PCR检测鸡毒霉形体和鸡滑液囊霉形体的研究

根据禽霉形体16S rRNA的基因序列设计，合成了1对引物，用这对引物对鸡霉素形体（Mycoplasma gallisepticum,MG)和鸡滑液囊霉形体（Mycoplasma synoviae,MS)菌株DNA进行PCR扩增，得到了与预期大小相一致的580bp的PCR产物，而这对引物对其他畜病病原DNA或RNA模板的扩增结果为阴性，PCR方法对MG和MS的最小检出量分别为2pg和3pg，应用已建立的PCR方法检测MG人工感染样品和临床样品，从人工感染样品中均检测到MG，临床样品的MG阳性检出率为10．25％，高于常规分离培养的阳性检出率。     

应用多重聚合酶链式反应检测鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体和禽衣阿华支原体的研究

根据鸡毒支原体 (MG)、禽衣阿华支原体 (MI)、鸡滑液囊支原体 (MS)的基因文库 ,设计了 3对分别与MG、MI、MS某段基因序列互补的引物。用这 3对引物对同一样品中的MG、MI、MSDNA模板进行多重聚合酶链式反应 (PCR)扩增 ,结果均同时得到了 3条特异性的大小与实验设计相符的 732bp (MG)、 2 99bp (MI)、 2 0 7bp (MS)多重的PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果能同时检出 1pg的MG、MI和MSDNA模板     

聚合酶链反应检测鉴别鸡毒霉形体强毒株和弱毒疫苗株的研究

根据鸡毒霉形体(MG)强毒株和弱毒疫苗株基因组结构特点，分别设计合成2对引物XZ1、XZ2和XZ45、XZ16，建立了可检测MG强、弱毒株的PCR方法。以引物XZ1、XZ2对MG强毒株和弱毒株进行的PCR，均可扩增出732bp的特异性片段；而以另1对引物XZ45、XZ46对MG弱毒株进行PCR，可扩增出524bp的特异性片段，但对鸡毒霉形体标准强毒株和野毒株的PCR，则扩增不出任何条带。特异性试验表明，这2对引物对其他种类鸡毒霉形体及其他对照禽病病原核酸模板的扩增均为阴性。敏感性试验结果显示，2对引物PCR均能检出100fg的MGDNA。研究结果表明，通过上述2对引物的2次PCR扩增，在数小时内即可鉴别出MG毒株是强毒株还是弱毒疫苗株。     

应用PCR-RFLP分析鉴别广西鸡毒霉形体

针对鸡毒霉形体(MG)16S和23SrRNA基因间的高变区序列设计合成了1对引物，对MG菌株进行了PCR扩增，获得了1条899bp的DNA片段，而其他禽病病原DNA无扩增。扩增产物经用限制性内切酶AfaⅠ和Dra Ⅰ进行酶切片段长度多态性分析，表明各MG菌株酶切图谱间均存在差异。     

应用三重聚合酶链反应同时检测NDV、IBV、MG的研究

本文建立了一种同时检测NDV、IBV和MG三种病原体的三重PCR技术。根据NDV、IBV和MG的基因文库,设计了三对分别与测NDV、IBV和MG某段基因序互补的引物,用这三对引物对同一样品中的测NDV、IBV、MG核酸模进行多重PCR扩增。结果均同时得到了三条特异性大小与实验设计相符的310bp（NDV）、1720bp(IBV)和732bp(MG)多重PCR扩增带,而对其他6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,多重PCR技术能检出10pg的IBV、1pg的NDV RNA模板和1pg的MG DNA模板。     

应用多重聚合酶链反应检测鸡毒霉形体和滑液霉形体的研究

根据鸡毒霉形体（ＭＧ）、滑液霉形体（ＭＳ）的基因文库，设计并合成了分别与ＭＧ、ＭＳ某段基因序列互补的两对引物，用这两对引物进行多重聚合酶链反应同时检测ＭＧ与ＭＳ。当样品中同时含有ＭＧ和ＭＳ的目的模板ＤＮＡ时，同时得到２条大小与试验设计相符的７３２ｂｐ（ＭＧ）和２０７ｂｐ（ＭＳ）的ＰＣＲ扩增带；而对其它８种禽病病原的扩增均为阴性，敏感性测定结果表明，多重ＰＣＲ技术最低能同时检出１００ｆｇ的ＭＧ、ＭＳ     

