柑橘愈伤组织内源激素代谢与体细胞胚胎发生能力关系的研究Ⅰ.柑橘不同愈伤组织体细胞胚胎发生能力的比较

为了探明柑橘愈伤组织内源激素代谢与体细胞胚胎发生能力的关系，研究了长期继代保存的纽荷尔脐橙和伏令夏橙不同愈伤组织的体细胞胚胎发生.结果表明，无论是在加有3%蔗糖的MT增殖培养基上，还是在加有30 mL/L甘油的MT分化培养基上，纽荷尔脐橙的胚性愈伤组织和二倍体伏令夏橙愈伤组织的体细胞胚胎发生能力均较强，而纽荷尔脐橙的非胚性愈伤组织，四倍体和六倍体伏令夏橙愈伤组织的体细胞胚胎发生能力较弱.     

不同甜橙品种胚性愈伤组织的诱导

胚性愈伤组织是柑橘利用珠心胚脱毒及原生质体融合等生物技术育种的重要材料,本研究以赣南早脐橙、纽荷尔脐橙和哈姆林甜橙不同发育时期果实的珠心胚作为外植体进行离体培养,研究不同成熟期、不同激素对3个品种未受精胚珠愈伤组织诱导率的影响,旨在建立一个高效的柑橘胚性愈伤组织诱导体系。结果表明:6-BA对柑橘愈伤组织诱导效果显著,3个品种在果实发育中期取样可以获得高质量的胚性愈伤组织,取材太早或太迟都不利于胚性愈伤组织的诱导。赣南早脐橙、纽荷尔脐橙和哈姆林甜橙诱导胚性愈伤的最佳取样时间分别为105、95和95 d,胚性愈伤率分别可达到35.90%、56.21%和65.08%。赣南早脐橙胚性愈伤组织的最佳诱导培养基是在MT培养基基础上添加7.5 mg·L^-1 6-BA,纽荷尔脐橙和哈姆林甜橙的最佳诱导培养基是在MT培养基基础上添加5.0 mg·L^-1 6-BA。     

柑橘愈伤组织体细胞胚胎发生能力的研究进展

在植物繁殖和遗传操作中,研究离体再生体系所面临的主要问题是胚胎发生能力和器官发生能力的丧失。愈伤组织体细胞胚胎发生能力的强弱对植物资源离体安全保存和生物技术遗传改良具有重要价值。对影响体细胞胚胎发生的外源因子、体细胞胚胎发生的分子基础,柑橘愈伤组织长期保存过程中DNA含量的变异和倍性的变化与体细胞胚胎发生能力的关系进行了综述。同时结合过去长期的研究经验、指出改变不同品种柑橘愈伤组织的基因型可能是提高其体细胞胚胎发生能力的有效途径。     

碳源对柑橘愈伤组织生长及体细胞胚胎发生能力的影响

为探讨继代多年的柑橘愈伤组织不能再生胚状体的原因,寻找碳源与柑橘愈伤组织体细胞胚胎发生之间的关系和选择柑橘愈伤组织快速生长的最佳碳源,本文就碳源对柑橘愈伤组织生长及体细胞胚胎发生能力的影响进行了探讨。结果表明:蔗糖和葡萄糖有利于柑橘愈伤组织生长,乳糖和甘油对柑橘愈伤组织的生长影响较小,而可溶性淀粉不利于柑橘愈伤组织的生长。不同碳源对具有体细胞胚胎发生能力的柑橘愈伤组织的影响各异,但对于失去再生能力的柑橘愈伤组织而言,不同碳源对其体细胞胚胎发生不起作用。     

蝴蝶兰愈伤组织诱导和体细胞胚胎发生的研究

研究了蝴蝶兰愈伤组织的诱导和通过体细胞胚胎发生的植株再生。原球茎在含有蔗糖的VW培养基上形成愈伤组织。结果表明,最有效的诱导愈伤组织的培养基为VW+0.1 mg/L BA+0.1 mg/L 2,4-D+60 g/L蔗糖或者VW+0.3 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+40 g/L蔗糖。愈伤组织在被转到不含植物激素的VW培养基上易形成原球茎。组织学观察证实了体细胞胚胎结构的形成,暗示了试验中诱导的愈伤组织即为体细胞胚。     

