兔多杀巴氏杆菌病的ELISA诊断

应用间接ELISA检查104例多杀巴氏杆菌（Pm）工感染兔的血清，100／104为阳性反应，检出率96.2％。分别对30例波氏支气管败血菌、8例金黄色葡萄球菌、14例病毒性出血症病毒人工感染兔及50例健康兔的血清进行检查，均呈阴性反应。试验证明本方法具有特异性。用A型荚膜Pm抗原分别对A型或Pm人工感染的61只、43只兔进行ELISA，未见型特异性。Pm人工感染兔在接种后15－20天血清抗体阳转，抗体存留期在6个月以上。     

免疫扩散法诊断“兔瘟”的研究

用“兔瘟”病兔肝脏乳剂制备的冻融抗原对感染“兔瘟”毒的兔血清进行琼脂糖免疫扩散检查,检出特异性抗体。各批抗原对阴、阳性血清检验结果一致.对人工感染耐过兔血清,在接毒后第7～9天可检出沉淀抗体,抗体持续期最少可达80天。     

副鸡嗜血杆菌人工感染鸡抗体动态的研究

本研究采用阻断ELISA（B－ELISA）和血凝抑制试验（HI）方法,检测了鸡体分别人工感染副鸡嗜血杆菌Hp8株（A型）和H668株（C型）后0－9周的血清抗体消长情况,并绘制了示意抗体曲线。结果表明,Hp8人工感染后,从第2周到第9周,B－ELISA阳性检出率一直保持100％,其中抗体效价在感染后第4周达到效价高峰,平均约为15．2。而H688人工感染鸡则在感染后第7周检出率最高,此后急剧下降。AI方法对A型抗体的阳性检出率亦在在第4－5周达到高峰,而对C型抗体的检出率一直较低。结果进一步显示了B－ELISA良好的特异性和敏感性,为本方法及其试剂盒产品的进一步应用提供了参考。     

免疫或人工感染鸡副嗜血杆菌发生的血清学应答

免疫或人工感染鸡副嗜血杆菌(Hpg)血清变异型A或C的鸡发生的血清学应答可用特异性的血球凝集(HA)抗原和普通的HA抗原进行检查。免疫或人工感染Hpg血清变异型A的鸡能产生针对Hpg血清变异型的特异性的HA抗原和Hpg普通的HA抗原的血凝抑制(HI)抗体;大部分鸡用血清变异型C免疫后第3周能检出两种HA抗原型的HI抗体,以后滴度逐渐下降;大多数鸡人工感染血清变异型C只产生对普通HA抗原的HI抗体,很少的鸡产生对血清变异型的特异性的HA抗原的HI抗体。     

应用Dot-ELISA检测家兔魏氏梭菌抗毒素的研究

将A型魏氏梭菌培养液经蔡氏滤器过滤,硫酸铵沉淀,再经Sephadex G-200柱层析,收集毒素峰洗脱液,浓缩后制备A型魏氏梭菌毒素纯化抗原。用混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,制备检测兔魏氏梭菌抗毒素的快速诊断膜。用Dot-ELISA检查6只魏氏梭菌高免兔的血清均呈阳性反应,对13只兔轮状病毒(LaRV)阳性血清、13只兔大肠杆菌(E.Coli)阳性血清、15只兔巴氏菌感染兔、16只波氏菌感染兔、9只葡萄球菌感染兔及27份健康兔血清检查均为阴性。A型魏氏梭菌阳性血清均可被特异性抗原所阻断。Dot-ELISA与SPA-ELISA对比差异不显著(P>0.05),两者阴、阳性符合率为89.06％。试验结果证明,本方法特异性强、敏感性高、操作简便、快速。为该病的监测净化提供了一种准确检验方法。     

