大豆异黄酮对奶牛乳腺上皮细胞泌乳性能及抗氧化能力的影响

通过体外细胞培养的方法研究大豆异黄酮对奶牛乳腺上皮细胞泌乳性能及抗氧化能力的影响。试验分为空白对照组与不同浓度大豆异黄酮组(1mg/L、10mg/L、100mg/L、1,000mg/L、5,000mg/L),培养72h后,检测奶牛乳腺上皮细胞分泌β-酪蛋白、乳糖、甘油三酯的含量以及细胞中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。结果表明,与空白对照组比较,添加10mg/L、100mg/L、1,000mg/L大豆异黄酮组奶牛乳腺上皮细胞分泌β-酪蛋白、乳糖和甘油三酯的能力显著提高(P<0.05);添加10mg/L、100mg/L、1,000mg/L、5,000mg/L大豆异黄酮组细胞SOD、GSH-Px和CAT活性均显著提高(P<0.05),MDA、NO含量显著降低(P<0.05)。因此,添加10mg/L、100mg/L、1,000mg/L大豆异黄酮既能显著提高奶牛乳腺上皮细胞的泌乳性能,又能显著增强其抗氧化能力,且具有一定的剂量依赖性。     

药物驱虫对于伊犁马血清中抗氧化能力指标的影响

血液中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT） 活性、丙二醛（MDA）的含量、OH自由基（·OH）清除力、总抗氧化能力（T-AOC）、一氧化氮（NO）含量和一氧化氮合酶（NOS）含量是评价机体抗氧化能力的重要指标。本研究对健康伊犁马及感染寄生虫伊犁马驱虫保健前后血清中上述指标进行了测定。结果表明：对照II组（未驱虫感染组）与对照I组（健康组）相比，血清中SOD活性、GSH-Px活性、CAT活性、·OH清除力、T-AOC活性、NO含量和NOS含量都出现了下降，分别比对照I组降低21.19%（P < 0.01）、3.37%（P > 0.05）、2.53%（P > 0.05）、2.39%（P > 0.05）、14.17%（P > 0.05）、30.19%（P < 0.05）和14.75%（P < 0.05）|然而MDA含量却呈现上升趋势，比对照I组提升89.66%（P > 0.05）。药物驱虫保健后伊犁马血清中SOD活性、GSH-Px活性、NOS含量和MDA含量较对照II组都出现了下降，然而，CAT活性、·OH清除力、T-AOC活性和NO含量却出现了上升。药物驱虫保健后伊犁马血清中SOD活性、GSH-Px活性、NOS含量较对照I组都出现了下降，·OH清除力呈显著性上升。综上，感染寄生虫的伊犁马抗氧化指标值较未感染的明显降低（MDA升高），存在明显脂质过氧化损伤情况，驱虫后伊犁马抗氧化水平得以部分恢复，因此，适时科学驱虫是保障伊犁马健康的重要举措。 [关键词] 伊犁马|驱虫|氧化应激|抗氧化     

铝对体外培养鸡脾淋巴细胞一氧化氮代谢和脂质过氧化的影响

本研究分别将0、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL的AlCl3添加到培养液中,对鸡脾淋巴细胞原代培养24 h,通过检测淋巴细胞内一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,探究铝对鸡脾淋巴细胞毒性作用机理。结果表明,随着铝浓度的增加,NOS活性增强,NO和MDA含量增加,SOD和GSH-Px活性下降,与对照组相比,组间差异显著(P0.05;P0.01),说明铝可致雏鸡淋巴细胞抗氧化防御功能下降。     

中药“乳炎消”对临床型乳房炎奶牛抗氧化功能的影响

为了研究中药对临床型乳房炎患病奶牛抗氧化功能的影响,试验采用纯中药制剂"乳炎消"灌服乳区出现明显红、肿、热、痛等炎性症状的临床型乳房炎患病奶牛,每天早晚各1次,连用7 d,采集血清,测定血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。结果表明:灌服中药后患病奶牛血清谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性升高,血清一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和丙二醛含量降低。说明中药"乳炎消"可以提高乳房炎奶牛的抗氧化功能,减少乳腺组织的氧化损伤。     

健宫散对产后子宫内膜炎奶牛抗氧化能力的影响

为了研究中药复方健宫散对产后子宫内膜炎奶牛抗氧化能力的影响,试验选取年龄、胎次、产奶量相近的荷斯坦奶牛18头,按照B型超声波检查结果分为正常组、治疗组和患病组,每组各6头。治疗组奶牛灌服健宫散,每头每天400 g;正常组和患病组奶牛不进行任何处理。用药前、用药第3天、停药后第1,4,7,11,15,20天检测奶牛血清中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)4种抗氧化指标的变化情况。结果表明:与患病组比,停药后第4天治疗组奶牛血清中NO和MDA的含量显著或极显著降低(P0.05或P0.01),SOD和GSH-Px的活性得到不同程度提高。说明中药复方健宫散能降低机体的氧化损伤,提高子宫内膜炎奶牛的抗氧化能力,对产后子宫内膜炎奶牛有良好的治疗效果。     

