猪囊尾蚴“四性细胞系”代射产物（可溶性抗原）的免疫原性

应用仔猪20头,以猪囊尾蚴“四性细胞系”的可溶性抗原作为免疫原,对经过第1次用不同细胞剂量疫苗免疫的猪,再次用与细胞数量相适应的细胞代射产物的不同剂量疫苗,对其中的11头进行第2次免疫以第2次还是注射细胞疫苗的3头、只注射1次细胞疫苗的2头,和空白对照猪2头作对照组,以观察代射产物抗原的免疫原性。于第1次细胞疫苗免疫后的68d,最长94d用细胞加代谢产物疫苗进行了这次免疫,14d后攻虫,每头使用人有钩绦虫卵,6000枚,3个月后屠宰检查虫体。第1次用10万细胞疫苗免疫,第2次用1千万细胞加代谢产物疫苗免疫该组动物中的2头,平衡有5个囊尾蚴,但这2头猪均发生了囊尾蚴钙化;另一组第1次用100万细胞疫苗免疫,第2次用2千万细胞加代谢产物疫苗免疫该组全部3头动物,平均有3.6个囊尾蚴,这3头猪也都有囊尾蚴钙化。2个实验组出现免疫猪的100%的钙化现象,是免疫治疗作用,是猪囊尾蚴四性细胞系代谢产物的特殊免疫作用。     

猪带绦虫卵对实验猪的攻虫效力研究

用猪带绦虫卵攻击免疫猪和空白对照猪,以观察虫卵的侵袭力,动物实验历时2a,设计使用8－12日龄仔猪102头,分3次实验,共22个组,我们用不同剂量、不同抗原成分的猪囊尾蚴细胞疫苗,以不同免疫次数,对使用对象动物（猪）进行免疫后,于不同免疫期,以不同量的猪带绦虫卵进行攻虫,尽管使用疫苗剂量的差别有100倍,免疫期相距有4倍,攻虫量相差至15倍,而虫卵的效力都很显著。这种不是采用最佳免疫剂量,最佳免疫期,最佳攻虫剂量,却是更为紧密地接近于猪实际所处的易受感染环境的免疫实验,才能检出疫苗的免疫力和实用性,剖检出的猪囊尾蚴虫体的数量和状态,表面上看是猪带绦虫卵的攻虫效力,实则是猪囊尾蚴细胞灭活油乳剂疫苗免疫力的体现,只有用不同数量的虫卵攻击不同成分疫苗免疫猪的不同免疫期这样复杂的情况,才能够获得猪带绦虫卵真实的攻击力,猪带绦虫卵的侵袭力是不稳定的,是受许多生物学因素控制。     

猪囊尾蚴细胞疫苗的区域试验研究

对在吉林生物制品厂GMP车间生产的猪囊尾蚴细胞灭活油乳剂疫苗进行全国南、北重疫区、大范围的区域性免疫试验,以检验疫苗的安全性和免疫效力;在内蒙兴安盟科右前旗和四川阿坝州茂县选定实验点,对10－16龄仔猪进行编号,各地分别设定实验猪10000头,对照猪3000－6000头。给实验猪首免后,间隔21d或6个月后进行第2次免疫,抽样采取血样,到老丰姓宰年猪时剖检免疫结果;在南方,免疫猪的猪囊尾蚴感染率为0．084％,处于同一条件下的对照猪感染率为10．8％,免疫猪的感染率是未免疫猪感染率的1／128．57,即0．78％,免疫猪的保护率为99．22％;在北方,免疫猪的感染率为0．22％,对照猪的感染率为4．1％。免疫猪的感染率是对照猪感染率的1／18．636,即5．36％,免疫猪的保护率为94．64％。南北两地区域试验的平均保护率为96．18％;猪囊尾蚴细胞灭活油乳剂疫苗使用安全,免疫保护率高。     

