甘薯黑斑病菌的分离与适合其基因组文库构建的DNA提取方法比较研究

根据常规分离土传病菌的方法结合甘薯黑斑病菌的特性,对甘薯黑斑病菌进行分离.并用2种改良的DNA提取法提取基因组DNA与常用DNA提取法进行对比分析,结果表明,CTAB法所获得的甘薯黑斑菌DNA质量最高,用该提取方法获得的高质量DNA为构建黑斑病菌基因组文库构奠定了基础.     

采用CTAB与SDS法提取白术DNA的研究

[目的]获取白术中高质量基因组DNA。[方法]选取新鲜白术叶片,破碎细胞壁,用经改良的CTAB与SDS法进行DNA分离纯化提取。[结果]改良CTAB法提取的DNA OD值为1.8～1.9,较改良SDS法的OD值(1.5～1.6)高。[结论]改良CTAB法提取的DNA浓度和纯度较高,可作为模板用于后续分子标记的研究。     

革兰氏阳性与阴性细菌基因组DNA提取方法的优化

在分析现有提取微生物基因组DNA的原理和方法基础上,对SDS-NaCl法进行了改良,以商品化微生物基因组提取试剂盒提取的基因组结果为对照,利用改良的SDS-NaCl法,分别提取大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的基因组DNA.结果表明,改良的SDS-NaCl法提取的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌基因组DNA的OD260/OD280分别为1.88、1.89、1.81,浓度分别为61.67、64.32、53.22μg/mL;而商品化试剂盒提取大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌基因组DNA OD260/OD280分别为1.85、1.87、1.83,浓度分别为64.07、58.43、52.34μg/mL.结果证明改良SDS-NaCl法提取的革兰氏阳性和阴性细菌的基因组DNA可用于后续试验如全基因组测序和PCR等,同时可快速获得大量的高质量微生物基因组.     

信号芋螺基因组DNA提取方法的优化

高质量的基因组DNA的获取是芋螺毒素基因克隆及基因组文库构建的关键。笔者采用4种方法提取信号芋螺（Conus litteratus)的不同组织器官的DNA，并综合比较了各组DNA的浓度和纯度、DNA片段的大小和完整性。结果表明，由改良的DNA快速提取试剂盒法提取的DNA纯度和浓度较好；4种组织器官中，腹足纯度较高，是更合适的提取组织；肝胰脏和毒管获取的DNA产率最高，但片段完整性差，污染严重；PCR反应获得了跟预期大小一致的特异扩增产物。因此，信号芋螺基因组DNA的提取最佳方法为改良的DNA快速提取试剂盒法，提取部位为腹足组织，可以获得高质量的基因组DNA，且符合后续实验要求。     

水稻稻曲病菌PCR快速检测技术及应用

根据NCBI Gen Bank中已登记的水稻稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)的全基因组序列,通过对生物信息学方法获得特异性基因,并根据核苷酸序列设计特异性引物。获得的检测引物UV-788F/UV-788R对所有水稻稻曲病菌具有很好的特异性,通过优化退火温度等反应体系,可稳定扩增出788 bp的目的片段,而其他参考菌株及健康种子均无条带。建立的检测方法对菌株基因组DNA的灵敏度为2 pg/μL。对测试样品基因组DNA扩增结果表明:受检的水稻种子检测到水稻稻曲病菌。研究建立的水稻稻曲病病菌的定性检测方法可实现对菌株的分子鉴定和种子的快速检测。     

苹果树木质部及韧皮部组织基因组DNA的提取及质量检测

苹果树木质部及韧皮部中含有大量的酚类、多糖等次生代谢物质,严重影响基因组DNA提取的得率和纯度。采用3种不同方法,即改良的CTAB法、快速盐提法、试剂盒法,从苹果树木质部及韧皮部提取基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测所提取基因组DNA的质量。结果表明,改良的CTAB法提取的组织基因组DNA不论是浓度、质量还是随机引物PCR扩增效果均能够满足进一步分子试验需要,而改进的快速盐提法和试剂盒法提取得率太低,不能用于分子生物学研究。因此改良的CTAB法是适合苹果树木质部及韧皮部组织基因组DNA提取的最佳方法。     

苹果轮纹病菌DNA提取方法的比较

采用尿素提取法、氯化苄提取法以及SDS-CTAB提取法对苹果轮纹病菌的基因组DNA进行了提取和比较.结果表明,3种方法均能提取到苹果轮纹病菌的基因组DNA.其中,SDS-CTAB法效率最高,提取的DNA质量最好,但是耗时较长;尿素提取法操作简单快速,但是提取的DNA质量较低;氯化苄提取法提取的DNA纯度最低,蛋白质污染严重.将所提取的DNA经ITS试验检测与电泳检测,证明3种方法提取的DNA扩增效果良好,均可满足该真菌rDNAITS分析的要求.     

