Neurospora crassa产木聚糖酶发酵条件及酶学特性

从青藏高原土壤中筛选出一株产木聚糖酶较高的菌株Neurospora crassa SD10。通过单因素试验和正交试验对菌株进行发酵条件优化和酶学性质探究。结果表明,菌株SD10最佳发酵条件为:麸皮30 g/L、蛋白胨20 g/L、Mn2+0.5 g/L、培养温度33℃、转速230 r/min、接种量2%、初始pH值8.0、发酵时间84 h。菌株产木聚糖酶的最适反应温度为50℃,最适反应p H值为6.0,在40～50℃和pH值4.0～8.0时有较好的稳定性,能保持80%以上酶活力,Fe2+、Zn2+、K+对酶活力有促进作用,Na+、Mg2+、Ca2+、Mn2+、Cu2+对酶活力有抑制作用。Neurospora crassa SD10优化后产木聚糖酶活力达9.4 U/mL,所产木聚糖酶具有良好的pH值稳定性。     

青藏高原低温纤维素降解菌的筛选与酶学特性

以青藏高原冷地早熟禾草地土壤为样品,筛选低温纤维素降解菌株。采用刚果红染色法(水解圈法)和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法进行菌株筛选与酶学特性研究,结合形态学与分子生物学方法对其进行鉴定。筛选出一株低温纤维素降解菌株(LD19),经鉴定为钉斑链霉菌(Streptomyces clavifer),同时该菌还具有降解半纤维素的能力。该菌产纤维素酶的最适温度为40℃,最适pH值为6,在30～70℃、pH值4～10时相对酶活力较稳定,Zn~(2+)对酶有抑制作用。该菌产半纤维素酶的最适温度为50℃,最适pH值为6,在30～40℃、pH值4～9时相对酶活力较稳定,Cu~(2+)等对该酶有促进作用。该菌株在培养102 h后两种酶的相对酶活力均达到最高值。菌株LD19可以同时分泌低温纤维素酶和半纤维素酶,在饲用酶制剂的应用中具有较大潜力。     

高产脂肪酶菌株的分离鉴定及其酶学性质研究

本研究旨在筛选出一株高产脂肪酶的菌株并进行鉴定,同时评定所产脂肪酶的酶学性质,为饲用脂肪酶的开发提供理论依据和实用参考。通过平板法筛选产酶菌株,根据菌株形态、培养特征、生理生化试验和ITS-r DNA序列分析确定其属种,并对产酶菌株进行初步的酶学性质研究。从富含油污的土壤中筛选出一株高产脂肪酶菌株FZ-4,并鉴定为白地霉(Galactomyces geotrichum),其初步酶学性质研究表明,该菌株所产脂肪酶为胞外酶,在28℃、250 r/min条件下培养96 h所产脂肪酶活力达16.7 U/m L,该酶最适反应p H为7.5,最适反应温度为40℃,在p H为7.0~9.0和20~45℃具有较好的稳定性,且该酶对C16脂肪酸有较强的底物专一性。分离获得的Galactomyces geotrichum FZ-4是一株高效的产脂肪酶菌株,具有潜在的研究和开发价值。     

产共轭亚油酸乳酸菌菌株的筛选及其最佳发酵条件的研究

通过测定乳酸菌发酵液中共轭亚油酸的含量筛选出具有高共轭亚油酸转化能力的乳酸菌菌株并探讨其最佳的发酵条件。分别对15株分离于猪胃肠道的乳酸菌发酵培养后,采用紫外分光光度法筛选出具有转化亚油酸生成共轭亚油酸能力强的菌株。以2株产共轭亚油酸能力较强的菌株为出发菌株,探讨温度、时间、p H、接种量和葵花籽油添加量等不同发酵条件对代谢产物中共轭亚油酸的影响。结果发现乳酸菌W1和W2(分离自胃)具有较高的生产共轭亚油酸的能力,其共轭亚油酸的产量分别为2.58和9.44μg/m L。并获得这株菌生成共轭亚油酸的最佳发酵条件:W1产生共轭亚油酸最佳发酵条件为37℃,p H6.0,培养时间120 h,菌种接种量为5.5 m L/100 g,葵花籽油接种量为2.5%,W2产生共轭亚油酸最佳发酵条件为37℃,p H5.5,培养时间120 h,菌种接种量6.5 m L/100 g,葵花籽油接种量3.0%。     