弓形虫紫外线弱毒虫株的培育及免疫研究（第二报）

本文报道了弓形虫NT强毒虫株,经紫外线全暴露垂直连续照射,通过细胞致弱培养筛选出抗辐射变异虫株NTA-Ⅲ系。本虫对猪、兔和小鼠的毒力均明显减弱。猪安全试验116头,21头出现弱反应,占18.1％,无重病或死亡;非带虫免疫试验36头,连续测35128天,均末查到虫体和包囊。用含虫数10~5/毫升弱毒虫苗每头猪接种1毫升,6个月免疫保护力为100％。     

应用重组抗原预防猪囊虫病的实验研究

应用两种重组抗原分别制成免疫刺激复合体疫苗进行猪囊虫病免疫预防实验。实验猪接种二次,间隔14d,第二次接种后7d 用有钩绦虫卵感染,2万个·头~(-1)。感染后116d 屠宰剖检。对照组9头猪共发现1067个囊虫,平均118.6个·头~(-1);免疫 A 组8头实验猪共发现510个囊虫,平均63.75个·头~(-1),减虫率为46.2%;免疫 B 组9头实验猪共发现83个囊虫,平均9.2个·头~(-1),减虫率为92.2%.在免疫 B 组实验猪体内发现的囊虫发育不全,眼观虫体小,囊液少,囊膜较厚,不透明,呈乳白色;病理组织学检查发现,囊虫组     

建立猪囊尾蚴细胞系的研究

为建立具有免疫原性的猪囊尾蚴细胞系,试验对猪囊尾蚴细胞进行了体外培养,并将建立的细胞系命名为猪囊尾蚴CC-97免疫细胞系。猪囊尾蚴细胞原代培养30d后形成单层细胞,然后将单层细胞以1：2分种率传代培养,相隔7d传代一次,连传24代。结果表明：光镜下观察发现,细胞系由3种类型细胞组成,以椭圆形细胞占优势,梨形、球形细胞数量接近。放射自显影法测定细胞分裂情况,3H—TdR显示细胞生长指数,结果均表明,细胞对数增殖期长达7d,细胞从12h开始倍增分裂,第四、五天相继达到倍增分裂高峰,细胞增殖率达11倍,增量达6．32X10^（9）／L,后来达到1：37的分种率,细胞数为3．7X10^（10）／L;细胞周期约为32h,细胞系以二倍体细胞为主,染色体有10对2条,细胞蛋白质组分有30个区带,酯酶同工酶谱显示一条区带,分子量约32kDa;细胞系经荧光抗体检测表明,与猪囊尾蚴具有同源性,致肿瘤性与外源污染检验均为阴性。结果提示,建立的猪囊尾蚴细胞系是一个形态均一、生长旺盛、遗传性稳定、免疫原性高、无污染、无致肿瘤性、与猪囊尾蚴同源的生物学新品系。     

