昆虫病原线虫一级种单菌培养的一种方法

目前,线虫的固体培养方法是通过无菌操作技术,在动物组织匀浆(如鸡内脏匀浆)加海绵的培养基中加入共生细菌,接入线虫一级种而完成的(Bedding 1981,19841 Wouts 1981)。液体培养则是在接有共生细菌的液体培养基中加入线虫一级种而得到(Buecher et al.1989)。这类培养方法要求加入的线虫一级种仅携带其共生细菌才能达到单菌培养。如果线虫一级种带有杂菌,就会造成培养物的严重污染,大幅度降低线虫产量。因此建立线虫一级种的单菌培养方法对线虫的大量繁殖和工业化生产     

粗皮侧耳生物学特性及其与杀线虫毒力的关系

粗皮侧耳 Pleurotus ostreatus(Jacq.Fr.) Kumm er是一种世界性栽培的商业食用菌。该菌的野生型、驯化型、单孢分离株及孢子分离株的菌丝均能迅速杀死线虫。在固体培养条件下 ,成熟菌丝产生丰富的毒素球 ,幼嫩菌丝不产生毒素球 ;该菌在多种固体培养基 ,甚至营养缺乏的水琼脂上也生长良好 ;生长的最适条件为 2 4～ 2 8℃、 PH5 .6～ 8.0、固体或液体遮光培养。尽管营养、温度、 PH及光照等对菌丝生长均有显著影响 ,但并不影响其对线虫的毒力 ,各菌株间毒力无差异 ,线虫与菌丝接触 4 8h,死亡率均达 90 %以上 ;液体培养滤液能杀死线虫 ,但…     

两种浸洗线虫方法的初步比较

以鸡内脏海绵培养基加入共生细菌大量繁殖昆虫病原线虫(Bedding,1981、1984)的研究进展,促进了昆虫病原线虫的大面积应用。浸洗线虫是收获以固体人工培养基大量繁殖昆虫病原线虫的一个重要环节。提高昆虫病原线虫的回收率将降低大量生产昆虫病原线虫的成本,为此本文用通气浸线虫法及静浸线虫法进行了不同时间的泡浸线虫比较试验,现将试验总结如下。     

一种新的昆虫病原线虫固体培养基及其参数优化研究

以昆虫病原线虫Steinernema carpocapsae HB310为试虫,针对已有的2种线虫固体培养基配方进行改良,得到一种更为经济、高效的线虫固体培养基配方。结果表明,该配方在培养S.carpocapsae HB310第8天时线虫产量达到高峰(侵染期幼虫4.00×10~4条/g),扩繁的线虫对5龄大蜡螟致病力高于已有的固体培养基配方。针对该固体培养基的培养参数进行优化筛选,得出最佳培养条件参数为共生菌接菌量为2.26×10~7 cfu/瓶,接线虫量为侵染期幼虫1×10~3条/g,培养周期为12 d。     

昆虫病原线由固体培养系统干粉培养基的优化

本文根据系统分析方法,利用二次正交旋转组合设计于固体培养系统中建立培养基组份对S.carpocapsae的A24品系和H.bacteriophora的H06品系的线虫产量影响的数学模型,然后对模型进行多项分析和优化。 根据营养配比适合、来源便利、质量稳定以及成本适宜的原则,选择黄豆粉、面粉、鸡蛋黄粉、猪油以及酵母膏作为线虫固体培养基组份。水份、酵母膏和鸡蛋黄粉对A24线虫产量产生显著的影响;水份、猪油对H06线虫产量产生显著影响。对A24和H06线虫来说,不同组份的重要性程度不同,表明根据不同的线虫种来筛选合适的培养基组份及其配比是极为必要的。在36个试验组合中,A24和H06线虫最高产量的组合分别获得每克培养基58×10~4和48×10~4条的感染期线虫。通过对两种线虫的培养基配比模型进行优化,得到了优化的培养基配方。为使优化配方更有广泛性,以频数分析方法进一步求得一定置信区间(95％)内各培养基组份的最佳配比范围。     

粗皮侧耳生物学特性及其与杀线虫毒力的关系

 本文报道粗皮侧耳(Pleurotus ostreatus)的生物学特性,尤其是生物学特性与杀线虫毒力的关系。该菌的野生型、驯化型、单孢分离株及孢子分离株的菌丝均能迅速杀死线虫。在固体培养条件下,成熟菌丝产生丰富的毒素球,幼嫩菌丝不产生毒素球;该菌在多种固体培养基,甚至营养缺乏的水琼脂上也生长良好;生长的最适条件为24~28℃、pH5.6~8.0、固体或液体遮光培养。尽管营养、温度、pH及光照等对菌丝生长均有显著影响,但并不影响其对线虫的毒力,各菌株间毒力无差异,线虫与菌丝接触48h,死亡率均达90%以上;液体培养滤液能杀死线虫,但其对线虫毒力的强弱却与菌株、滤液浓度及培养时间等有关。首次以实验证明了该菌在液体培养条件下可产生杀线虫毒素。     

