武汉市马源肠球菌的耐药性分析

肠球菌(Enterococci)作为条件性致病菌广泛存在于人和动物中,其耐药性和致病性随地区和动物来源的不同而变化。据现有数据显示,关于武汉市马源肠球菌的耐药性研究相当匮乏。以武汉市2个马术俱乐部42匹温血马为主要研究对象,分别对马匹粪便进行样品搜集并进行耐药研究(氨苄西林,四环素,庆大霉素,头孢氨苄,恩诺沙星,氯霉素,诺氟沙星,红霉素,万古霉素、林可霉素等)。结果显示,从42份样本中分离出10株粪肠球菌,分离率为23.8%;药敏试验结果显示,分离株中有6株为庆大霉素耐药,6株为头孢类抗生素耐药,2株为庆大霉素和头孢类抗生素混合耐药,其他药物未产生耐药性。结果表明该俱乐部马源肠球菌已对庆大霉素和头孢类抗生素产生严重耐药性,试验为该马术俱乐部用药提供了理论依据。     

肠球菌毒力因子研究进展

肠球菌(Enterococcus)是人和动物肠道的正常菌群,通常不引起发病,为一种重要的机会致病菌.最近几年,由于免疫制剂的广泛使用,侵入性治疗机会的增加和抗生素的过渡使用,尤其是第3代头孢菌素的广泛应用,使得肠球菌的感染不断上升,成为医院内感染的主要致病菌.肠球菌致病机制与其致病岛编码的毒力因子表面蛋白、溶血素、蛋白明胶酶等有关,肠球菌致病机理不是由单一毒力因子所决定,而是多种毒力因子共同作用的结果.文章综述了肠球菌的各种潜在毒力因子的生物特性及其与致病性的关系,为预防和控制肠球菌感染提供参考.     

广东省养禽场肠球菌耐药性及毒力因子流行分布特征

旨在调查和分析广东省养禽场肠球菌的亚型屎肠球菌和粪肠球菌耐药性及其毒力因子流行分布特征,为控制禽源肠球菌耐药性传播、保障公共卫生安全提供理论依据。作者于2018年从广东省4个养禽场采集肠道样品493份,进行屎肠球菌和粪肠球菌的分离鉴定;采用琼脂二倍稀释法测定肠球菌的最小抑菌浓度（MIC）;PCR方法检测肠球菌的耐药基因和毒力基因。结果显示：1）共分离到125株肠球菌,其中粪肠球菌84株（鸡源66株,鸭源18株）;屎肠球菌41株,均来自鸡肠道样本。2）菌株对四环素、多西环素、红霉素几乎全部耐药,对氟苯尼考和氯霉素的耐药率高达89.60%和74.40%。屎肠球菌耐药率普遍高于粪肠球菌,而粪肠球菌对环丙沙星和利奈唑胺的耐药率高于屎肠球菌;鸭源粪肠球菌对利奈唑胺的耐药率（94%）显著高于鸡源粪肠球菌（39.4%）,屎肠球菌对利奈唑胺均敏感。从鸡分离的1株粪肠球菌对万古霉素耐药。3）耐药基因在屎肠球菌中的检出率高于粪肠球菌,鸭源分离株检出率高于鸡源。耐药基因tetL、fexA、ermB最为流行,检出率均高于90%。其次是optrA基因,检出率为73.60%,poxtA和fexB的检出率均低于20%。在3株鸭源粪肠球菌中检测出cfr基因。4）已检测的毒力基因中efaA的携带率最高,为63.04%（58/92）,其他依次为gelE（54.35%,50/92）、ace（47.83%,44/92）、asa1（44.57%,41/92）。对环丙沙星及高浓度氨基糖苷类耐药的菌株及携带cfr基因的菌株,大多携带agg、asal、gelE或ace。本研究显示养殖场禽源肠球菌耐药严重,鸭源肠球菌对利奈唑胺耐药率高,耐药基因和毒力基因流行且多样,且检测出人医临床重要抗生素耐药基因,应加强对养禽场肠球菌耐药性监测。     