大兴安岭森林土壤中纤维素降解真菌的分离及产酶条件优化

为了获得高酶活性的常温纤维素酶产生菌,试验采用纯培养的方法以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为碳源在28℃下对内蒙古大兴安岭森林土壤中的纤维素降解真菌进行筛选,以细菌18S rDNA通用引物PCR扩增后进行序列同源性比对确定种属,以3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定纤维素酶活性,并对酶活较高的菌株进行产酶条件优化。结果表明:共分离到2株酶活性较高的常温纤维素降解真菌W14和DAZJ3,菌株W14为草酸青霉(Penicillium oxalicum),菌株DAZJ3为Oidiodendron tenuissimum;2株菌的最佳产酶条件:初始pH值为6、以酵母膏为碳源、培养温度分别为35℃(菌株W14)和30℃(菌株DAZJ3)、培养时间为4 d,羧甲基纤维素(CMC)酶活性可分别达到103.89 U/mL和158.36 U/mL。说明菌株W14和DAZJ3是两株具有较强应用潜力的常温纤维素降解真菌。     

木质素降解菌的筛选及其漆酶性质研究

为筛选产漆酶的木质素降解菌,采用愈创木酚平板法和RB亮蓝平板法进行菌株筛选,利用16S r DNA序列分析对菌株进行鉴定,通过液体发酵培养对漆酶活性和木质素降解能力进行研究。将漆酶基因cot A克隆到表达载体p ET-32a(+)上获得重组质粒p ET-32a(+)-Cot A并转化到BL21中进行表达,通过酶活测定将表达条件进行优化。结果:从白蚁肠道中成功筛选出1株产漆酶的木质素降解菌,鉴定为枯草芽胞杆菌。漆酶的最适酶活温度为60℃,最适酶活p H为3.5~4.0;0.2 mmol/L Cu2+可诱导菌株漆酶的产生,缩短了产酶时间并提高了酶活性。菌株木质素降解率在液体发酵培养24 h后达到了17.1%。漆酶基因大小为1 542 bp,表达的重组蛋白为85 ku,属于有活性的可溶性蛋白。在IPTG浓度为1mmol/L、Cu2+浓度为0.3mmol/L、诱导时间为9 h的条件下,漆酶蛋白活性可达到113.10 U/L。研究表明,本试验成功筛选出1株降解木质素能力较强的枯草芽胞杆菌,获得可分泌较高活性漆酶的重组菌,为木质素酶在畜牧业生产实践上的应用奠定了基础。     

产酸性木聚糖酶链霉菌的鉴定、酶学特性及发酵工艺研究

木聚糖是谷物类饲料中的主要抗营养因子。为筛选高效降解半纤维素的菌株,提高粗饲料利用率,本试验采用水解圈法从土壤中筛选出1株产木聚糖酶的细菌,经鉴定为灰略红链霉菌,命名为Streptomyces griseorubens WL003。该菌所产木聚糖酶的最适酶促反应温度和p H分别为65℃、4.5,于30~55℃处理10 min后,残余酶活不低于80%;于p H 3.5~11.0处理1.5 h,残余酶活仍保持在88%以上;Tween-80可提高木聚糖酶活力,而Cu2+、SDS及β-巯基乙醇则会较强地抑制酶活。该菌株以9%接种量接种至最适发酵培养基,碳源为10%麦秸,氮源为1.41%牛肉膏,0.1%吐温-80,初始p H为6.0,经32℃、180 r/min下培养7 d时,所产木聚糖酶活性最高,可达50.82 U/m L,为优化前2.5倍。菌株WL003对麦秸的粗纤维降解效果最好,对苜蓿草粉的粗纤维降解效果最差。证明从土样分离到的酸性木聚糖酶菌株WL003,在降解饲料粗纤维方面具有较好的应用潜力。     