铺散亚菊挥发油化学成分组成及其对马铃薯茎线虫的毒杀作用

马铃薯茎线虫是造成当归麻口病的主要原因。本试验研究了铺散亚菊挥发油的化学组成及其对马铃薯茎线虫的毒杀作用。采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,GC/MS分析了挥发油的成分及其相对含量;贝曼漏斗法从当归中分离马铃薯茎线虫,以灰葡萄孢培养线虫;药液浸泡法测定挥发油的杀线虫活性。结果显示:从铺散亚菊挥发油中鉴定出25种化合物,占挥发油总成分的98.44%,其主要成分为樟脑(13.20%)、桉叶油醇(13.16%)、百里香酚(10.96%)、β-水芹烯(9.66%)、伞柳酮(9.40%)、4-乙基-1-(1-甲基乙基)-二环[3.1.0]-2-戊烯(7.60%)和侧柏酮(6.18%)。铺散亚菊挥发油对马铃薯茎线虫的LC50为3.83 mg/mL,而阳性对照35%甲基异柳磷乳油的LC_(50)为0.14mg/mL。铺散亚菊挥发油对当归茎线虫有较好的毒杀作用,能够为铺散亚菊挥发油防治马铃薯茎线虫提供一定的理论依据,对提高当归的质量和产量有一定意义。     

影响链格孢菌生长及产孢的因子

在实验室研究了影响稗草病原真菌链格孢生长及产孢的因子.链格孢菌可在较宽的温度范围内生长、繁殖;连续黑暗、空气充足条件下有利于产孢;该菌在4种不同的植物产品上培养可产生大量的孢子,最多的无芒稗籽上每克干物质产孢量达3.59×108个,这些培养物在首次产孢收获后均可直接培养作二次产孢利用.固体(菌块)和液体(菌悬液)接种培养物均能成功产孢.但培养量大时液体接种优于固体接种,产孢量与接种菌悬液浓度呈正相关.     

线虫内寄生真菌明尼苏达被毛孢(Hirsutella minnesotensis)的营养研究

 明尼苏达被毛孢(Hirsutella minnesotensis)是中国大豆胞囊线虫重要的内寄生菌,本研究采取固体和液体2种培养方法测定了6种天然培养基、20种碳源、19种氮源和9种维生素对其生长、产孢和孢子萌发的影响。结果表明:H. minnesotensis在酵母葡萄糖琼脂(Yeast dextrose agar,YDA)培养基上生长最快,在麦芽浸膏琼脂(Malt extract agar,MEA)培养基上产孢最好,胰化大豆琼脂(Tryptic soy agar,TSA)培养基既不适合生长,也不适合产孢。在碳氮源研究中,Melibiose在固体培养基上显著促进H. minnesotensis气生菌丝生长,Glycogen是液体培养和孢子萌发最好的碳源。H. minnesotensis在以Casein为氮源的培养基上气生菌丝最多,Peptone是H. minnesotensis液体培养最好的氮源,大多数的氮源可以促进H. minnesotensis孢子萌发,但L-Cystine抑制孢子萌发,且在固体培养中不能被H. minnesotensis利用。维生素对H. minnesotensis的生长、产孢和孢子萌发有一定的促进作用。     

南方根结线虫二龄幼虫对不同类型盐离子的趋化反应

为了明确南方根结线虫对不同类型盐离子的趋化性,在琼脂糖平板培养基上测试了南方根结线虫2龄幼虫对37种无机盐和11种有机盐的趋化反应。结果表明,Cl-和SCN-盐对南方根结线虫均有排斥作用;对南方根结线虫有排斥作用的NO-3盐为Ba(NO3)2、NH4NO3、Mn(NO3)2;H2PO-4或HPO2-4盐为KH2PO4、K2HPO4;CO2-3或HCO-3盐为 Na2CO3、K2CO3、(NH4)2CO3 和KHCO3;OH-盐为KOH和 NaOH;有机酸为C2H4O2、C3H6O3和C4H6O6。含有相同阳离子的不同盐对南方根结线虫的吸引或排斥作用不受影响。阴离子对南方根结线虫的排斥作用大小为SCN->NO-3>Cl->OH->CO2-3> H2PO-4>有机酸>SO2-4。只有KCl、Ba(NO3)2、NH4NO3、Mn(NO3)2、(NH4)2CO3、C2H4O2和 C4H6O6对线虫的趋化性随浓度的增加而增加,而其他被测试的41种盐浓度对线虫的趋化性没有显著影响。     