一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验从甘肃肃南县某羊场死亡羊中分离出疑似某球菌菌株XCP,为进一步确定该致病菌株及其耐药性情况,进行了病原菌分离、革兰氏染色、生化试验、16S rRNA PCR扩增鉴定、小鼠致病力试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因扩增试验研究。结果发现,该菌革兰氏染色阳性,高盐、蜜二糖、蔗糖等生化反应阳性,VP、马尿酸盐、阿拉伯糖等生化反应阴性;16S rRNA基因PCR扩增后,进行BLAST比对,结果与GenBank中的屎肠球菌16S rRNA基因序列同源性为100%;小鼠致病力试验发现,该菌株具有很强的致病性;该菌株对β-内酰胺类抗生素苯唑西林、青霉素G,喹诺酮类抗生素诺氟沙星、环丙沙星、左氟沙星,以及四环素等高度耐药,对红霉素、万古霉素、克林霉素等抗生素敏感;毒力基因Asal、cylA、acm和耐药基因TetM、ant（6）-Ⅰ、aac（6'）-aph（2"）、ermB扩增均为阳性。结果表明,该菌为屎肠球菌（Enterococcus faecium）,具有较强的致病性和耐药性,可能与毒力基因和耐药基因的高阳性率有关。     

致羔羊脑炎肠球菌与羔羊正常菌群肠球菌生物学特性的比较

对致羔羊脑炎肠球菌和羔羊正常菌群肠球菌进行培养特性、生化特性、溶血特性、药物敏感性以及拥有毒力因子基因种类与分布进行比较,结果表明2种不同来源羔羊肠球菌的培养特性和生化特性基本一致.致病菌均对链霉素、庆大霉素、红霉素等抗生素耐药,1株正常菌对四环素、红霉素及链霉素耐药.11株致病性肠球菌中有5株菌同时检测到esp、cyIA、asa1、ace、efa、EF0591和EF3314等7种毒力因子基因,2株菌没有检测到其中任何毒力因子基因.30株正常菌有3株菌存在gelE和EF3314,l株菌同时存在gelE、EF3314和asa1 3种毒力因子基因.正常菌群株3种毒力因子基因片段序列与GenBank中登录的相应序列同源性在95%以上,与致病株相应序列同源性在96%以上.致病菌能导致小鼠死亡,而正常菌群肠球菌则不能引起小鼠的死亡.     

肠球菌研究进展

肠球菌(Enterococcus)是革兰阳性、过氧化氢酶阴性球菌,是人和动物肠道内主要常存菌群.该菌可引起群体致病和医院交叉感染,临床上表现为尿路感染、菌血症、心内膜炎等,加之许多报道显示肠球菌对多种抗生素都有耐药性和具有较强的致病性,因此越来越受到人们的关注.论文从生物学特性、毒力因子、耐药性、流行病学、临床检测等方...     

鸡源粪肠球菌对雏鸡致病力试验和毒力基因gelE及efaA的检测

为了解凉山地区鸡源粪肠球菌毒力基因gelE和efaA的基因表达情况,对毒力基因进行检测和致病力试验。通过实验室提供的粪肠球菌10株,进行致病力试验,结果显示,雏鸡死亡率为0～100%,存在较大差异;进行毒力基因gelE(432 bp)、efaA(591 bp)的检测,10株粪肠球菌阳性率均为100%。根据NCBI的基因序列进行粪肠球菌毒力基因gelE、efaA的同源性比对结果均为100%。     