大熊猫粪便中纤维素降解菌的筛选及其产酶条件的优化

本试验旨在从大熊猫粪便中筛选出能够降解纤维素的菌株,并对该菌株进行鉴定和产酶条件的优化。利用羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源的培养基,结合碘液染色法、滤纸分解试验和纤维素酶活力测定,从大熊猫粪便中筛选得到1株纤维素降解菌DL。结合形态学观察、生理生化特征和16S rDNA基因序列同源性分析,初步鉴定该菌株为Paenibacillus cookii LZ033,它是一种产芽孢且好氧的革兰氏阳性菌。为确定菌株DL的最佳产酶条件,选取培养基初始pH、培养温度、摇床转速以及装液量4个因素,在单因素试验结果的基础上,利用正交试验,确定菌株DL的最佳产酶条件为培养基初始pH为6、培养温度为35℃、摇床转速为125 r/min、250 mL三角瓶装液量为100 mL,在此条件下纤维素酶活力(以滤纸酶活力表示)为102.3 U/mL。     

一株蚕沙纤维素降解菌的鉴定及产酶优化和生物强化效果

为了提高蚕沙生物转化资源化处理效率,从蚕沙废弃物中筛选出1株高效纤维素降解菌株DC-15,优化产酶条件并评估其对蝇蛆生物转化蚕沙体系的强化作用,以期为蚕沙高效资源化处理提供优质菌株。采用羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethyl cellulose, CMC-Na)平板法和刚果红染色法进行筛选,通过形态学观察、生理生化试验和16S rRNA基因序列系统发育分析进行种属鉴定,利用DNS法(3,5-二硝基水杨酸法)测定菌株DC-15的纤维素酶活力,并优化其产纤维素酶条件。结果表明,获得的高效纤维素降解菌DC-15鉴定为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis),该菌株最优生长及产酶碳源和氮源为羧甲基纤维素钠(CMC-Na)和蛋白胨;最适接种量、产酶温度和pH分别为2%、37℃和7。优化后菌株DC-15的纤维素内切酶(CMCase)、滤纸酶(FPase)、纤维素外切酶(CBH)最高酶活力分别可达11.66、11.62、10.01 U/mL;菌株DC-15回补蝇蛆生物转化蚕沙体系后(6 d),蚕沙纤维素降解率为71.2%,显著高于对照组的59.6%。获得的菌株DC...     

一株牛瘤胃耐酸纤维素降解细菌的筛选、鉴定及酶学特性分析

通过对夏南牛瘤胃样本进行微生物富集培养,筛选、获得一株纤维素高效降解细菌ZJ08,分子鉴定确定该菌属于假黄单胞菌属,其纤维素酶活的最适温度为55℃,最适p H为5.0,是一株具有较强耐酸特性的纤维素降解菌株,具有潜在的应用价值。     

蒙古马盲肠中纤维素分解菌的筛选、鉴定及酶学特性分析

为研究蒙古马耐粗饲料的优良特点,试验以蒙古马盲肠内容物为研究对象,旨在筛选、分离出高效的蒙古马源纤维素分解菌株,并对分离菌株进行鉴定和酶学特性分析。采用羧甲基纤维素平板法和摇瓶发酵法分离菌株并鉴定菌株类型。最后,通过测定纤维素酶活力分析菌株在不同pH、温度、碳源和氮源条件下的酶学特性。研究从蒙古马盲肠内容物中分离筛选到具有较高降解纤维素能力的解淀粉芽孢杆菌H3(Bacillus amyloliquefaciens H3)。菌株H3分泌纤维素酶的最适p H为4.8,在p H 3.0～8.0范围内,其酶活力相对稳定;在温度为65℃,酶活力最高,当温度为40～50℃时,该酶活力维持在80%左右,稳定性强。此外,H3发酵所需的最佳碳源为玉米粉,最佳氮源为2%的蛋白胨+酵母粉复合物(1:1),它具有相对较高的纤维素酶活力,有深入开发的潜力。     

