两步酶解法制备拟南芥保卫细胞原生质体

用两步酶解法提取拟南芥保卫细胞原生质体。首先使用作用比较缓和、浓度为0.8%的绿木酶Celluly-sin 25℃,120 r/min水浴振荡30 min,促使原生质体游离出来;然后再使用1.5%的纤维素酶Cellulase RS和0.02%的果胶酶Y-23组成的酶解液,22℃,60~70 r/min,酶解40~60 min,制备拟南芥保卫细胞原生质体。结果表明,两步酶解法可以制备出活性较高、适于进行膜片钳等后续试验的原生质体。     

牡丹叶片气孔观察方法的比较研究

[目的]用5种不同方法制取牡丹叶下表皮制片并对其气孔进行比较研究。[方法]采用直接撕皮法、撕皮-刮去叶肉细胞法、NaOH离析法、过氧化氢-冰醋酸离析法和煮沸撕取法制取牡丹叶下表皮,对其制片指标进行了比较,并筛选出最佳染色剂。[结果]撕皮-刮去法和过氧化氢-冰醋酸离析法的制片效果较好,叶肉残留少、真实性强。0.5%的I-KI染液染色效果好。[结论]该研究结果可为今后不同品种牡丹叶表皮的微形态特征研究奠定基础。     

辣子草水浸提液对蚕豆叶保卫细胞的影响

为了探讨入侵植物辣子草(Galinsoga parviflora Cav.)的化感作用机制,以蚕豆叶下表皮为材料,采用表皮条活性分析法研究了辣子草水浸提液诱导气孔保卫细胞凋亡及其信号调节机制。结果表明:在辣子草水浸提液作用下,蚕豆叶保卫细胞活性降低,细胞核出现了畸形以及固缩、降解或拉长等典型的凋亡特征,且随着水浸提液浓度增加。当处理浓度为0.05 g/m L时,保卫细胞的死亡率和核异常率分别为90.53%和87.77%;在0.05 mmol/L Caspase抑制剂Z-VAD-FMK、0.1 mmol/L质膜钙离子通道抑制剂La Cl3、0.1 mmol/L硝酸还原酶抑制剂Na N3和0.5 mmol/L活性氧清除剂抗坏血酸(As A)作用下,辣子草水浸提液诱导的保卫细胞死亡率均显著降低,分别为辣子草水浸提液处理组的19.44%、16.12%、50.08%、23.67%。由此表明,辣子草水浸提液诱导蚕豆保卫细胞发生了Caspase依赖性的细胞凋亡,同时ROS、NO、Ca2+参与了保卫细胞凋亡的信号转导过程。     

土荆芥腐解液对蚕豆幼苗光合特性和保卫细胞活性的影响

[目的]探讨土荆芥腐解液对蚕豆幼苗光合特性和保卫细胞活性的影响,为揭示土荆芥的入侵机制提供理论依据.[方法]采用表皮条分析法和盆栽试验,分析土荆芥腐解液作用下蚕豆幼苗株高、地上部鲜重和干重、叶面积、实际光化学效率(ΦPsⅡ)和最大光化学效率(Fv/Fm)等指标的变化情况,并检测保卫细胞的活性及细胞核异常率.[结果]土荆芥腐解液处理蚕豆幼苗的叶面积变化不明显,但地上部生物量和株高显著下降(P<0.05,下同),且具有时间和浓度依赖性;土荆芥腐解液处理蚕豆叶片的叶绿素荧光参数Fv/Fm和ΦPsⅡ均发生不同程度变化,但与对照(CK)均无显著差异(P>0.05).在土荆芥腐解液的作用下,蚕豆叶片的保卫细胞活性降低,细胞核出现错位、固缩、拉长或降解等畸变特征;随腐解液浓度的增加,保卫细胞死亡率及细胞核畸变率显著升高.[结论]土荆芥腐解液对蚕豆幼苗的光反应影响不明显,但其较强的细胞毒性能引起叶片气孔保卫细胞发生畸变,活性降低,进而导致幼苗气孔运动受阻,吸收CO2的能力下降,光合效率降低而影响幼苗生长发育.     