柑橘愈伤组织植株再生及其倍性鉴定

愈伤组织保存是柑橘种质资源保存的一条值得探索的途径,具有节省人力、物力、财力以及避免自然灾害和病虫害等优点。研究表明[1],待测的35种基因型的愈伤组织中,只有9种具有体胚发生能力。对于具有体胚发生能力的愈伤组织,它们能否长成正常的植株,这对于利用愈伤组织进行细胞融合或遗传转化等生物技术研究具有非常重要的指导意义。本试验以具有体胚发生能力的8种愈伤组织为试材,分析其体细胞胚胎发生能力与再生植株生长状态的关系,通过改变培养基配方来诱导胚性愈伤组织畸形胚状体分化,为细胞融合和遗传转化提供参考。通过鉴定再生植株的倍…     

3种柑橘亚科植物的珠心组织培养

柑橘亚科植物九里香、麻纹叶和酒饼叶的珠心组织,在附加500mg·L-1麦芽浸出液的MT培养基中产生愈伤组织.愈伤组织在几种不含任何附加物的培养基上继代培养均能获得胚性愈伤组织.胚性愈伤组织的获得率以MT培养基最高,MT培养基优于MS培养基的关键是2种B族维生素的用量较高.胚性愈伤组织在含50g·L-1蔗糖的培养基中产生体细胞胚胎.3种植物的体细胞胚胎在1mg·L-1GA的条件下均获得了90%以上萌发率,并再生成完整植株.     

龙眼胚性愈伤组织的高频率体细胞胚胎发生

比较了龙眼不同类型胚性愈合伤组织，品种，蔗糖质量浓度，有机附加物，生长调节剂，光照度等因素对龙眼胚性愈组织体胚诱导的影响，结果表明，在优经的体胚发生条件下，选择适宜的胚性愈伤组织类型，可获得龙眼胚性愈伤组织的高频率体细胞胚胎发生，在低质量浓度蔗糖（≤３０ｇ．Ｌ＾－１）和黑暗条件下，松散型胚性愈伤组织的体胚分化频率为１００％，并且发生数量可达每克１万个左右。     

越南紫薯胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎形成

【目的】越南紫薯〔Ipomoea batatas（L.）Lam〕品质优良,薯块均匀,商品性好,但产量偏低,产量性状亟待遗传改良,体细胞胚胎发生是快速繁殖和保持种性稳定的基础,对紫薯的遗传改良有重要意义。采用激素处理越南小紫薯外植体,研究越南紫薯的体细胞胚胎再生途径,为通过体细胞无性系变异筛选紫薯高产优质新材料提供新方法。【方法】以市场销售的越南紫薯为材料,以叶片和茎段作外植体,探讨植物生长调节物质种类（6-BA、NAA、2,4-D、ABA）及配比对越南紫薯培养的影响,建立越南紫薯体细胞胚胎发生及再生植株体系。【结果】叶片和茎段诱导愈伤组织培养基相同,难易程度一致,诱导配方为 MS+6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L;在普通愈伤组织诱导形成胚性愈伤组织过程中,2,4-D 起重要作用,其他激素起辅助作用,较好的诱导配方为 MS+6-BA 0.1 mg/L + 2,4-D 2.0 mg/L;在胚性愈伤组织诱导产生体细胞胚过程中,ABA 起着重要作用,并进一步发育和分化的适宜的培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 0.2 mg/L + ABA 0.5 mg/L。【结论】叶片和茎段愈伤组织诱导最佳培养基为 MS+6-BA 1.0 mg/L+0.2 mg/L NAA,愈伤组织转化为胚性愈伤最佳培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L +2,4-D 2.0 mg/L;胚性愈伤形成体细胞胚胎最佳培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 0.2 mg/L + ABA 0.5 mg/L。     