藜麦基因组DNA提取方法的比较（英文）

为了快速获取高质量的藜麦基因组DNA,采用改良的CTAB法、SDS法和高盐低p H值法等3种方法分别提取藜麦不同组织(叶、茎、根部)的基因组DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法测定比较所提DNA的质量和产量,同时进行了PCR-SSR、SSCP等分子检测。用不同方法提取藜麦不同组织部位DNA的结果表明:不同提取方法的凝胶检测条带均比较清晰,且无明显降解;改良的CTAB法所提取的DNA产率最高,SDS法其次,而高盐低p H值法最低;不同方法提取的叶片DNA产率均明显高于根部和茎部;改良的CTAB法和高盐低p H值法所提取的DNA质量较好,多酚类化合物和多糖等杂质去除得比较完全。PCR-SSR和SSCP检测结果表明:不同方法和不同组织所提取的DNA均能跑出良好的条带,适合进行后续的分子生物学研究。     

藜麦基因组DNA提取方法的比较

为了快速获取高质量的藜麦基因组DNA,采用改良的CTAB法、SDS法和高盐低pH值法等3种方法分别提取藜麦不同组织(叶、茎、根部)的基因组DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法测定比较所提DNA的质量和产量,同时进行了PCR-SSR、SSCP等分子检测。用不同方法提取藜麦不同组织部位DNA的结果表明:不同提取方法的凝胶检测条带均比较清晰,且无明显降解;改良的CTAB法所提取的DNA产率最高,SDS法其次,而高盐低pH值法最低;不同方法提取的叶片DNA产率均明显高于根部和茎部;改良的CTAB法和高盐低pH值法所提取的DNA质量较好,多酚类化合物和多糖等杂质去除得比较完全。PCR-SSR和SSCP检测结果表明:不同方法和不同组织所提取的DNA均能跑出良好的条带,适合进行后续的分子生物学研究。     

玉米干种子基因组DNA提取方法的改进

为了实现玉米干种子基因组DNA快速提取,针对玉米干种子淀粉含量高的特点,对传统核酸CTAB提取方法进行了优化与改良,将提取的DNA进行分光光度计及琼脂糖凝胶电泳检测。结果显示,DNA的OD_(260)/OD280值为1.79~1.95,OD_(260)/OD230值为1.90~2.15;琼脂糖凝胶电泳图谱清晰,条带无拖尾现象,说明采用改良方法提取的DNA质量高、无降解。以改良方法提取的DNA样品作为模板进行分子标记检测试验,结果清晰稳定,进一步证明采用改良CTAB法直接从玉米干种子中提取的DNA可以满足SSR和SNP等分子试验的要求。     

高质量天麻基因组DNA的提取

以新鲜天麻块茎为试验材料,采用改良CTAB法提取天麻基因组DNA用于遗传分析和分子标记辅助育种.结果表明,改良CTAB法提取的天麻基因组DNA产量高、纯度高;PCR扩增条带清晰、明亮,无杂带和脱尾;能满足AFLP和SSR的分析要求.说明改良CTAB法能获得高质量天麻基因组DNA.     

沙漠肉苁蓉基因组DNA的提取方法比较

[目的]探索适合肉苁蓉基因组总DNA的提取方法。[方法]分别采用改良十六烷基溴化胺（CTAB）法、快速一步（ROSE）法和改良十二烷基苯磺酸钠（SDS）法提取肉苁蓉肉质茎中的基因组DNA,然后通过紫外分光光度计测定不同方法所提取DNA的纯度和浓度,并通过琼脂糖凝胶电泳检测,比较几种提取方法的效果。[结果]3种方法所提取的DNA纯度和浓度有差别,从综合的结果来看,以改良的SDS方法为好,可以比较彻底地除去酚类和糖类,可直接用于下一步的研究。[结论]改良SDS法为较适合沙漠肉苁蓉基因组DNA提取的方法。     

一种山桐子高质量DNA提取方法

山桐子富含大量初生与次生代谢产物,常规方法提取高质量DNA比较困难。该文以CTAB法为框架,裂解前进行PEG洗脱,并优化与简化后续CTAB法操作步骤,形成适宜山桐子高质量DNA提取的改良CTAB法。在此基础上,该文以山桐子幼叶为材料,比较SDS法、CTAB法、试剂盒法、改良CTAB法提取山桐子DNA效果。结果显示,改良CTAB法提取的山桐子DNA浓度高、纯度高,DNA浓度可高达417.5~470.5 ng·μL^-1,平均为438.93 ng·μL^-1,为试剂盒法的8.5倍;所提各样本DNA蛋白质污染、DNA糖类与盐污染得到较好的控制,DNA完整,DNA质量显著优于其他方法。通过本文改良CTAB法,提取的山桐子DNA可以满足简单重复序列(SSR)标记分型、简化基因组测序等相关分子试验所需,为山桐子分子生物学的开展提供了基础。     