宁夏地区牛源肠球菌分离鉴定及耐药性与毒力基因检测

为了了解宁夏地区牛源肠球菌的耐药性及耐药基因和毒力基因的携带情况,本试验使用显色培养基及PCR法对肠球菌进行分类鉴定;采用药敏纸片琼脂扩散法(K-B法)测定肠球菌对16种抗菌药物的敏感性;最后采用PCR方法对9种相关耐药基因与7种肠球菌毒力基因进行检测并测序。结果显示,在分离鉴定出的255株肠球菌中,屎肠球菌有78株(30.59%),粪肠球菌有53株(21.96%)。药敏试验结果显示,分离菌对磺胺异恶唑和杆菌肽耐药率达到了100%;其次是苯唑西林(92.16%)、红霉素(65.88%)、四环素(65.49%)和青霉素(56.86%)。分离菌对万古霉素和利奈唑胺高度敏感,敏感率分别为92.54%与95.29%。耐药基因检测结果显示,氨基糖苷类耐药基因aph(3)′-Ⅲ的检出率最高,为100%;其次是红霉素类耐药基因ermB,为46.27%;未检出耐万古霉素耐药基因VanA、VanB、VanC。已检测的毒力基因明胶酶gelE的携带率最高,为37.60%;其次为心内膜炎抗原efaA,为36.10%。结果表明,宁夏地区牛源肠球菌的多重耐药现象比较严重,应当加以重视。     

秦皇岛地区貉肠外大肠杆菌的致病性与耐药性分析

为了解河北省秦皇岛地区貉肠外致病性大肠杆菌(extraintestinal pathogenic Escherichia coli,ExPEC)的致病性与耐药性,采取小鼠致病试验、KB纸片法和PCR方法检测20株貉源ExPEC对小鼠的致病力,对15种抗生素的敏感性以及12种毒力基因和15种耐药基因的携带情况。结果显示,20株ExPEC均可致小鼠死亡,死亡率在40%～80%;iss、ler、vat等11种毒力基因有不同程度检出,检出率为15%～85%;20株ExPEC均具有多重耐药性,氟苯尼考、磺胺间甲氧嘧啶和磺胺二甲氧嘧啶等12种抗生素耐药率均在70%以上,多西环素耐药率高达100%(20/20);20株ExPEC分别检出2～8个耐药基因,喹诺酮类耐药基因gyrA和gyrB检出率最高,为80%(16/20)。本试验为秦皇岛地区ExPEC所致貉大肠杆菌病的防制提供数据参考。     

粪肠球菌动物致病的研究进展

粪肠球菌又称粪链球菌,能在不同环境中生长存活,对外界环境抵抗力较强,部分属于动物肠道中的正常茵群,还有部分在长期的进化中出现了毒力基因。近年来,粪肠球菌感染人和动物的报道日益增加,逐渐得到人们的广泛关注。论文综述了猪、牛、羊、禽和犬粪肠球菌的主要致病性、毒力基因及耐药性,为防制动物粪肠球菌感染提供参考。     

一株松鼠猴源粪肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了确定引起松鼠猴死亡的致病菌株及其耐药性情况,试验采用病原菌分离、革兰氏染色、生化试验、16S rRNA PCR扩增鉴定、致病性试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因扩增试验等方法对致病菌进行了研究。结果表明:该菌革兰氏染色阳性,马尿酸盐、V-P、6.5%Na Cl等生化反应呈阳性,阿拉伯糖、蔗糖等生化反应呈阴性;16S rRNA基因BLAST比对,与粪肠球菌相似性为100%;致病性试验显示,该菌株致病性不是很强;该菌株对苯唑西林、红霉素、复方新诺明、四环素等耐药,对青霉素G、呋喃妥因敏感,对万古霉素、米诺环素中等耐药;毒力基因hyl、asal、gelE、cylA、esp、acm和耐药基因TEM、ant(6)-I、ermB、aac(6')-aph(2″)、TetM扩增试验均为阳性。说明该菌株为粪肠球菌(Enterococcus faecalis),具有较强耐药性,但致病性不是很强,可能与毒力基因和耐药基因的高阳性率有关。     