沙田柚杂种胚性愈伤组织的诱导及遗传鉴定

【目的】沙田柚（Citrus grandis [L.] Osbeck cv.Shatian）是中国的特有品种，其愈伤组织难以诱导。为进一步进行细胞工程研究，本研究通过与其它品种杂交的方法获得杂种胚性愈伤组织。【方法】以沙田柚为母本，用体细胞杂种橘柚+无酸甜橙 ([C.reticulata Blanco× C.paradisi Macf.] cv.Nova+C.sinensis [L.] Osbeck cv.Succari)为父本进行杂交，90 d后将幼胚取出，在MT + ME（麦芽提取物，500 mg·L-1）和MT + GA3（1 mg·L-1）两种固体培养基上培养。【结果】幼胚培养约5个月左右，在两种培养基上从胚状体和幼小植株的下胚轴处都长出了可继代保存的胚性愈伤组织，经细胞流式仪和SSR鉴定，该胚性愈伤是三倍体杂种愈伤，继代保存两年后，在MT+乳糖（50 g·L-1）培养基上仍可以产生大量的胚状体，具有较强的胚状体发生能力。【结论】沙田柚与体细胞杂种杂交后，可以较容易地获得其杂种的胚性愈伤，对沙田柚种质资源的保存和利用具有重要价值。     

电场诱导融合再生两个柑桔种间体细胞杂种

通过电场诱导融合方法分别获得了续荷尔脐橙与粗柠檬、纽荷尔脐橙与夔柑两个组合的体细胞杂种。纽荷尔脐橙＋粗柠檬级合获得了４５棵再生植株。对其中的３０棵株进行染色体检查,结果表明,全为四部体,２ｎ＝４ｘ＝３６。过氧化物同工酶及ＲＡＰＤ分析表明再生植株为体细胞杂种。续荷尔脐橙＋夔柑组合获得了２５株再生植株。染色体检查结果表明,全为四倍体,２ｎ＝４ｘ＝３６。ＲＡＰＤ分析表明再生植株为体细胞杂种。     

套袋对脐橙果实品质的影响

为不断提高脐橙的生产技术和果实的品质，以湖南新宁县宝丰园艺中心和安化无病虫柑桔良种繁殖场的主栽脐橙品种为试材，于2001年进行果实套袋对比试验，结果表明，套袋能显著改进果实外观品质，对果实的增长有促进作用，干旱情况下效果更显著，套袋使脐橙果实可溶性固形物、总糖含量有所降低，但差异不显著，单层黑袋与双层黑袋对果实品质的改进效果差异不大，从降低成本考虑，宜选用单层黑袋。     

Induction and Genetic Identification of Embryogenic Calli from Hybrids of Shatian Pummelo

Shatian pummelo （Citrus grandis L. Osbeck cv. Shatian） is an elite variety in China, and the regeneration of the embryogenic callus is difficult. Diploid Shatian pummelo was used as the female and crossed with the allotetraploid somatic hybrid NS （Nova Tangelo ＋ Succari Sweet orange）, [ （ C reticulata Blanco x C. paradisi Macf.） cv. Nova ＋ C sinensis L. Osbeck cv. Succari]. About 90 days after pollination, the embryos obtained from crosses were cultured on the solid media of MT ＋ ME （malt extraction, 500 mg L^-1） and MT ＋ GA3 （1 mg L^-1）. The embryogenic callus was initiated from the embryoids and plantlets＇ hypocotyls and could be subcultured. Flow cytometry and SSR analysis verified that the callus was from the triploid hybrids. The callus had embryogenesis capacity and produced a large number of embryoids on MT ＋Lactose （50 g L^-1） medium after being subcultured for two years. It is comparatively easier to obtain the callus from the hybrid embryo than from Shatian pummelo itself. The callus is valuable for the conservation and utilization of Shatian pummelo.     