油梨果肉DNA提取方法的比较

为了获取高质量的油梨果肉DNA,以油梨果肉为试材,比较改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法对油梨果肉DNA的提取效果。结果表明:上述3种方法均可从油梨果肉中提取DNA,但改良SDS法与改良CTAB法所获得的DNA浓度都在600μg/m L以上,纯度(OD260nm/OD280nm)均在1.8左右,纯度高且完整性较好,可用于未来分子标记分析。     

一种提取大豆疫霉菌菌丝体基因组DNA的新方案

大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)侵染大豆引起的大豆疫霉根腐病是大豆生产上的毁灭性病害之一.关于该病菌菌丝体基因组DNA的提取方法,目前国内外已经报道了很多,最常规的一种就是CTAB法,但其在提取前病原菌的培养上需要先在固体培养基上培养,然后再转至液体培养基中培养,整个过程耗时长、步骤繁琐、效率低、安全性低.试验直接以固体培养基上的菌丝体为原料,采用尿素提取液提取菌丝体基因组DNA的方法,耗时短,步骤简捷,提高了效率和安全性.     

Chelex-100法快速提取白粉菌基因组DNA及ITS2序列的克隆

[目的]建立快速提取及克隆白粉病菌基因组DNA的方法。[方法]以豌豆白粉菌分生孢子为材料,用Chlex-100法快速提取白粉菌基因组DNA,并以此为模板对内转录间隔区Ⅱ（ITS2）序列进行了巢式PCR扩增、克隆、测序及分析。[结果]Chlex-100法可高效的提取白粉病菌基因组DNA,适用于PCR扩增及相关分析。[结论]为快速有效地对白粉病资源进行大规模分子分类鉴定奠定了基础。     

两种方法提取柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊基因组DNA的对比试验

为寻找一种合适的提取球虫基因组DNA的方法,试验采用氯化苄法(BC)和常规提取DNA的方法提取了鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊基因组DNA。氯化苄的化学性质类似于苯酚,在65℃条件下与蛋白质和几丁质等发生反应,能够有效地破坏球虫卵囊壁,可用于大规模提取基因组DNA;常规方法提取DNA的程序是用蛋白酶K消化处理,用酚/氯仿抽提,再用氯仿抽提,部分步骤需要重复。2种方法对比试验结果表明,二者均可用于鸡球虫基因组DNA的提取,所获得的DNA数量和质量都很高,可用于各种分子生物学实验。但BC法具有简便、快速、经济实用的特点,更适用于球虫卵囊大量样品的DNA快速提取。     

一种简单高效稳定的高质量第X期鸡胚盘DNA提取方法的建立

为了建立快速高效稳定的高质量鸡胚盘DNA提取方法,试验通过收集第X期鸡胚胎,应用酚氯仿抽提法、微量组织DNA提取试剂盒法和优化的硅胶膜吸附法分别提取鸡胚DNA,所提DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳初步检测,并经PCR进一步分析检验,对不同方法提取DNA的稳定性和质量进行评价。结果表明:微量组织DNA提取试剂盒法提取的基因组DNA比用酚氯仿抽提法提取DNA的方法具有更高的稳定性和更好的质量,而微量组织DNA提取试剂盒法与本试验建立的优化的硅胶膜吸附法提取的基因组DNA稳定性和质量相近,但本试验建立优化的硅胶膜吸附法,无需蛋白酶K消化胚盘组织,因而优化了步骤降低了成本。试验建立了一个简单高效稳定的高质量低成本的第X期鸡胚盘DNA提取方法,为后续的相关研究建立了一个有效的鸡受精蛋胚盘DNA提取方法。     

彩色甜椒基因组DNA提取方法的优化

以不同颜色的甜椒为试验材料．采用CTAB法、SDS法、ROSE法和氯化苄法提取彩色甜椒基因组DNA。结果表明,CTAB法所提取DNA的质量和纯度较高,以此DNA为模板进行RAPD—PCR分析,DNA扩增效果较好,带形清晰、整齐,说明CTAB法提取的DNA较为完整,能用作RAPD—PCR模板来开展彩色甜椒分子水平的研究。     

枸杞DNA的提取方法研究

[目的]寻求高质量枸杞DNA的有效提取方法,为开展我国枸杞种质资源准确的分子鉴定评价提供试验基础。[方法]针对枸杞组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,比较了常规十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法和改良CTAB法的处理效果。[结果]常规CTAB法提取DNA难以除去多糖类杂质,溶液极黏稠,致使移液枪吸取困难,取量不准;改良CTAB法提取DNA产率高,无明显降解,杂质少,OD260nm／OD280nm比值在1．80左右,表明DNA纯度高,污染少。通过基因组DNA—AFLP指纹图谱分析,改良CTAB法完全满足试验要求。并对改良CTAB法的关键步骤作了分析讨论。[结论]为枸杞DNA的有效提取提供了方法依据。