应用ELISA检测黄牛肉孢子虫自然感染

应用ELISA对159份屠宰牛血清进行了检测,同时与眼观法和消化法作了比较。其中126份血清(79.25)中有抗肉孢子虫特异抗体;自123份血清(77.38％)检出缓殖子;在103份血清(64.78％)中发现肌肉包囊。ELISA的敏感性为99％;特异性为91％;只出现1例假阴性和3例假阳性。两次ELISA检测的结果显示,本技术具有较好的重复性,肉孢子虫缓殖子抗原不与兔弓形体血清发生交叉反应。对终末宿主一犬的肉孢子虫人工感染,未查出特异抗体,说明本技术不能用于终末宿主感染的检测。     

应用间接ELISA诊断兔轮状病毒性腹泻

应用间接 ELISA 检查10例兔轮状病毒感染兔的血清,感染后10天开始出现阳性反应,21天全部阳转.对巴氏杆菌病、波氏菌病、葡萄球菌病、病毒性出血症患兔的血清进行了排除检验。检查27例健康兔血清,ELISA 试验均为阴性。利用间接 ELISA 检查了644份兔血清,群养兔的阳性率达59.2%左右,散养兔为7.6%左右。本法具有特异性强、敏感性高、重复性好、简便、快速的优点。生产实践中有很大的应用价值。     

O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准：抗体效价大于或等于1：32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1：16～1：32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95．5％,84．7％。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100％,免疫猪检出率为86．7％。     

Dot－ELISA检测兔血清中兔轮状病毒抗体方法的建立

应用生长良好的第２４～４３代ＭＡ１０４传代细胞接种兔轮状病毒（ＬａＲＶ），待出现９０％以上细胞脱落时收获病毒液．制作纯化抗原。用混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体．制备检测ＬａＲＶ抗体的快速诊断膜，进行Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验，检查１０只人工感染兔血清．于感染后第１０天出现阳性反应，２１天全部阳转。应用该方法做了ＬａＲＶ阳性血清阻断试验、其它病的兔血清排除试验，对３８只健康兔血清的检查均为阴性。利用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对１３１６份兔血清的检查中．群养兔阳性率８３．５９％，散养兔为２７．５％。试验结果证明本法特异性强、敏感性高，操作简便、快速．适于现地ＬａＲＶ免疫监测及流行病学调查。     

检测兔抗大肠杆菌血清抗体的Dot-ELISA方法的建立

用兔大肠杆菌（ＲＣ８９１１２４）制备包被抗原，建立了检测兔抗大肠杆菌血清抗体的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法，抗原最佳稀释度为１∶５，待检血清最佳稀释度为１∶１０，酶标记山羊抗兔ＩｇＧ最佳稀释度为１∶４０００。对３０只大肠杆菌菌苗免疫兔进行检测，免疫后８天血清抗体即全部阳转，敏感性为１００％。分别对２３只兔轮状病毒、２０只病毒性出血症、２２只巴氏杆菌、７只波氏杆菌、１８只链球菌、２１只葡萄球菌感染兔进行血清检测，大多数均呈阴性反应，其特异性为９３．７％；２０只健康兔血清，均为阴性。对现地采集的４５２份兔血清进行检测，污染率平均为４８．２％。试验证明，本方法敏感性高、特异性好、操作简便快速、具有良好的重复性，适用于现地检疫。     

鸡传染性喉气管炎病毒的荧光抗体检测

建立了一种鸡传染性喉气管炎(ILT)的荧光抗体检测技术，用荧光素标记ILT兔源超免疫血清抗体，对15份人工感染ILT病鸡、5份ND病鸡和10份健康鸡的气管分泌物进行了检测，并对该技术做了特异性和敏感性测定。结果显示，人工感染ILT病鸡的阳性检出率高达100％，ND病鸡和健康鸡的阳性检出率均为0；该ILT兔源超免疫血清荧光抗体检测技术特异性强、敏感性高。     