毕赤酵母产木聚糖酶发酵条件优化及其酶学特性研究

本研究在50 L发酵罐水平上对毕赤酵母产木聚糖酶发酵条件进行优化,并对其酶学特性进行研究。利用单因素试验系统考察了微生物种龄、诱导时机、诱导培养温度和诱导时期p H值对产木聚糖酶的影响。结果表明:在最佳种龄23 h、发酵液细胞湿重121 g/L左右开始诱导,诱导培养温度26℃,诱导时期维持p H值5.6的优化工艺条件下,木聚糖酶酶活可达到47570 U/m L;酶的最适反应p H值为5.0~6.0,且具有较好的耐热性,85℃作用2 min后酶活收率仍可达到87.8%,能够用于饲料高温制粒。     

一株瘤胃源产纤维素酶菌株的培养条件优化

山羊瘤胃内容物菌群中分离得到的一株产纤维素酶菌株T15,采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)进行优化。对菌株培养基成分碳源、氮源和金属离子进行优化时发现,6 g/L的葡萄糖为碳源和5 g/L的牛肉膏为氮源时,产生酶活力达到最高。培养基中添加0.03 mol/L的Ca~(2+),对菌株产生纤维素酶有促进作用。在最优发酵培养基成分为基础,对菌株T15的发酵培养温度、培养时间、培养pH条件和接种量等四因素、三水平进行正交试验,该菌株的产纤维素酶最优发酵条件:以9 mL为接种量,培养基pH值7,培养温度35℃和培养时间40 h,其产生酶活力达到26.76 U/mL;其中培养时间、接种量、培养温度、和培养基酸碱条件对菌株发酵产纤维素酶影响依次增大。     

几丁质酶高产菌株HF-3的筛选及发酵条件研究

为了筛选一株高产几丁质酶菌株,试验采用透明圈法,从长江沿岸、森林土壤泥浆样品中分离几丁质酶生产菌株,得到一株几丁质酶高产菌株(HF-3),进行了生理生化特性、菌落形态及16S r DNA序列测定,并采用单因素优化方法筛选最佳产酶条件。结果表明:该菌为地衣芽孢杆菌;在培养温度为34℃、接种量为5%、胶体几丁质为碳源、表面活性剂为吐温-80时,酶活力达1.58 U/m L,此为最佳产酶条件。     

降解赤霉烯酮芽孢杆菌的筛选、鉴定及性质研究

为了获得一株饲用的高效降解赤霉烯酮(ZEN)的芽孢杆菌菌株,试验通过平板扩散法和酶联免疫法进行筛选,并对降解率较高的菌株进行种属鉴定、性质和产酶情况研究。结果表明:通过筛选共得到7株功能菌,其中菌株Y-1d的降解率最高,经菌落菌体形态、16S rDNA序列分析和生理生化鉴定确定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株在p H值为4.5~6.5、温度为27~47℃的范围内生长良好,对胆盐有一定的耐受性,能够产生淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶。说明试验获得一株性质优良的可用于饲用的赤霉烯酮降解菌株。     