淡紫拟青霉M-1固体发酵工艺优化及基于自动化种曲机的中试生产

淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus在线虫生物防治上表现出巨大的潜力，但大规模生产技术的不成熟以及产品货架期短限制其工业化生产。为获得淡紫拟青霉M-1固体发酵的最佳条件，并建立其规模化生产工艺，本研究采用单因素和正交试验对淡紫拟青霉M-1固体发酵培养的组成、发酵条件以及烘干条件进行了优化，结果表明淡紫拟青霉M-1固体发酵最佳的培养基组成为麸皮：玉米粉为1：1、蔗糖添加量5%、尿素添加量0.1%、硫酸铵添加量0.1%、料水比1：0.67，固体发酵最佳的培养条件为培养温度28℃、培养时间为7 d、液体接种量为5%、固体接种量为0.5%，固体菌剂最适烘干条件为在35℃烘干24 h，在此条件下淡紫拟青霉M-1固体菌剂的有效活菌数为9.47×10⁹ CFU/g。在此基础上，基于自动化种曲机，建立淡紫拟青霉M-1规模化固体发酵工艺，并通过3个批次规模化生产进行验证，获得将近2 t淡紫拟青霉M-1固体菌剂产品，菌剂有效活菌数能达到15.6×10⁹ CFU/g，杂菌率极低（<0.01%），水分含量为9.68%。由此说明，该工艺可用于淡紫拟青霉M-1工业化生产，且产品质量优异。     

昆虫病原斯氏和异小杆线虫人工大量培养的研究概况

昆虫病原斯氏和异小杆线虫的大面积田间应用要求线虫有效地生产，本文介绍业已建立线虫大量培养方法及合适于大规模生产线虫的工厂化培养系统及有关的技术参数，并讨论其优化管理问题。     

剂型、灌水量和土壤疏松度对甲维盐在土壤中分布及防治根结线虫效果的影响

为明确剂型、灌水量等对杀线虫剂防治根结线虫效果的影响,采用土壤薄层层析和高效液相色谱法分析了乳油和微囊悬浮剂型及不同灌水量对甲维盐在不同疏松度土壤中的分布特点,并以番茄为材料进行了根结线虫田间防治试验。结果表明,微囊悬浮剂型甲维盐随水迁移能力较乳油剂型强。药量相同、单株灌水量为1 600 m L时,2种剂型在疏松土壤中分布较为均匀,其次是800m L;200 m L和400 m L时,乳油剂型的分布均匀度明显大于微囊悬浮剂型。单株灌水量800 m L时2种剂型在致密土壤中分布的均匀度显著低于疏松土壤,乳油剂型略高于微囊悬浮剂型。番茄定植后单株甲维盐有效成分为10 mg、灌水量为800 m L和1 600 m L时,乳油剂型防效分别为67.90%和79.62%,微囊悬浮剂型分别为65.00%和77.50%,差异不显著。表明田间使用甲维盐乳油或微囊悬浮剂型防治蔬菜根结线虫时应尽量在移栽后随水冲施,且单株灌水量不低于800 m L。     

生防菌株Snef85的鉴定及其发酵液对不同种类线虫的毒力

采用稀释分离法从人参土壤中分离获得一株生防真菌Snef85,采用培养性状、形态特征观察法及ITS序列分析法对菌株Snef85进行鉴定,并测定其发酵液对5种线虫的毒力作用。结果表明,该菌株为哈茨木霉Trichoderma harzianum,其发酵液对不同种类线虫的防治效果差异显著,对根结线虫Meloidogyne spp.、水稻干尖线虫Aphelenchoides besseyi和大豆胞囊线虫Heterodera glycines的毒力较强,对腐烂茎线虫Ditylenchus destructor的毒力次之,对小杆线虫Caenarhabditis spp.的毒力最弱。     

用昆虫病原线虫液相培养早期发育指标预测产量的研究

对液相培养繁殖昆虫病原线虫的早期发育指标与最终产量的相关性进行研究，探讨利用早期发育指标预测最终产量的可能性。试验中采用４项早期发育指标：（１）接种代发育比（培养第４天）；（２）接种代繁殖倍数（培养第９天）；（３）子１代发育比（培养第１３天）；（４）子１代繁殖倍数（培养第１８天）。回归分析结果表明，４项发育指标与最终产量均有显著相关性，可以用作预测最终产量的指标。     

Immunofluorescent Localization of Tobacco Ringspot Nepovirus in the Vector Nematode Xiphinema americanum

ABSTRACT An indirect immunofluorescent technique was developed to localize tobacco ringspot nepovirus (TRSV) in the vector nematode Xiphinema americanum sensu stricto. A population of this nematode that efficiently transmitted TRSV was given an acquisition access period of 10 days on TRSV-infected cucumber. Treatment of fragments of viruliferous nematodes with a polyclonal antiserum against TRSV followed by fluorescein isothiocyanate-conjugated goat anti-rabbit immunoglobulin G resulted in virus-specific bright fluorescence only in the lumen of the stylet extension and esophagus. Virus-specific fluorescent signals were observed in the virus-retention region of 44% of the nematode fragments examined. The percentage of nematodes labeled with virus-specific fluorescence increased as the acquisition access period increased from 0 to 22 days; the increase paralleled the increase in the transmission efficiency of the nematode population. Visualization of the entire virus-retention region of individual nematodes within a population of vector or nonvector nematodes provides a rapid and simple means of monitoring specific attachment of plant viruses.     