烟草BY-2细胞和蚕豆叶肉细胞原生质体微丝骨架及latrunculin B处理对其分布的影响

用酶解法分别制备烟草BY-2悬浮培养细胞和蚕豆叶肉细胞的原生质体,应用激光共聚焦显微镜观察经TRITC-鬼笔环肽荧光染色的2种原生质体的微丝骨架空间分布,以及观察用10和20μmol·L-1微丝抑制剂latrunculin B分别处理2种原生质体后对其分布的影响.结果表明:激光共聚焦显微镜清楚地显示出2种细胞原生质体中微丝精细排列的均匀网络结构;共聚焦显微成像显示了随latrunculin B处理时间的延长微丝解聚和微丝骨架分布的动态过程.建立原生质体制备、微丝骨架荧光染色、latrunculin B处理及激光共聚焦显微观察的实验体系为进一步研究植物微丝骨架的功能奠定了基础.     

一氧化氮在脱落酸和黑暗诱导蚕豆气孔关闭中的作用

[目的]研究一氧化氮（NO）在脱落酸（ABA）和黑暗诱导的蚕豆（Vicia faba）气孔关闭中的作用。[方法]以蚕豆叶片下表皮为材料,借助表皮条分析和激光扫描共聚焦显微镜技术对NO在ABA和黑暗诱导的气孔关闭中的作用进行了探索。[结果]ABA和黑暗都能诱导蚕豆气孔关闭,而且ABA和黑暗诱导都能提高保卫细胞胞质内的NO水平。NO专一性清除剂2,4-羧基苯-4,4,5,5-四甲基咪唑-1-氧-3-氧化物（cPTIO）、一氧化氮合酶（NOS）抑制剂NG-氮-L-精氨酸-甲酯（L-NAME）能够大大抵消ABA和黑暗诱导气孔关闭的效应,并能阻断ABA和黑暗诱导的气孔保卫细胞内NO水平的提高,表明NO是ABA和黑暗诱导蚕豆气孔关闭的共同信号分子。[结论]该研究可为探索保卫细胞信号转导网络积累一定的资料,并为提高植物抗逆能力和促进农业生产提供理论依据。     

蚕豆子叶植物保卫素的诱导及鉴定

植物保卫素是一类低分子量的抗生素。它是受病原体侵染后在植物体内合成和积累的,以抑制病原菌的生长,使植株表现抗病。不同植物产生不同的植物保卫素。蚕豆最重要的植物保卫素是蚕豆酮衍生物(蚕豆酮酸和蚕豆酮酯)。本试验通过单向薄层层析诱     

过氧化氢诱导蚕豆气孔保卫细胞一氧化氮的产生

过氧化氢(H2O2)和一氧化氮(NO)已被证明是植物中的信号分子,生物和非生物胁迫都可以导致H2O2和NO的产生.以蚕豆下表皮为材料,通过表皮条生物分析方法和激光扫描共聚显微镜显微技术,检测了H2O2诱导蚕豆气孔关闭过程中NO的产生.H2O2以浓度依赖的方式诱导气孔关闭,NO也有类似的作用.100 μmol/L H2O2诱导的气孔关闭作用可明显地被25 μmol/L一氧化氮合酶(L-NAME)专一性抑制剂或200 μmol/L一氧化氮清除剂(cPTIO)逆转.但L-NAME和cPTIO单独处理时对气孔开度几乎无影响.表皮条经100 μmol/L H2O2处理,再用NO分子探针乙酰乙酸盐-4,5-二氨基荧光黄(DAF-2 DA)孵育后,与对照相比,保卫细胞胞质中荧光强度明显增加.结果表明NO可能参与H2O2诱导的气孔关闭,保卫细胞中H2O2可能是通过NOS途径诱导NO的产生,而且H2O2可能作为上游信号分子诱导NO的产生.     