北京地区腹泻犬、健康犬粪便粪肠球菌耐药性、毒力基因及多位点序列分型研究

为分析分离自北京地区腹泻犬、健康犬粪便的粪肠球菌的耐药性,研究2种犬粪便来源优势分子型粪肠球菌重要毒力基因携带情况,在中国农业大学教学动物医院收集犬粪便,并分离得到腹泻犬粪便源粪肠球菌45株,健康犬粪便源粪肠球菌32株,采用琼脂稀释法测定分离菌株对12种抗生素的最小抑菌浓度,用多位点序列分型(MLST)技术进行分子分型,并利用PCR方法检测优势分子型粪肠球菌5种不同毒力基因携带情况。结果显示,腹泻犬源和健康犬源粪肠球菌对四环素、多西环素、米诺环素、红霉素、利福平耐药率较高。腹泻犬源分离株对氯霉素、氨苄西林、阿莫西林克拉维酸、呋喃妥因耐药率较低,集中于8.9%～17.8%,对万古霉素不耐药;健康犬源分离株对青霉素、呋喃妥因耐药率较低,分别为4.8%和14.3%,对氨苄西林、阿莫西林克拉维酸、万古霉素不耐药。45株腹泻犬源粪肠球菌共发现15种序列型(ST),优势ST为ST116、ST16、ST179,32株健康犬源粪肠球菌发现18种ST,优势ST为ST16和ST27,2种来源优势ST粪肠球菌agg、gelE、cylB、esp、efaAs毒力基因检出率差异不显著(P0.05)。表明北京地区腹泻犬、健康犬肠道粪肠球菌多重耐药现象严重,需加强抗生素使用的监控和管理;腹泻犬、健康犬肠道粪肠球菌毒力基因携带率差异不显著,都具有向人传播致病性粪肠球菌的风险,兽医临床医护人员和宠物犬饲养人应注意防护。     

马源马链球菌兽疫亚种新疆株的分离鉴定及遗传特性分析

为了解马源马链球菌兽疫亚种(S.zooepidemicus)新疆分离株马链球菌兽疫亚种类M蛋白(SzM)基因的分子进化与变异情况,为该菌引起的感染性疾病的防控提供依据,本试验对新疆地区某马场采集的病马淋巴结样品进行病原菌的分离培养和生化鉴定,并对分离菌株进行药物敏感性试验。根据已发表的马源SzM基因序列设计引物,对其SzM基因进行PCR扩增及序列测定。将获得的SzM序列与GenBank中不同动物源马链球菌兽疫亚种分离株序列进行同源性比对和遗传进化分析。结果显示,分离得到了一株革兰氏阳性链球菌,将其命名为马链球菌兽疫亚种ZMSY15-1。药物敏感性试验结果表明,分离菌株对青霉素、磺胺嘧啶钠耐药,对其他14种药物均敏感。序列分析结果显示,马链球菌兽疫亚种ZMSY15-1与国内外不同动物源分离株SzM基因氨基酸同源性为56.0%～70.0%。遗传进化分析结果显示,这些菌株可分为4个群。马链球菌兽疫亚种ZMSY15-1与猪源分离株SzM蛋白的氨基酸同源性为59.9%,分别属于2个不同的群,其与美国马源分离株NH55426亲缘关系最近。本试验结果可丰富国内马源马链球菌兽疫亚种SzM基因的信息数据,为马链球菌兽疫亚种的致病机制研究和预防控制提供参考依据。     

湖南省猪源粪肠球菌耐药性分析

为了解湖南省猪源粪肠球菌临床分离株的耐药性及各耐药基因的分布情况,使用K-B法检测了42株猪源粪肠球菌对11种抗生素的敏感性,采用PCR方法检测了粪肠球菌中8种耐药基因的分布情况。结果显示,湖南省临床分离的42株粪肠球菌对大部分的抗生素高度耐药,对四环素、氯霉素、苯唑青霉素、红霉素、米诺霉素、左氧氟沙星、高浓度庆大霉、高浓度链霉素、环丙沙星、万古霉素、青霉素G的耐药率依次为100%、92.9%、88.1%、83.3%、81%、57.1%、52.4%、47.6%、45.2%、31%、11.9%;耐药基因的检出率为Aac(6)'/aph(2')97.6%、ant(6)'-Ⅰ90%、aph(3)'-Ⅲ76.2%、tet M 90.5%、erm B 73.8%、Van A 4.8%、Van B 54.8%、Van C 88.1%。从表型与基因型共同分析粪肠球菌的耐药性,发现粪肠球菌的多耐药性严重,其耐药表型与耐药基因并不完全一致。     