穿刺巴斯德菌活体大量繁殖体系的优化

穿刺巴斯德菌Pasteuria penetrans专性寄生于根结线虫Meloidogyne spp.,具有很好的生防潜力。为了进一步提高其产量,本研究比较了5个对南方根结线虫敏感的番茄栽培品种繁殖穿刺巴斯德菌的效率。结果表明,佳粉18和毛粉802繁殖效率最高,单株番茄上的产孢量分别为1.54×108孢子.株-1和1.47×108孢子.株-1。以佳粉18为根结线虫的寄主植物,研究线虫接种量、接种次数、线虫接入时的苗龄及接种后第1周的培养温度对穿刺巴斯德菌活体繁殖量的影响。研究表明,在番茄9片真叶时,每株番茄接种7500条线虫,分3次接入,根粉的产孢量可提高至1.86×108孢子g-1。在18～31℃温度范围内,温度越高,穿刺巴斯德菌对线虫的侵染率越高;31℃时,其孢子侵染率平均达44.57%。     

甘肃定西地区马铃薯线虫病病原的分离鉴定

为明确甘肃省定西市马铃薯线虫病的病原种群分类地位,采用形态学结合分子生物学的方法对该地区马铃薯上的4个线虫群体进行了鉴定,观察和测量其形态特征值,基于r DNA-ITS序列以UPGMA法构建线虫群体的系统发育树,并按照柯赫氏法则进行了致病性测定。结果表明,4个线虫群体在形态学上与马铃薯腐烂茎线虫Ditylenchus destructor一致,但群体DX27与群体DX11、DX16、DX19雌虫的体长、体长/食道长、体长/尾长值存在极显著差异。利用通用引物TW81/AB28扩增r DNA-ITS序列均获得长度为915 bp的片段;序列比对分析表明,群体DX27与其它3个群体相比在ITS1区的第96~255 bp片段内有25个碱基的差异;系统发育树显示,群体DX27与C型群体聚为1支,群体DX11、DX16、DX19与B型群体聚为1支。根据形态学特征及r DNA-ITS序列分析结果确定该病原线虫为马铃薯腐烂茎线虫,其中群体DX27属于C型,群体DX11、DX16、DX19属于B型。     

Localization of Transmissible and Nontransmissible Viruses in the Vector Nematode Xiphinema americanum

ABSTRACT The inner lining of the food canal of nematodes that transmit plantinfecting viruses is regarded as the retention region of viruses. To characterize the location of transmissible and nontransmissible viruses in the vector nematode Xiphinema americanum, three nepoviruses, Tobacco ringspot virus (TRSV), Tomato ringspot virus(TomRSV), and Cherry leaf roll virus(CLRV), and one non-nematode-transmissible virus, Squash mosaic virus (SqMV), were evaluated for transmission efficiency and localization sites in the nematode. Transmission trials showed highest transmission efficiency for TomRSV (38% with 1 and 100% with 10 nematodes, respectively), intermediate efficiency for TRSV (27% with 1 and 65% with 10 nematodes, respectively), and no transmission for CLRV and SqMV. Electron microscopy and immunofluorescent labeling revealed that TRSV was primarily localized to the lining of the lumen of the stylet extension and the anterior esophagus, but only rarely in the triradiate lumen. Within a nematode population, particles of TRSV were no longer observed in these three regions 10 weeks after acquisition, and it is assumed that there was gradual and random loss of the virus from these areas. The percentage of nematodes that were labeled by virus-specific immunofluorescent labeling in a population of viruliferous nematodes decreased gradually after TRSV acquisition when the nematodes were placed on a nonhost of the virus, and the loss of immunofluorescent labeling paralleled the decrease in the ability of the nematode population to transmit the virus. TomRSV was localized only in the triradiate lumen based on thin-section electron microscopy. No virus-like particles were observed in any part of the food canal of nematodes that had fed on CLRV-infected plants. Virus-like particles that appeared to be partially degraded were observed only in the triradiate lumen of nematodes that had fed on SqMV-infected plants. These results clarified the status of localization of two nontransmissible viruses in X. americanum and presented evidence that two nematode-transmissible viruses, TRSV and TomRSV, are localized in different regions of the food canal of X. americanum.