磷脂酰肌醇3-磷酸对UV-B诱导蚕豆保卫细胞中过氧化氢产生和气孔关闭的影响

【目的】研究磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）催化产物磷脂酰肌醇3-磷酸（PI3P）对紫外线B（UV-B）诱导保卫细胞中过氧化氢（H2O2）产生和气孔关闭的影响,为进一步阐明植物细胞转导UV-B辐射信号的机制提供依据。【方法】以蚕豆（Vicia faba L.）表皮条为材料,采用PI3K的抑制剂沃曼青霉素（WM）和LY294002（LY）来抑制PI3P的形成,采用二苯基碘（DPI）和水杨基氧肟酸（SHAM）分别抑制H2O2形成的NADPH氧化酶途径和细胞壁过氧化物酶途径,通过气孔开度分析和激光扫描共聚焦显微镜技术,确定PI3P在0.8 W•m-2 UV-B辐射诱导蚕豆保卫细胞H2O2产生和气孔关闭中的作用。【结果】WM和LY能显著抑制UV-B诱导的保卫细胞H2O2产生和气孔关闭;外源H2O2处理能显著逆转WM和LY对UV-B诱导气孔关闭的抑制效应,但WM和LY不能抑制外源H2O2诱导的气孔关闭;UV-B诱导的保卫细胞H2O2产生和气孔关闭能被活性氧清除剂和SHAM显著抑制,但不能被DPI抑制。【结论】PI3P通过诱导蚕豆保卫细胞中产生于过氧化物酶途径的H2O2形成来介导UV-B辐射诱导的气孔关闭。     

湖南地区5种黄精属植物叶表皮的显微特征比较研究

目的 比较研究湖南地区黄精属5种植物的叶表面显微特征。方法 采用剥撕法分别撕取叶上下表皮,用水合氯醛透化法制片,利用光学显微镜对植株成熟叶片中气孔的几项指标：气孔密度、气孔大小、气孔指数、气孔形态、气孔分布特点等进行观察;同时观察不同种植株的上下表皮细胞的异同。结果 5种黄精属植物的叶表皮细胞存在一定的相似性,但在表皮细胞的大小、垂周壁的样式、气孔特征等方面存在着一定的差异。结论 这5种植物的叶表面显微特征可作为湖南地区黄精属植物种间分类的参考依据。     

稀土金属离子对蚕豆根尖微核率及对蚕豆早期生长发育的影响

应用蚕豆初生根尖细胞微核技术研究Ｌａ３＋、Ｓｍ３＋、Ｙ３＋、Ｇｄ３＋等稀土金属离子的诱变性,发现稀土金属离子在达到一定剂量时均可引起蚕豆根尖细胞微核率的升高,与对照组相比差异显著（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）。在早期生长试验中,应用７ｄ生长的蚕豆幼苗干重表征蚕豆的早期生长情况,比较蚕豆的发芽率及幼苗干重,反映稀土金属离子对蚕豆早期生长发育的毒性。结果表明,稀土金属离子在高浓度时对蚕豆的发芽率有一定影响,其中以Ｓｍ３＋、Ｙ３＋、Ｇｄ３＋更为明显;从蚕豆幼苗干重可以看出,稀土离子在低浓度时对蚕豆早期生长具有刺激作用,并具最适浓度,在高浓度时均具有抑制作用,且随着浓度的升高,抑制作用增强。     

皂素废水对蚕豆根尖细胞微核率和幼苗干重的影响

用蚕豆根尖细胞微核试验技术,对皂素废水的污染毒性进行了分析研究。结果表明,皂素废水在较高浓度条件下,能够引起较高的微核率,满足一定的线性关系,呈剂量—反应关系(r=0.97,P<0.05);试验结果表明,低浓度的皂素废水能够刺激蚕豆幼芽生长发育。     

蚕豆育苗覆膜栽培技术

介绍了蚕豆盖黑膜育苗移栽的种植模式,通过育苗解决了蚕豆播种与晚稻收割的时间矛盾,采用覆盖黑膜种植可提早6d采收。采用这项技术,效益达3000元/667m2,增收效果明显。     

南淝河水体诱变物污染的植物微核监测

采用蚕豆根尖植物微核技术(VMNS),对南淝河水体7个采样点水质情况分别进行了测定.结果表明:除董铺水库水源基本无污染外,其余各点均有不同程度的污染.同时,对选用的大片青皮蚕豆品系的微核百分率(MCN%)及其对阳性诱变剂秋水仙素的敏感性作了测定,证实该品系对诱变剂的反应是敏感的,可作为植物微核监测的试验材料.     