鉴别PRRSV野毒感染与弱毒活疫苗TJM-F92免疫d120-ELISA方法的应用

本实验研究了免疫后攻毒的GST-d120特异性抗体血清动力学变化特点,d120-ELISA和IDEXX检测不同免疫状态临床样品S/P值之间的区别与联系,并根据结果判断免疫动物是否发生野毒感染或存在弱毒疫苗的母源抗体。血清动力学实验中,免疫组6头实验动物免疫弱毒活疫苗TJM-F92(简称TJM-F92),对照组4头实验动物注射等体积PBS,第28天2组分别注射强毒TJ F3,采集血清,绘制血清动力学曲线。d120-ELISA检测结果显示,免疫组中5头免疫及攻毒后均为阴性,1头免疫1d~28d为阴性,攻毒后血清抗体水平上升并在第14天转为阳性;对照组4头动物攻毒后17d左右出现抗体阳性转化。IDEXX检测结果显示,免疫组均在第10天左右出现血清阳性转化,抗体水平逐渐上升并维持较高水平,攻毒后血清抗体无较大变化;对照组在攻毒后7d左右出现阳性转化。结果表明,d120-ELISA检出抗体阳性的时间要晚于IDEXX试剂盒10d左右,但d120-ELISA能够检测出IDEXX试剂盒无法检出的免疫TJM-F92后发生强毒感染的动物。临床应用试验中,采集并检测HP-PRRSV的TJM-F92和弱毒活疫苗JXA1-R(简称JXA1-R)免疫14d和28d后的临床血清样品,以及疑似发生PRRSV感染和未发生感染的灭活疫苗免疫猪场的样品。试验结果显示,d120-ELISA检测TJMF92免疫阳性血清为阴性;在免疫14d和28d后,d120-ELISA检出JXA1-R临床免疫血清阳性率为0%(0/15)和86.7%(13/15),相应IDEXX检出阳性率为86.7%(13/15)和100%(15/15)。d120-ELISA和IDEXX检测免疫灭活疫苗并疑似发生PRRSV感染的猪群样品的阳性率分别为45.0%(9/20)和100%(20/20),而检测未感染猪场样品的阳性率分别为0%(0/30)和40%(12/30)。综上所述,血清动力学试验和和临床应用试验结果证明,d120-ELISA可以鉴别野毒感染与TJM-F92或灭活疫苗免疫动物,为组装ELISA试剂盒、筛选并剔除TJM-F92免疫动物中发生野毒感染的动物、净化猪群奠定了基础。     

猪附红细胞体病的流行规律及治疗试验

试验共调查不同年龄体重的猪3800头，其中体重10～30kg猪1500头，30～60kg猪1200头，60kg以上育肥猪800头，成年母猪300头，按20％比例耳静脉采血化验。选择红细胞感染率在50％以上的患病猪1171头，随机分为5个组，分别用附红细胞体注射液、长效土霉素、血虫净、血虫净配合长效土霉素和远征霉素进行治疗。同时将猪附红细胞体耳静脉感染家兔，并将感染兔的全血接种健康兔且同未接种健康兔同笼饲养，结果表明：猪附红细胞体的感染率达80％以上，发病率为47％，以小兔最高。应用血虫净配合远征霉素或长效土霉素治疗，治愈率可达80％以上，60kg以上成年猪治愈率量高。猪附红细胞体可以通过血液传染给家兔，同笼接触饲养也可传染。     

家兔黄艾美耳球虫活虫苗免疫预防的研究

本试验使用黄艾美耳球虫活虫苗重复免疫２月龄新西兰品种无球虫兔，建立３种免疫程序：Ⅰ均等高剂量免疫；Ⅱ均等低剂量免疫；Ⅲ加倍递增剂量免疫。免疫过程中，对临床症状，增重，卵囊排出量，肠道粘膜的表面形态病变，特异性血清ＩｇＧ效价进行了比较研究。综合分析表明加倍递增剂量免疫组（免疫５次，间隔５ｄ，起始卵囊量为２００个·只＾－１·次＾－１）效果最好，攻虫后卵囊排出量和增重与对照组相比差异极显著或差异显著（Ｐ     

猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合表达及保护性分析

【目的】获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原，为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础。【方法】PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列，经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX－4T-1连接转化BL21感受态细胞，酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆。测序正确的质粒经EcoR I和Not I酶切处理后与截去信号肽的18 kD基因连接，构建双基因融合表达载体pGEX-4BX/18。用IPTG诱导的表达产物，进行SDS－PAGE电泳、Western blot分析活性。分别用300μg重组GST-4BX、GST-4BX/18蛋白免疫猪，间接ELISA测定抗体水平。感染后90 d剖检计算各组的减虫率，比较评价重组抗原的免疫保护性。【结果】4BX/18 kD在大肠杆菌中获得高效表达，表达产物为50 kD的融合蛋白，并能被人囊虫和感染初期的猪囊虫阳性血清所识别。重组抗原免疫猪后45 d抗体达到峰值，联合表达重组抗原的减虫率为97%，GST-4BX免疫组的减虫率为95%。【结论】重组抗原4BX 和4BX/18kD均具有较好的免疫保护效果，有望利用它们研制出抗猪囊尾蚴病的高效疫苗。