二温式多重PCR同时检测鸡的6种呼吸道病病原方法的建立

设计了6对分别针对鸡传染性支气管炎病毒（IBV），禽流感病毒（AVI）、鸡毒素霉形体（MG）、鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）、新城疫病毒（NDV）和滑液霉形体（MS）的特异性引物，根据反转录滞酶链反应（RT－PCR）和多重PCR原则，优化建立了一次PCR反应同时检测6种禽呼吸道病原的二温式多重PCR。该方法可同时扩增出6条区段大小与设计相符符的特异性片段，即IBV 1720bp,AIV 1050bp,ILTV647bp,NDV310bp,MS207bp，对人工感染鸡临床样品检测结果证明，该方法可用于临床诊断。     

聚合酶链反应检测绵羊肺炎霉形体的研究

参照基因库中已发表的绵羊肺炎霉形体Y98株的16SrDNA序列，设计合成了1对引物，建立了聚合酶链反应(PCR)检测绵羊肺炎霉形体的方法。结果显示，所建立的PCR能特异扩增绵羊肺炎霉形体的DNA，而对照的菌株均为阴性；其敏感性可达1Pg。经对绵羊肺炎霉形体分离株HD-1的扩增产物进行测序，并与绵羊肺炎霉形体标准株Y98的16SrDNA序列进行比较，发现有6个碱基的差异。     

应用多重PCR检测鉴别对虾白斑综合征病毒和桃拉病毒

研究建立了一种可同时检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)和桃拉病毒(TSV)的多重聚合酶链式反应(多重PCR)技术。根据WSSV和TSV基因序列，设计合成了2对分别与WSSV和TSV某段基因序列互补的引物，用这2对引物对同一样品中的WSSV DNA和TSV RNA模板进行多重PCR扩增。结果均同时得到了2条特异的与实验设计相符的306bp(WSSV)和231bp(TSV)多重PCR扩增带，而对其他对虾病病原的PCR扩增结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该多重PCR技术能检出10pg的WSSV DNA和1pg的TSV RNA模板。     

鸡霉形体病的防控

禽霉形体的众多血清型中,最重要的是鸡毒霉形体(MG)、鸡滑液囊霉形体(MS)和火鸡霉形体(MM),尤其是鸡毒霉形体感染很普遍。鸡毒霉形体引发的症状主要在呼吸系统,主要病变在气管和气囊。单纯的鸡毒霉形体感染,在正常的饲养管理条件下,常     

丝状霉形体山羊亚种巢式PCR检测方法的建立

根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列，设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR，建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种（Mycoplasma mycoides subsp．capri，Mmc）的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示，该方法只能对Mmc扩增出195bp的片段，而对其他病原菌不能扩增出任何条带，它最低能够检测出10Pg的Mmc DNA，说明该方法具有良好的特异性和很高的敏感性。田间试验结果显示，对4株霉形体分离株及其病料均可扩增出Mmc特异性片段，表明，该巢式PCR方法可用于Mmc快速鉴定和流行病学调查。     

鸡毒霉形体病的防制

禽霉形体的众多血清型中，最重要的是鸡毒霉形体(MG)、鸡滑液囊霉形体(MS)和火鸡霉形体(MM)，尤其是MG的感染很普遍。MG引发的症状主要在呼吸系统，主要病变在气管和气囊。单纯的MG感染，在正常的饲养管理条件下，常不表现症状，呈隐性经过，一般只有轻微的呼吸道症状，死亡率10％-30％。肉鸡感染后生长发育受阻，体重减     

多重聚合酶链反应快速检测鉴别鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株的研究

根据鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株基因组的结构特点，设计合成了二对引物XZ1，XZ2和XZ45、XZ46，建立了一种同时检测鉴别MG野毒株和弱毒疫苗株的多重PCR技术。试验结果表明，用这两对引物对MG强毒株和弱毒疫苗侏进行多重PCR，强毒株只扩增出732bp一条带，而弱毒疫苗株则可同时扩增出732bp、524bp二条带，而对其他种类鸡支原体和其它禽病病原的扩增不出现任何条带，结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该多重PCR最低能检出1Pg的MG强毒株和弱毒疫苗株的DNA模板。     