2种不同中间砧/基砧组合的纽荷尔脐橙树体特征和营养特性

通过连续2a田间试验，比较纽荷尔脐橙高接在2种不同基砧／中间砧组合上的树体特征和营养特性差异，表明锦橙／红桔组合投产显著地晚于国庆1号温州蜜柑／枳组合(对照)。锦橙／红桔组合比国庆1号温州蜜柑／枳组合树势生长强旺，枝条较直立，树冠郁闭；2种组合树体生长势和新梢生长量存在不同的年际间差异特点。2种组合叶片的单叶光合潜力无明显差异，叶绿素a/b值分别存在年际间差异且具有相同的相对大小趋势。锦橙／红桔组合叶片可溶性糖有低于国庆1号温州蜜柑／枳组合的趋势，而淀粉含量有高于国庆1号温州蜜柑／枳组合的趋势；2种组合的3种糖份指标存在年际间差异且分别具有相同的相对高低关系。锦橙／红桔组合叶片N、P含量比国庆1号温州蜜柑／枳组合低，Fe、Ca、K含量和C／N水平比国庆1号温州蜜柑／枳组合高；2种组合的C／N值、N、P、Ca和Fe含量年际间差异特点分别相同，而K含量则具有相反的年际间差异趋势。     

龙眼体细胞胚胎发生过程中内源多胺的变化

采用高效液相色谱测定了龙眼胚性愈伤组织体胚发生过程中内源多胺含量的变化.结果表明:龙眼胚性愈伤组织中内源多胺含量比非胚性愈伤组织高;体胚发生过程中内源多胺含量变化趋势大致呈“M”状,在胚性愈伤组织Ⅱ和球形胚阶段转折;内源多胺含量的变化先于形态学的变化.     

龙眼胚性愈伤组织体胚发生同步化调控及组织细胞学观察

以龙眼“红核子”胚性愈伤组织为材料 ,对龙眼体细胞胚胎发生进行同步化调控 ,并采用石蜡切片进行组织形态学观察 .结果表明 ,通过控制培养基中 2 ,4-D质量浓度可以调控龙眼体胚的发育进程 ;龙眼胚性愈伤组织的胚胎发生一般是内起源 ,且起源于单细胞     

冰糖橙胚性愈伤组织的诱导与植株再生

以冰糖橙成熟果实中的未发育胚珠为外植体，培养诱导胚性愈伤组织并进行植株再生。结果表明：在不同的培养基和不同的培养条件下胚性愈伤组织和胚状体的发生频率不同；麦芽提取物和GA3有利于胚性愈伤组织的发生，暗培养有利于胚性愈伤组织的诱导；在MKBN(MT KT0．5mg／L BA0．5mg／L NAA0．1mg／L)培养养基上，胚状体的再生率达88．24％，以酸橙作砧木进行试管嫁接，嫁接成活率达88．89％。     

Effect of Different Hormone Combinations on Somatic Embryogenesis in Cotton Cultivar Xinluzao 33(Gossypium hirsutum L.)

[Objective] This study was conducted to evaluate the efficiency of somatic embryogenesis and plant regeneration for an upland cotton cultivar Xinluzao33 under the induction of different hormone combinations and thus to determine the optimal hormone combination. [Method] Calli of Xinluzao33(Gossypium hirsutum L.) were induced from seedling hypocotyl tissue by a range of DK and BK combinations. Embryogenic calli and embryos were induced on callus-inducing medium(CIM) without any hormones. Callus appearance and quality were compared to determine which medium was the optimal for callus induction. Embryogenesis ratio was calculated to determine which medium was the best for somatic embryogenesis and plant regeneration. [Result] Callus induction rate was 100% in all the 12 hormone combinations.The calli were yellow or kelly, and their texture was loose or soft under low concentrations of DK combinations, green or white, variably compact under high concentrations of DK combinations. The calli induced by BK combinations were kelly or green, covering creamy white substance. The best medium for callus induction was DK6(0.05 mg/L 2, 4-D and 0.10 mg/L KT). Embryogenic calli were successfully induced from all the combinations. The efficiency of embryogenic callus induction,embryogenesis, and plantlet regeneration were significantly different among the 12 combinations. The result showed that the embryogenesis ratio was the highest in BK3 combination(0.50 mg/L IBA and 0.50 mg/L KT), 72.86% of embryogenic calli differentiated into somatic embryos after being cultured on CIM for 80 d, and80.93% of the somatic embryos finally regenerated into plants on SEM(somatic embryo induction medium). [Conclusion] These results indicate that hormone combination BK3(0.50 mg/LIBA and 0.50 mg/L KT) was the best medium for somatic embryogenesis and plant regeneration from Xinluzao33.