产纤维素酶真菌的筛选与鉴定

为从秸秆中分离出能够降解纤维的菌株,试验采取秸秆样品接种马铃薯琼脂培养基,在室温环境下培养,取分离菌接种纤维素刚果红琼脂培养基,筛选能形成较大降解圈的细菌,并进行形态学和分子生物学鉴定,测定其纤维素酶性质。结果表明,经分子生物学鉴定,筛选菌为黑曲霉菌,该菌在室温环境能够生长,菌株降解圈直径(H)与菌落直径(C)的比值(H/C)为7.64。筛选菌在20 ℃环境下培养5 d酶活达到最高值,为42.18 U/mL。纤维素酶最适pH为7.0,最适反应温度为20 ℃,在20~40 ℃或pH 6.0~8.0环境下作用1 h,相对酶活力仍保持在90%以上。综上所述,本试验分离的黑曲霉菌株是低温产纤维素酶菌株,产酶能力较强,具有潜在的开发价值。     

青海高原产纤维素酶康氏木霉的酶促动力学研究

对分离自青海省东部土壤的产纤维素酶康氏木霉(Trichoderma koningii)0143p株进行产酶条件优化及酶促动力学特性研究。结果表明，T.koningii 0143p菌株在麦麸为碳源、尿素为氮源、起始pH值为7．0、28℃培养6d的条件下产酶量最高。在此产酶优化条件下，0143p菌株的湿固体发酵物滤纸酶活力(FPA)可达32pmol／min，为原产酶条件的1．6倍；酶作用的最适温度为50～55℃，最适pH4．8。T.koningii 0143p菌株可作为纤维素酶解饲料的酶源菌，具有良好的饲用前景。     

耐酸性α-淀粉酶产生菌的筛选及其产酶条件优化

为了分离得到饲料用耐酸性α-淀粉酶的菌株,从食堂排污口取土样,筛选到一株耐酸(p H=4)且产α-淀粉酶的菌株,并对其形态特征、培养特征、生理生化特征、酶学性质及产酶条件进行研究。结果表明:菌体呈杆状,革兰氏染色阳性,胞内形成异染粒和PHB,接触酶、淀粉水解、卵磷脂酶试验呈阳性,反硝化试验、荧光色素呈阴性。根据菌体形态、菌落特征及部分生理生化特性,将其初步鉴定为芽孢杆菌属,即Bacillus sp.SD-1。通过单因素试验对菌株的最适产酶温度及p H进行优化,培养温度为43℃,p H为4.5,发酵60 h,酸性α-淀粉酶活力达到74.6 U/m L。     

产木聚糖酶类芽孢杆菌SD-29发酵条件优化

研究旨在对类芽孢杆菌SD-29产木聚糖酶的发酵条件进行优化,获取最佳发酵条件。以类芽孢杆菌SD-29为出发菌株,对其所产木聚糖酶的酶学性质进行分析,通过单因素试验对培养基中的碳源、氮源、金属离子以及初始p H值、接种量、发酵温度和发酵时间进行优化。结果发现,最佳发酵条件为麦芽糖15 g/L、牛肉膏2.5 g/L、NaNO_3 2 g/L、KCl 0.5 g/L、Ca Cl_2 0.3 g/L,初始pH值为7,以2%的接种量接种,30℃、200 r/min培养18 h后,测得发酵上清液酶活为0.663 U/m L,与初始酶活0.144 U/m L相比,扩大了3.6倍。通过单因素试验优化类芽孢杆菌SD-29产酶发酵条件,木聚糖酶活力得到提高,该研究为后续木聚糖酶的性质研究和异源表达奠定基础。     

黄芪发酵菌的筛选鉴定及纤维素酶学性质试验

为分离发酵黄芪菌株,试验采取黄芪样品接种营养琼脂,置30℃环境培养。取分离菌接种纤维素刚果红琼脂,筛选能形成较大降解圈的细菌进行鉴定,并测定其纤维素酶性质。结果表明,筛选菌为解淀粉芽孢杆菌,该菌株降解圈直径(H)与菌落直径(C)的比值(H/C)为4.03。在37℃环境培养36 h酶活力达到高峰,为32.16 U/m L。在低于60℃及pH值6.0~8.0环境纤维素酶较稳定,可保持酶活力90%以上。