用多重PCR鉴别猪伪狂犬病野毒与疫苗毒的研究

根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列，设计了与PRV的gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRVDNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化，结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带，分别为549bp(gB)、429bp(gD)、366bp(gE)。用这3对引物对三基因缺失疫苗毒的样品DNA模板进行多次多重PCR扩增，均能稳定得到与设计相符合的2条特异性条带。敏感性试验结果表明，多重PCR可以检测到106Pg三基因缺失疫苗毒或756PgPRV野毒的核酸模板量。特异性试验结果表明，以正常对照细胞及猪圆环病毒和猪细小病毒DNA为模板进行多重PCR扩增，均无任何条带。     

用RAPD技术分析鸡毒霉形体广西分离株的DNA多态性

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术，以随机引物成对组合的方式对鸡毒霉形体(MG)5株广西分离株和3株标准株DNA进行了多态性分析。结果显示，所选用的20条引物中，有3对(6条)引物扩增的条带为2—10条，大小在200—3000bp。相似指数分析显示，广西MG分离株Y2与WL、CH与Y3的相似指数最高，分别为0．92和0．86，其与H2的相似指数为0．36—0．62。3株MG标准毒株S6、K2221、K1501与广西分离株间的相似指数为0．17—0．57。表明广西流行的MG与MG标准株存在差异，当地的流行株也呈现多样性。     

鸡病防治技术（十）

十、禽霉形体病的防治 对禽类有致病力的霉形体有三种;鸡败血霉形体(MG)、滑膜霉形体(MS)和火鸡霉形体(MM)。鸡败血霉形体主要感染鸡、火鸡,也感染其他禽类,引起呼吸道疾病在鸡群中长期流行(称为慢性呼吸道病—CRD),母鸡产蛋下降,火鸡则表现为传染性窦炎。因此,鸡败血霉形体     

鸡源霉形体的分离和鉴定

对乌鲁木齐市2个大型鸡场鸡毒霉形体（Mycoplasma gallisepticum,MG）、滑液囊霉形体（M.synoviae,MS）感染情况用血清平板凝集试验（SPA）进行了血清抽样调查。结果表明，凝集抗体的阳性率分别为66.92%和35.90%，其中商品鸡场MG和MS的阳性率分别为82.50%和52.50%。从凝似MG、MS感染鸡的气管、肺、气囊、鼻裂和跗关节腔分离到19株分离物。经初步鉴定，分离物均为霉形体属成员。用生化和血清学及其他生物学方法，对这些分离物进行了鉴定。结果6株为MG，3株为MS，其余10株也属于霉形体。     

应用聚合酶链反应检测鸡毒霉形体和滑液霉形形体的研究

利用鸡毒霉形体与滑液霉形体基因一定区域互补的序列,合成能分别对ＭＧ和ＭＳ目的基因的２对引物。和这２对引物对１０个国际标准的ＭＧ与ＭＳ菌株ＤＮＡ模板进行ＰＣＲ扩增,结果均得到与预期大小相一 的约７３２ｂｐ（ＭＧ）和２０７ｂｐ（ＭＳ）的ＰＣＲ产物。     

鸡霉形体病的诊断与防制

对鸡而言,致病性的霉形体包括3种:鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum,MG)、滑液霉形体(Mycoplasma synoviae,MS)、火鸡霉形体(Mycoplasma meleagridis,MM)。其中鸡毒霉形体是一种对鸡危害最大的病原,其感染通常被称为鸡慢性呼吸道病(CRD),发病特征是呼吸啰音、咳嗽、流鼻涕。临床表现通常是渐进性的,病程可以持续很长时间。     

鸡败血霉形体病的病症及综合防治

鸡败血霉形体病，又称慢性呼吸道病（CRD），是鸡的慢性呼吸道传染病。鸡败血霉形体属于霉形体科霉形体目的致病种，主要病原有败血支原体（MG）、滑液支原体（MS）和火鸡支原体（MM）3种，并以MG危害最大。该病原对外界环境有一定的抵抗力，在尘埃、饲料、饮水及低温环境可长期存活。