堆型艾美耳球虫(E.acervulina)单克隆抗体细胞株的建立

利用细胞融合技术 ,将堆型艾美耳球虫 (Eimeria acervulina)的子孢子可溶性抗原免疫的小鼠脾细胞和 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,通过间接 EL ISA方法筛选 ,得到能稳定分泌针对堆型艾美耳球虫子孢子的特异性抗体细胞株 5 B4和5 G7。用间接 EL ISA方法对这 2株细胞的腹水效价进行测定 ,结果 5 G7细胞株的腹水效价为 1∶ 2 6 2 14 4 ,5 B4细胞株的腹水效价为 1∶ 1310 72。腹水经正辛酸 -硫酸铵二步法纯化 ,SDS- PAGE结果表明 ,此方法对 5 G7细胞株纯化效果较好 ,但对 5 B4细胞株纯化效果不理想     

3类肉鸡药物中毒的用药体会

一、马杜拉霉素中毒的用药 马杜拉霉素是一种新型聚醚类一价单糖苷离子载体抗生素,对柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫、变位艾美耳球虫及毒害艾美耳球虫都有很好的效果,作用于球虫生活史的第一个无性生殖阶段,对子孢子和第一代裂殖体具有抗球虫活性。     

堆型艾美耳球虫子孢子和鸡十二指肠上皮细胞的共同抗原的研究

以抗堆型艾美耳球虫子孢子的单抗EASP-3G3作为工具,对鸡各段消化道上皮细胞切片和子孢子进行免疫组化染色,并利用蛋白质印迹技术来检测单抗所识别子孢子可溶性抗原的分子量,来确定子孢子和十二指肠上皮细胞之间是否存在共同抗原。结果表明单抗只与十二指肠上皮细胞发生反应,而与其他肠段无染色反应。而且单抗所识别的可溶性抗原分子量为35~48 ku。抗子孢子的单抗同时与十二指肠上皮细胞和子孢子反应,而不与其他肠段反应,证明堆型艾美耳球虫寄生的位点特异性与十二指肠上皮细胞表面的某种抗原分子有内在的关系。     

Eimeria tenlla和E. acervulina对凋亡诱导抑制的研究

为了研究鸡艾美耳属球虫不同种在入侵细胞早期对凋亡诱导抑制的差异,将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenlla)和堆型艾美耳球虫(E.acervulina)纯化的裂殖子入侵马-达氏牛肾细胞(MDBK细胞)1.5 h后,对被入侵的细胞计数并计算入侵率;加入含6%乙醇的完全培养基对细胞诱导凋亡3 h,检测细胞凋亡率。结果表明,E.tenlla裂殖子和E.acervulina裂殖子入侵率为21%和43%;凋亡诱导组的凋亡率是36.98%;柔嫩艾美耳球虫凋亡诱导组的凋亡率是25.77%;堆型艾美耳球虫凋亡诱导组的凋亡率是28.92%。柔嫩艾美耳球虫凋亡诱导组与凋亡诱导组之间差异极显著(P<0.01);堆型艾美耳球虫凋亡诱导组与凋亡诱导组之间差异极显著(P<0.01)。柔嫩艾美耳球虫凋亡诱导组与堆型艾美耳球虫凋亡诱导组之间差异显著(P<0.05)。结果提示,E.acervulina裂殖子入侵细胞并起到明显的抑制细胞凋亡作用,在入侵早期也许有类似于E.tenlla裂殖子抑制凋亡的机制;与E.tenlla裂殖子的抑制率相比略低,这可能与它的个体大小、致病能力有关。     

堆型艾美耳球虫早熟减毒株裂殖子的细胞培养

以收集于雏鸡十二指肠的堆型艾美耳球虫早熟减毒株裂殖子接种于鸡胚成纤维细胞、鸡胚肝细胞、鸡胚小肠上皮细胞和雏鸡肾细胞，４１℃培养１２０小时，其在鸡胚成纤维细胞和鸡胚肝细胞中不能继续发育，在鸡胚小肠上皮细胞和雏鸡肾细胞中可发育到卵囊阶段。     

堆型艾美耳球虫保定株裂殖子3-1E基因的克隆与序列分析

依据GenBank中收录的堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina,E.acervulina)关国株(US)3-1E基因序列,设计特异性引物,以堆型艾美耳球虫保定株裂殖子基因组RNA为模板,利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增获得3-1E基因序列部分片段,将此片段克隆至pGM-T Easy载体中,经PCR、限制性内切酶鉴定和克隆片段的序列测定、比较,结果表明该克隆片段扩增准确、可靠.序列比较发现,此片段与E.acervulina美国株(US)株、E.acervulina QH株cDNA的核苷酸同源性分别为99.4%和99.6%.     

首个国产鸡球虫疫苗问世保护率超95％

佛山市正典生物技术有限公司自主研发的“鸡球虫病四价活疫苗（柔嫩艾美耳球虫PTMZ株＋毒害艾美耳球虫PNHZ株＋巨型艾美耳球虫PMHY株＋堆型艾美耳球虫PAHY株）”近日获得国家三类新兽药证书，这是国内首个全部采用早熟选育致弱的药物敏感虫株组成的鸡球虫病四价活疫苗。     

随机扩增多态性DNA技术对鸡的3种艾美耳球虫的鉴别

应用随机扩增多态性DNA技术（RAPD）对寄生于鸡的3种艾美耳球虫：布氏艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫的基因组DNA进行分析,发现大多数引物对不同种球虫的DNA扩增产物的电泳带存在明显差异,证明RAPD技术可用于同宿主艾美耳球虫虫种的鉴定。     

柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的mRNA差异显示

利用柔嫩艾美耳球虫马杜霉素敏感虫株裂殖子和抗药虫株裂殖子为材料,对马杜霉素敏感虫株和抗药虫株进行差异显示PCR,共回收34条电泳差异片段,反向Northern点杂交鉴定4个片段为真正差异片段,并对4个片段进行测序、B1ast同源性比较.来自于马杜霉素抗药虫株裂殖子的ACD3-2序列与柔嫩艾美耳球虫微线-5同源性99%,说明AcD3-2序列是该基因的部分序列,微线-5蛋白与虫体融解宿主细胞膜、入侵、运动和溢出有关,在第二代裂殖子时期,抗药性虫株该序列发生转录,而在敏感虫株中沉默;HCD1序列来自马杜霉素敏感虫株,与柔嫩艾美耳球虫表面抗原16和17序列同源性分别为83%和86%,说明与这2个基因同源.AGD5片段来自抗药虫株,HAD8-2序列来自敏感虫株,通过比较这2条序列可能为新序列.     

安全de新型有机抗球虫病饲料添加剂

球虫病是世界家禽业所面临的经济损失最大、由原虫引起的寄生虫病。鸡有7种艾美耳球虫：堆型艾美耳球虫(Eacervulina)，布氏艾美耳球虫(Ebrunetti)．巨型艾美耳球虫(Emaxima)，毒害艾美耳球虫(EnecatlLx)，早熟艾美耳球虫(Epraecox)，柔嫩艾美耳球虫(EteneUa)．和缓芟羡耳球虫(Emiffs)。球虫病造成的经济损失包括两方面：药物的花费和疾病本身造成的损失。