甲醇和抗坏血酸对蚕豆衰老的影响

在土壤肥力及体积相同的盆中培养蚕豆幼苗,分别用浓度1.5%甲醇、10 mmol/L抗坏血酸(Vc)和自来水(CK)喷洒,5 d后测定正在扩张生长期叶片中叶绿素总含量c、hla与chlb含量及其比值、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果表明:甲醇、Vc处理的蚕豆叶片叶绿素总含量高、chla/b比值大,甲醇处理的POD活性大于Vc与CK;Vc处理的SOD活性大于甲醇与CK。     

蚕豆上的菜豆卷叶病毒鉴定

从表现黄化和卷叶症状的蚕豆病株上分离到病毒Ｂ－２分离物。它只能由豆蚜、豌豆蚜、棉蚜和桃蚜以持久性方式传毒。豆蚜可以终生传毒，传病有间歇性。病毒Ｂ－２分离物可以侵染１４种豆科植物。酶联免疫吸附测定表明Ｂ－２分离物与菜豆卷叶病毒和甜菜西方黄化病毒有血清学关系。根据传病分体、寄生范围和血清学反应，将病毒Ｂ－２分离物鉴定为菜豆卷叶病毒（ＢＬＲＶ）的一个蚕豆株系，属于大麦黄矮病毒组。     

突发水污染事故的预警与应急监测技术进展

通过分析历史上突发水污染事故典型案例,指出发生突发水污染事故进行应急监测预警的必要性。通过调研水污染事故应急监测技术发展指出了突发水污染事故中毒性监测的必要性和监测原则,详细分析了发光菌检测法、蚕豆根尖微核实验和彗星实验等试验技术成熟的且能够在污染事故发生第一时间对事故做出评判的3种毒性检测技术,其适合在我国推广应用。     

影响植物原生质体分裂的生理生化因素

以烟草试管苗幼叶,美味猕猴桃、毛花猕猴桃子叶愈伤组织和玉米幼叶为材料,进行了原生质体培养和一些生理生化指标的测定,结果表明,美味猕猴桃及毛花猕猴桃子叶愈伤组织原生质体在培养２０ｄ后,原生质体再生细胞分裂率为１７．８％和２０．５％,前者可继续分裂形成小细胞团,而后者仅分裂１～２次。对照材料烟草叶肉原生质体培养２周后,再生细胞分裂率高达７０．１％。玉米幼叶原生质体极难分裂。烟草叶中ＰＯＸ、ＳＯＤ活性以及可溶性蛋白质和氨基酸含量均高于其它３种材料。因此较低水平的ＰＯＸ、ＳＯＤ活性以及可溶性蛋白质和氨基酸含量是两种猕猴桃子叶愈伤组织原生质体分裂率低和玉米幼叶难以培养成功的影响因子。     

甲醇和抗坏血酸对蚕豆相对电导率及某些生理特性的影响

[目的]研究甲醇和抗坏血酸对蚕豆生理特性的影响。[方法]用1.5%甲醇、10mmol/L抗坏血酸(ASA)和自来水(CK)喷洒蚕豆幼苗,测定叶片的呼吸速率、相对电导率、超氧阴离子含量和多酚氧化酶(PPO)的活性。[结果]各处理的相对电导率和呼吸速率均增大。甲醇、ASA处理蚕豆叶片的相对电导率、超氧阴离子含量和PPO的活性均低于CK。甲醇处理的相对电导率最小,ASA处理的超氧阴离子含量和PPO活性最小。超氧阴离子的含量与测量时的温度及呼吸速率有关。甲醇处理花开前期出现了呼吸高峰,花开期呼吸速率有所下降但变化平缓,ASA处理蚕豆叶片的呼吸速率始终低于CK。[结论]甲醇和ASA处理蚕豆叶片的相对电导率较小,保持了细胞膜的完整性,抑制了PPO的活性,延缓了蚕豆衰老。     

马铃薯原生质体培养体系改良

试验以马铃薯试管苗叶片为原生质体来源，通过研究材料预处理方法对原生质体产量和质量的影响，培养方式及培养基中糖醇与细胞分裂的愈伤组织形成的关系，优化并建立了高效稳定的原生质体培养体系，获得了2个双单倍体系的叶肉原生质体再生植株。