马源马链球菌兽疫亚种新疆株的分离鉴定及遗传特性分析

为了解马源马链球菌兽疫亚种（S.zooepidemicus）新疆分离株马链球菌兽疫亚种类M蛋白（SzM）基因的分子进化与变异情况,为该菌引起的感染性疾病的防控提供依据,本试验对新疆地区某马场采集的病马淋巴结样品进行病原菌的分离培养和生化鉴定,并对分离菌株进行药物敏感性试验。根据已发表的马源SzM基因序列设计引物,对其SzM基因进行PCR扩增及序列测定。将获得的SzM序列与GenBank中不同动物源马链球菌兽疫亚种分离株序列进行同源性比对和遗传进化分析。结果显示,分离得到了一株革兰氏阳性链球菌,将其命名为马链球菌兽疫亚种ZMSY15-1。药物敏感性试验结果表明,分离菌株对青霉素、磺胺嘧啶钠耐药,对其他14种药物均敏感。序列分析结果显示,马链球菌兽疫亚种ZMSY15-1与国内外不同动物源分离株SzM基因氨基酸同源性为56.0%~70.0%。遗传进化分析结果显示,这些菌株可分为4个群。马链球菌兽疫亚种ZMSY15-1与猪源分离株SzM蛋白的氨基酸同源性为59.9%,分别属于2个不同的群,其与美国马源分离株NH55426亲缘关系最近。本试验结果可丰富国内马源马链球菌兽疫亚种SzM基因的信息数据,为马链球菌兽疫亚种的致病机制研究和预防控制提供参考依据。     

浣熊源粪肠球菌的分离鉴定与耐药性分析

为探究从四川某动物园1例病死浣熊肝脏中分离到的1株细菌的特性和耐药程度,本试验采用病原分离、革兰氏染色、生化鉴定、16S rRNA测序、致病性试验、药敏纸片扩散法及耐药基因扩增的方法对该分离株进行了形态学及生化鉴定、致病能力和耐药程度分析。结果显示,分离株在普通LB培养基上呈现表面光滑、圆形凸起、边缘整齐、针尖大小的半透明菌落。经革兰氏染色在油镜下观察到蓝紫色球菌,测序结果与GenBank登录号为KY003107.1粪肠球菌（Enterococcus faecalis）的同源性高达99.5%,形态学与生化鉴定特性与粪肠球菌特性相符。致病性试验表明,该菌可导致肝细胞肿胀、变性,具有一定的致病能力;药敏纸片和耐药基因扩增试验表明,该菌对14种常见的抗生素头孢西丁、头孢哌酮、头孢曲松、头孢吡肟、头孢噻肟、氨苄西林、卡那霉素、链霉素、奈替米星、丁胺卡那、阿奇霉素、红霉素、多西环素、四环素耐药,仅对万古霉素和庆大霉素中度敏感。四环素耐药基因tetC检测为阳性;tetM、tetA检测为阴性,氨基糖苷类耐药基因aac （6'）/aph（2″）检测为阳性,aph（3'）-Ⅲ、ant（6）-Ⅰ检测为阴性;大环内酯类耐药基因ermB检测为阳性,ermA、ermC检测为阴性;万古霉素耐药基因vanA、vanB和β-内酰胺类耐药基因TEM检测均为阴性。该试验从浣熊肝脏分离的粪肠球菌表现出多重耐药特性并具有一定的致病能力,结果可为动物园临床肠球菌感染的病例提供一定的药物选择参考,制定合理的感染防治方案。     

