_4)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测子代雌鼠卵巢内雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)的含量;实时荧光定量PCR法检测子代雌鼠卵巢内ERα、孕酮受体(PgR)、DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA转录水平。结果显示,BPA显著降低子代雌鼠血清FSH、LH、E_2和P_4水平,显著提高子代雌鼠卵巢ERα和ERβ含量,显著降低子代雌鼠卵巢ERα、PgR和DNMT mRNA的转录水平(P0.05或P0.01)。BPA暴露子代小鼠成年时卵巢和子宫指数增大,HE染色观察卵巢实质发生萎缩,初级和次级卵泡数量增加。本研究表明,妊娠期暴露BPA可促进成年子鼠卵巢产生卵泡,显著降低生殖激素的含量及活性,显著增加卵巢激素受体的含量,抑制卵巢激素受体和DNMT的转录,对子代产生生殖损伤。     

不同营养状态大鼠胃和小肠ERα的表达

为探讨不同营养应激对大鼠胃和小肠内雌激素受体α(ERα)表达的影响,本试验用免疫组织化学SP法分别对标准营养、高营养和低营养条件下健康雄性SD大鼠胃和小肠内ERα阳性细胞的分布和数量变化进行研究.结果发现,ERα阳性细胞在大鼠的胃和小肠内均有分布,以胃的黏膜固有层胃底腺区和小肠的固有层及黏膜下层分布为主.低营养组ERα的表达量显著低于其他组(P＜0.01);低营养恢复标准营养后,胃中ERα的表达量无明显变化,小肠中ERα的表达量极显著升高(P＜0.01);高营养组恢复到标准营养后,胃中ERα表达量显著减少(P＜0.05),十二指肠和空肠中ERα表达量极显著减少(P＜0.01),回肠无明显变化.表明ERα参与食物应激反应中胃肠道的消化和吸收和免疫调节活动.     

黑羽番鸭PRL、PRLR基因序列分析及表达规律研究

催乳素(Prolactin,PRL)由动物垂体前叶分泌,与其受体(Prolactin receptor,PRLR)相结合才能作用于靶细胞。为了解PRL与PRLR基因在黑羽番鸭不同繁殖阶段各组织内的时空表达规律,利用RACE扩增方法获得了PRL与PRLR基因的CDS区序列,同时应用荧光定量与免疫组化相结合的方法,对产蛋前期、产蛋期、就巢期的黑羽番鸭垂体、卵巢、子宫中PRL与PRLR基因的表达量进行了比较分析。结果显示:PRL与PRLR基因序列在多种禽类中高度同源;PRL基因在垂体、卵巢、子宫中m RNA的表达具有明显的空间特异性,PRL基因在垂体中表达量最高,极显著高于卵巢和子宫中的表达量(P0.01),这种趋势贯穿产蛋前期、产蛋期和就巢期。PRLR基因在不同时期各组织内m RNA的表达具有明显的时空特异性。PRLR基因的表达量在垂体、卵巢中的表达量普遍较低,子宫中的表达量最高。PRLR基因在不同时期垂体和卵巢中的表达量没有明显的差异(P0.05),而子宫中的表达量在就巢期显著高于产蛋前期与产蛋期(P0.05)。