斯氏艾美耳球虫的致病性及病理学研究

用纯种斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊人工感染25只断奶幼兔,进行致病性和病理学研究。试验兔分为1个不感染对照组和4个感染组,各感染组每只幼兔分别口服感染2.0×103、1.0×104、5.0×104、2.5×105个孢子化卵囊。与对照组相比,接种2.0×103个和1.0×104个孢子化卵囊的两个感染组的平均病变记分、肝重指数、血清转氨酶活性有显著差异(P<0.05);接种5.0×104个和2.5×105个孢子化卵囊的两个感染组上述指标有极显著差异(P<0.01)。表明斯氏艾美耳球虫对幼兔具有很强的致病性,能导致严重的肝球虫病。     

兔源F型多杀性巴氏杆菌荧光定量PCR检测方法的建立

为建立特异性强且敏感性高的兔源F型多杀性巴氏杆菌(Pm)快速检测方法，本实验根据F型Pm fcbD基因的保守序列设计特异性引物和探针，经反应条件优化，建立了检测兔源F型Pm的荧光定量PCR方法。利用该方法检测兔源F型Pm、兔源A和D型Pm、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、魏氏梭菌和金黄色葡萄球菌等临床常见兔源病原菌，结果显示，该方法仅对兔源F型Pm检测为阳性，其余病原菌均为阴性，特异性强。利用该方法分别检测10倍倍比稀释(1×10⁸拷贝/μL～1×10⁰拷贝/μL)的兔源F型Pm基因组DNA，进行敏感性试验，结果显示该方法的检测限为10拷贝/μL，敏感性分别是已报导的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的100倍和10倍，敏感性高。利用该方法对不同稀释度的质粒标准品进行批内和批间重复性试验，结果显示，批内和批间变异系数均小于3%，重复性好。利用该方法检测64份已知结果的临床样品，结果显示该方法的检测结果与已报导的双重PCR方法和环介导等温扩增方法检测结果的符合率均为100%，准确性高。本研究首次以fcbD为靶基因建立兔源F型Pm的荧...     

比较3种间接ELISA试验检测口蹄疫感染抗体的研究

将3种检测口蹄疫非结构蛋白抗体的间接ELISA试验进行了比较。这3种间接ELISA试验检测田间血清样品的最低符合率为96％，最高符合率达98％：有2种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第10天后血清中的口蹄疫感染抗体．有1种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第14天后血清中的口蹄疫感染抗体；这3种间接ELISA试验检测12份已知口蹄疫阳性血清的试验结果吻合。研究表明．这3种间接ELISA试验方法对于检测口蹄疫感染抗体具有较好的特异性．其中猪口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒在灵敏性、特异性和符合率方面更优于另外2种试剂盒。     

Dot—ELISA检测兔血清中兔轮状病毒抗体方法的建立

应用生长良好的第２４～４３代ＭＡ１０４传代细胞接种兔轮状病毒（ＬａＲＶ），待出现９０％以上细胞脱落时收获病毒液，制作纯化抗原。用混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体，制备检测ＬａＲＶ抗体的快速诊断膜，进行Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验，检查１０只人工感染兔血清，于感染后第１０天出现阳性反应，２１天全部阳转。应用该方法做了ＬａＲＶ阳性血清阻断试验、其它病的兔血清排除试验，对３８只健康兔血清的检查均为阴性。利用Ｄｏ     

蛋白A/G在PPR H蛋白ELISA中的应用研究

分别以山羊、绵羊和牛的阳性血清和阴性血清作为待检血清,分别以酶标蛋白A/G、酶标兔抗山羊抗体、酶标兔抗绵羊抗体和酶标兔抗牛抗体作为酶标二抗,进行以小反刍兽疫(PPR)裂解蛋白为抗原和基于抗血凝素(H)蛋白的单克隆抗体的PPRH蛋白酶联免疫吸附(ELISA)试验。结果四种酶标抗体均分别能使山羊、绵羊和牛阳性血清的百分抑制率达到100。在阳性血清百分抑制率为100时,检测山羊时酶标蛋白A/G、酶标兔抗山羊抗体的百分抑制率分别为17、12,检测绵羊时酶标蛋白A/G、酶标兔抗绵羊山羊抗体的百分抑制率分别为20、16,检测牛时酶标蛋白A/G、酶标兔抗牛抗体的百分抑制率分别为14、13。结果认为,酶标蛋白A/G而且与酶标抗抗体相比,具有本底低的优点,在PPRH蛋白ELISA试验中可以同时应用于检测山羊、绵羊和牛血清并具有较好效果。     