乌鲁木齐市宠物源粪肠球菌和屎肠球菌耐药性及耐药基因检测

为了解乌鲁木齐市宠物源粪肠球菌和屎肠球菌对临床常用抗菌药物的耐药性及其耐药基因携带情况,在乌鲁木齐市多家宠物医院、警犬基地、犬养殖基地采集宠物(犬和猫)直肠粪样449份进行粪肠球菌和屎肠球菌的分离鉴定,通过琼脂稀释法测定10种抗菌药物的最小抑菌浓度,利用PCR方法检测11种耐药基因。结果分离鉴定出宠物源粪肠球菌和屎肠球菌共计123株,其中粪肠球菌81株,屎肠球菌42株。宠物源粪肠球菌和屎肠球菌对四环素和庆大霉素的耐药率较高,对阿米卡星、恩诺沙星和环丙沙星呈不同程度耐药,对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、万古霉素以及利奈唑胺高度敏感,仅部分屎肠球菌对亚胺培南表现耐药。检出aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、tetM、tetA和optrA耐药基因;其余被检耐药基因未检出。耐药粪肠球菌以同时携带aac(6′)/aph(2″)+aph(3′)-Ⅲ+tetM耐药基因为主;耐药屎肠球菌以携带tetM耐药基因为主。宠物源粪肠球菌与屎肠球菌对被检抗菌药物存在不同程度耐药,均对四环素类药物耐药最严重、对应耐药基因检出率也最高。建议临床治疗应根据细菌耐药性结果进行合理用药,并持续加强对宠物源肠球菌耐药性监测。     

鲜蛋表面屎肠球菌耐药性及万古霉素vanA基因检测

为了研究新鲜鸡蛋表面屎肠球菌耐药性和万古霉素A(vanA)基因的携带情况,试验在养鸡场收集新鲜鸡蛋,分离蛋壳表面的屎肠球菌,用16S rDNA通用引物对分离的屎肠球菌进行种属鉴定,K-B纸片琼脂扩散法进行耐药性分析,并检测耐万古霉素屎肠球菌携带vanA基因的情况。结果表明:革兰氏染色镜检可见革兰氏阳性单个、成对或短链状排列的圆形菌体,符合屎肠球菌的染色和形态特征;从200枚鸡蛋样品中分离到38株屎肠球菌,分离率为19%;分离到的屎肠球菌对14种抗生素表现出不同程度的耐药性,耐药谱广,最多发现8重耐药菌;在5株耐万古霉素的菌株中检测到了vanA基因。说明新鲜鸡蛋蛋壳表面的屎肠球菌对抗生素耐受性较高,对屎肠球菌特别是耐万古霉素屎肠球菌的监测具有公共健康意义,需要进一步调查以评估食源性传播给人类带来的风险。     

一株鸡源性肠球菌的鉴定及耐药机制分析

本试验旨在鉴定一株从肉鸡体内分离的广谱耐药菌,并从分子生物学角度对该株细菌的耐药机理进行探讨。根据《常见细菌系统鉴定手册》标准对该菌进行培养特性、生化试验鉴定,设计1对16S rDNA通用引物扩增其16S rDNA并测序鉴定;根据该菌的药物敏感性试验结果设计了12对引物扩增其基因组上耐药基因。细菌培养特性和生化试验结果显示该菌为一株肠球菌,PCR扩增出大小为1465 bp的目的片段,药敏试验显示该株细菌耐受多种抗生素,PCR扩增其耐药基因发现存在ant(6)-iv、OXA-10、tetM、CTX-M-1、TEM基因。最终鉴定该株细菌为一株肠球菌,耐药基因的存在是其产生耐药性的原因之一。     

3种致泻性大肠埃希氏菌多重PCR检测方法的研究

根据毒力因子、致病机理及遗传特性，国际上将致泻性大肠埃希氏菌（E．coli）分为肠致病性E．coli（EPEC）、肠出血性E．coli（EHEC）、肠侵袭性E．coli（EIEC）、肠产毒性E．coli（ETEC）、肠集聚性E．coli（EAggEC）。其中ETEC菌株通过LT和ST致病基因的作用引起腹泻。EPEC的致病性与LEE毒力岛上的eaeA毒力基因有关。EIEC的侵袭性是因为在侵袭性质粒上含有ipaH毒素基因。