子宫内膜炎奶牛产后氧化损伤与抗氧化变化

通过对试验用荷斯坦奶牛全血中白细胞总数(WBC)、中性粒细胞(PMN)百分比变化及血清、子宫分泌物中的一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性进行检测,探讨产后患有不同程度子宫内膜炎奶牛的氧化损伤和抗氧化能力的变化及其机理。结果表明,CE组和SE组全血中WBC总数和PMN百分比显著高于对照组(P0.01,P0.05)。而CE组血清和子宫分泌物中NO、MDA含量明显高于N组(P0.01),SE组则变化不明显,CE组SOD和GSH-Px活性变化比SE组明显,表现差异显著(P0.01,P0.05)。试验证明,子宫内膜炎奶牛血清和子宫分泌物中脂质过氧化物含量升高、抗氧化能力下降,可能是子宫内组织细胞病理损伤,引起不同程度子宫内膜炎的重要原因之一。     

“子宫消炎散”防治奶牛子宫内膜炎抗氧化机理的试验研究

为了研究"子宫消炎散"防治奶牛子宫内膜炎的抗氧化机理,试验采用"子宫消炎散"防治奶牛子宫内膜炎,测定血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的变化。结果表明:"子宫消炎散"可以通过提高血清中GSH-Px和SOD含量增加机体的抗氧化物作用,有较好的抗氧自由基作用,通过降低血清中MDA、NO和NOS含量降低机体的氧化损伤。说明"子宫消炎散"具有防治奶牛子宫内膜炎的作用。     

荷斯坦奶牛泌乳早期乳汁抗氧化性的动态研究

为了解荷斯坦奶牛泌乳早期乳汁的抗氧化性,试验选择南宁某规模化奶牛场预产期接近、体况相近的8头荷斯坦奶牛为试验动物,分别收集泌乳1~7 d及第10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46天的奶样,测定总抗氧化(T-AOC)能力、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以及各指标的相关性。结果表明:初乳中部分抗氧化物质活性高于常乳;泌乳早期初乳中SOD活性与GSH-Px活性(r=0.801,P0.01)、SOD活性与MDA含量(r=-0.496,P0.05)、GSH-Px活性与MDA含量(r=-0.598,P0.01)之间存在相关性。     

大豆异黄酮对高温下体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖和抗氧化能力的影响

本文旨在研究大豆异黄酮对高温下体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖和抗氧化能力的影响,采用细胞培养方法,将奶牛乳腺上皮细胞分为4组,分别在细胞基础培养基中添加0、10、100μg/m L和1000μg/mL的大豆异黄酮,各组细胞正常(37℃、5%CO2)培养48 h后,在42℃下处理1.5 h,再正常培养12 h检测相关指标。结果发现:(1)与0μg/mL组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P 0.05)。(2)与0μg/m L组相比,10～1000μg/mL大豆异黄酮组细胞活性氧(ROS)的浓度显著降低(P 0.05)。(3)与0μg/mL组相比,100μg/m L和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著升高(P 0.05),而乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量显著下降(P 0.05)。(4)与0μg/m L组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞内Caspase3和Bax基因的相对表达显著降低(P 0.05),而Bcl-2基因的相对表达显著升高((P 0.05)。综上所述,大豆异黄酮能够通过增强奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化能力,抑制细胞凋亡,进而促进细胞增殖。     

芦丁对体外培养奶牛乳腺上皮细胞生长的影响

本实验旨在研究芦丁对奶牛乳腺上皮细胞生长的影响,实验将奶牛乳腺上皮细胞分成5组,每组细胞培养基中分别含有0、25、50、100、150μg/mL芦丁,细胞在37℃,5%CO2条件下培养48 h和96 h后测定相关指标。结果表明:细胞培养48 h,与0μg/mL芦丁组相比,100μg/mL芦丁组的细胞活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性均显著提高,而丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性均显著降低;细胞培养96 h,100μg/mL和150μg/mL芦丁组的细胞活性、GSH-Px和SOD活性均显著提高,而MDA含量和CAT、LDH活性均显著降低。与0μg/mL芦丁组相比,100μg/mL芦丁组细胞的Bcl-2表达显著升高,而Caspase3和P53表达均显著降低。综上,芦丁能够提高奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化能力和抑制细胞凋亡,进而促进细胞的增殖,其中添加100μg/mL芦丁的效果最好。     