蛋白A／G在PPRH蛋白ELISA中的应用研究

分别以山羊、绵羊和牛的阳性血清和阴性血清作为待检血清,分别以酶标蛋白A／G、酶标兔抗山羊抗体、酶标兔抗绵羊抗体和酶标兔抗牛抗体作为酶标二抗．进行以小反刍兽疫（PPR）裂解蛋白为抗原和基于抗血凝素（H）蛋白的单克隆抗体的PPRH蛋白酶联免疫吸附（ELISA）试验。结果四种酶标抗体均分别能使山羊、绵羊和牛阳性血清的百分抑制率达到100。在阳性血清百分抑制率为100时,检测山羊时酶标蛋白A／G、酶标兔抗山羊抗体的百分抑制率分别为17、12．检测绵羊时酶标蛋白A／G、酶标兔抗绵羊山羊抗体的百分抑制率分别为20、16,检测牛时酶标蛋白A／G、酶标兔抗牛抗体的百分抑制率分别为14、13。结果认为．酶标蛋白A／G而且与酶标抗抗体相比,具有本底低的优点．在PPRH蛋白ELISA试验中可以同时应用于检测山羊、绵羊和牛血清并具有较好效果。     

干草小多孢菌对家兔致病作用的实验研究

对两组兔(每组10只),通过气管注入干草小多孢菌河西菌侏和英国菌株的方法成功地复制出了“农民肺”的模型。组织变化的特征是单核巨噬细胞浸润、类上皮一巨细胞肉芽肿形成以及血管炎和血管周围炎。用琼扩法及 ELISA 在实验动物血清中分别查到了特异性沉淀抗体和特异性循环免疫复合物。免疫荧光染色在肺内找到了 IgG 和干草小多孢菌孢子。血清沉淀性抗体和特异性免疫复合物的存在以及免疫荧光染色结果表明,在本病的发生过程中有Ⅲ型变态反应参与。     

犬细粒棘球绦虫粪抗原夹心ELISA检测方法的建立

为建立特异性和敏感性高的检验犬细粒棘球绦虫感染的方法。用细粒棘球绦虫(简称,Eg)成虫抗原分别免疫兔和绵羊,收集高免血清,纯化的高免抗体。依据抗体夹心ELISA工作原理,以兔抗体包被,检测感染Eg、不同犬带科绦虫的实验犬和空白犬粪样,绵羊抗体扑捉抗原,HRP标记兔抗绵羊IgG(1∶8 000)催化显色,用酶标仪测定OD 405nm吸光度,用以确定其特异性和敏感性。试验结果表明,敏感性为82.69%(43/52),特异性为85.88%(140/163);粪抗原在感染细粒棘球绦虫16d后可检出,最低抗原浓度为9.7ng/mL即犬感染5条成虫时可检测出阳性。该检测方法具有较好的特异性和灵敏性,为进一步研制检测细粒棘球绦虫虫体抗原ELISA检测试剂盒奠定了基础。     

直接荧光抗体法检测禽波氏杆菌

制备了兔抗禽波氏杆菌特异性荧光抗体并建立了直接荧光抗体检测方法 ,对禽波氏杆菌在人工感染雏鸡内的致病机理作了初步研究。结果 ,该荧光抗体只与其相应菌株发生特异性荧光反应 ,而不与其他病原菌株发生反应。对人工感染发病雏鸡的检测结果表明 ,禽波氏杆菌主要定植于上呼吸道黏膜 ,并造成损害。该技术具有简便、快速、敏感和特异性强等优点