奶牛酒精阳性乳中锌代谢水平与相关酶活力关系的研究

本文对酒精阳性乳中锌(Zn)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)4种酶的活性进行了检测,探讨Zn的代谢水平与相关酶活力变化的关系。结果表明:因阳性乳中Zn严重代谢紊乱而致使SOD、GSH-Px活性显著下降,CK活性极显著降低和LDH活性极显著升高;酶的活力变化进一步证实乳腺上皮分泌细胞受到一定程度的损伤,细胞膜的微损伤可能导致奶牛分泌异常乳。     

辣木叶多糖对过氧化氢诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用

奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)在奶牛泌乳期代谢旺盛,导致活性氧(ROS)大量产生,从而诱发氧化应激。辣木叶多糖(MLP)能有效清除ROS和自由基,但其是否具有缓解BMECs氧化损伤的潜力尚不清楚。因此,本文以MLP为添加剂,探究其对过氧化氢(H2O2)诱导BMECs氧化损伤的保护作用。本试验首先将分离的BMECs置于含有不同浓度H2O2的培养基中培养2 h建立氧化损伤模型,以确定H2O2的适宜浓度;随后在培养基中加入不同浓度MLP溶液培养BMECs 2 h,以确定MLP适宜浓度;最终选用浓度为500μmol/L的H2O2和4 mg/mL的MLP用于本试验。试验设置4个组,分别为对照组1(BMECs)、对照组2(BMECs+MLP)、损伤组(BMECs+H2O2)、保护组(BMECs+MLP+H2O2),每组3个重复。试验对BMECs中ROS数量、BMECs凋亡以及BMECs中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量进行检测。结果表明:1)ROS检测结果显示,MLP抑制了细胞内ROS的生成。2)Hochest33258染色结果与透射电镜观察结果显示,MLP降低了BMECs的凋亡率,同时保持了细胞膜和细胞结构完整性。3)试剂盒检测结果显示,MLP提高了BMECs中CAT、GSH-Px和SOD活性,同时降低了MDA含量。综上所述,MLP可有效减缓BMECs凋亡,提高其抗氧化能力。     

荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的分离培养

目的：建立荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法。方法：采用组织块种植法培养奶牛乳腺上皮细胞,利用胰蛋白酶差时消化法分离、纯化上皮细胞。结果：成功培养出奶牛乳腺上皮细胞,显微镜下观察,纯化的乳腺上皮细胞呈典型上皮细胞形态,细胞之间排列紧密,呈鹅卵石铺路样,形态均一,多角形的单层聚集。通过荧光免疫细胞染色方法对细胞骨架蛋白-角蛋白18进行鉴定,呈现阳性反应。乳腺上皮细胞增殖旺盛,经25次以上传代后长势仍然良好。结论：采用组织块种植法结合胰酶差时消化法成功获得纯化的奶牛乳腺上皮细胞。     

Oxidative stress parameters in bitches with mammary gland tumours

The aim of the present study was to describe some of the oxidative stress parameters in bitches suffering from spontaneously occurring mammary gland tumours. The experiment involved 28 bitches which had mammary gland tumours removed surgically (15 bitches with malignant tumour and 13 with benign tumour) as well as 10 clinically healthy bitches. The activities of glutathione peroxidase (GSH-Px) and superoxide dismutase (SOD) were determined in haemolysates of erythrocytes derived from the animals. The concentrations of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), as well as -SH groups, were determined in blood plasma. GSH-Px activity was significantly higher in the malignant tumour group than in healthy animals. SOD activity was significantly higher in animals with tumours compared with the control group. Activities of both enzymes were higher in animals with malignant tumours than in benign groups, but the differences were not statistically significant. The concentrations of TBARS and -SH groups were similar in all examined groups. The increase of antioxidative enzyme activities in these animals may suggest the activation of antioxidative defence mechanisms in mammary gland carcinogenesis. Moreover, it might indicate the participation of oxidative stress in malignancies. Further experiments involving more animals, with more frequent sample collection and the use of other oxidative stress markers are necessary.     

荷斯坦乳牛乳腺和乳腺上皮细胞中Toll样受体及辅助因子编码基因的检测

参照牛TLR4、TLR2、CD14、MD-2基因序列设计了相应基因的引物。采用RT-PCR技术检测了体外培养的荷斯坦乳牛乳腺和乳腺上皮细胞中Toll样受体TLR4、TLR2及辅助因子CD14、MD-2基因。结果显示,乳腺上皮细胞中存在TLR4、TLR2、CD14和MD-2四个基因的表达,而乳腺中除MD-2未检测到外,其余3个基因均扩增成功。说明该受体及辅助因子可能参与了乳腺的先天性免疫防御。该研究为探讨乳腺的先天性免疫及乳腺上皮细胞在乳腺先天性免疫中的作用奠定了基础。     

王不留行增乳活性单体对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳性能的影响

应用CASY细胞分析仪及HPLC分别检测王不留行邻苯二甲酸二丁酯对乳腺上皮细胞增殖、细胞活力及乳腺上皮细胞分泌β-酪蛋白、乳糖的影响,研究王不留行增乳活性单体邻苯二甲酸二丁酯对奶牛泌乳中期乳腺上皮细胞增殖和泌乳性能的影响。试验结果表明,王不留行增乳活性单体成份邻苯二甲酸二丁酯对奶牛乳腺上皮细胞的增殖和细胞活力提高均显著(P0.05);能显著提高乳腺上皮细胞β-酪蛋白的表达(P0.05),也能提高乳糖的分泌(P0.05,P0.05)。因此,王不留行增乳活性单体邻苯二甲酸二丁酯可显著提高乳腺上皮细胞的增殖和泌乳能力。     

奶牛乳腺上皮细胞原代培养、纯化及鉴定技术研究进展

奶牛乳腺上皮细胞不仅具有合成和分泌乳汁的功能,而且在乳腺的先天免疫中扮演着重要角色,对泌乳机制、乳房炎发病机制的研究,以及药物筛选具有重要意义。原代培养的奶牛乳腺上皮细胞适宜建立细胞模型,可作为生理、病理、药理等方面研究的良好介质,解决体内试验周期长、成本高、个体差异大的难题。作者主要从奶牛乳腺上皮细胞原代培养的发展历程、培养技术、纯化技术及鉴定方法等方面的最新研究情况进行综述,以期为奶牛乳腺上皮细胞培养相关研究提供参考。     

Research Progress on Primary Culture,Purification and Identification Technique of Bovine Mammary Epithelial Cells

The bovine mammary epithelial cells not only have the function of synthesis and secretion of milk, but also play an important role in innate immunity system of the mammary gland, and there is great significance of them on studying the mechanism of lactation, mastitis pathogenesis and drug screening.Primary cultured bovine mammary gland epithelial cells are suitable for setting up cell model which can be used as the dielectric for physiological, pathological and pharmacological researching, avoiding the difficulties of in vivo test, such as the long cycle, the high cost, the individual difference, etc.The author summarized the latest researches of cell primary culture in vitro, cultivation technology, purification and identification method in order to provide reference for the studies of bovine mammary epithelial cells culture.     

Effects of tripeptides and lactogenic hormones on oligopeptide transporter 2 in bovine mammary gland

This study was conducted to investigate the expression of oligopeptide transporter 2 (PepT2) and its potential function in bovine mammary gland. First, the PepT2 mRNA and protein were determined in cultured mammary epithelial cells. Then the effects of lactogenic hormones (prolactin, hydrocortisone or insulin) and substrate (threonyl-phenylalanyl-phenylalanine) on PepT2 were investigated. The PepT2 mRNA and protein were successfully detected in bovine mammary epithelial cells. PepT2 gene expression was enhanced by the addition of 50, 500 and 5000 ng/ml prolactin, 10 and 100 ng/ml hydrocortisone, and 50, 500, 5000 and 50,000 ng/ml insulin. PepT2 mRNA abundance was increased when 5, 10 and 15% of threonyl-phenylalanyl-phenylalanine was included. Responses of PepT2 to lactogenic hormones and oligopeptide inferred that it may play an important role in bovine mammary gland.     

镉对PC12细胞的氧化损伤及α-硫辛酸的保护效应

为研究α-硫辛酸（α-lipoid acid,α-LA）对镉致PC12细胞氧化损伤的保护效应,通过不同浓度的醋酸镉染毒PC12细胞,并用100μmol/Lα-LA联合作用,测定PC12细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量。结果表明：与对照组相比,10μmol/L醋酸镉处理24h组细胞MDA含量和CAT活性极显著升高（P〈0.01）,SOD和GSH-Px活性极显著降低（P〈0.01）;不同浓度镉处理组细胞内MDA含量和CAT活性显著或极显著升高（P〈0.05或P〈0.01）,10和20μmol/L组SOD和GSH-Px活性极显著降低（P〈0.01）。α-LA保护组与相应染毒组相比,MDA含量和CAT活性显著降低（P〈0.05）,SOD和GSHPx活性有升高趋势,但组间差异不显著（P〉0.05）。说明镉可致PC12细胞发生氧化应激,α-LA可以提高PC12细胞的抗氧化能力,对镉引起的氧化损伤有一定的保护作用。