维生素A对高脂饲喂小鼠脂肪降解及胆固醇清除的影响

研究维生素A（VA）对高脂饲喂条件下小鼠（Mus musculus）肝脏中脂肪降解相关基因mRNA表达和血清胆固醇含量的影响,探索其是否可促进小鼠体内脂肪降解及胆固醇清除。通过石蜡切片观察高脂饲喂小鼠肝脏中脂滴分布;利用Real-timePCR检测小鼠肝脏各相关基因mRNA表达量;采用试剂盒测定血清胆固醇含量。结果显示,第1～3天VA处理组与对照组小鼠体重差异不显著（P〉0.05）;第4、9、27天,VA处理组小鼠体重显著低于对照组（P〈0.05）;VA处理组皮下脂肪（0.1890±0.0056）g与腹膜下脂肪垫（0.3862±0.0053）g重量极显著低于对照组（0.2620±0.0020）g与（0.4867±0.0052）g重量（P〈0.01）;切片观察肝脏充脂细胞数量明显减少;VA处理组小鼠肝脏清道夫受体B族Ⅰ型（（SR-BⅠ）、激素敏感脂酶（HSL）基因mRNA表达量极显著高于对照组（P〈0.01）;过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPARγ）、固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）基因表达量显著低于对照组（P〈0.05）;甘油三酯水解酶（TGH）基因表达量显著高于对照组（P〈0.05）;VA处理组小鼠血清胆固醇（CHO）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）浓度均极显著低于对照组CHO及HDL-C浓度（P〈0.01）。说明VA可通过SR-BⅠ促进脂肪降解和血清中HDL-C清除。     

重组生长激素对猪背最长肌及半腱肌中肌肉生长相关基因表达的影响

16头长白×大约克F1代去势公猪,随机分成实验组和对照组,实验组每天注射重组猪生长激素rpGH,每头4mg/d),对照组注射等体积生理盐水,28 d后采样.用RT-PCR方法,以18S rRNA作内标,定量分析背最长肌和半腱肌中肌肉生长抑制素(myostatin)、生肌调节因子(myogenm)、肌源性决定因子(myoD)及钙激活蛋白酶3(calpain 3)、过氧化物增殖体激活物受体γ的共激活物-1(PGC-1)mRNA相对丰度.结果显示(1)实验组平均日增重提高26.1%(P＜0.05);(2)背最长肌和半腱肌myostatin和myogeninmRNA表达无明显变化;(3)半腱肌myoD mRNA丰度增加82%(P＜0.05),calpain3mRNA丰度增加93%(P<0.01);(4)背最长肌myoDmRNA丰度增加79%(P=0.14),calpain 3mRNA丰度增加23%(P=0.11),半腱肌中PGC-1 mRNA的表达有明显下调的趋势(P=0.16).重组猪生长激素能上调肌肉myoD和calpain3的表达,但对背最长肌和半腱肌的调节程度有差别,提示这些基因可能在生长激素(GH)调节骨骼肌生长的途径中起作用.     

猪Tool-like Receptor 4(TLR4)的定位和组织表达

通过辐射杂交板的方法将猪的Tool-like Receptor 4(TLR4)定位在SSC1q2.9→q2.13,它与SW1957紧密连锁(15cR LOD score 15.16)。用RT-PCR表明TLR4mRNA在猪的睾丸、灰质、肌肉、白质、肾脏、心脏、小肠、胸腺、淋巴结、脾、肺和肝脏等各种组织中广泛表达,在肺中的表达量最高。TLR4mRNA在肺中的表达量可能与猪肺部疾病有关。     

皖西白鹅肝脏中GHR，IGF-1和 IGF-1R基因的表达及与朗德鹅的比较

选择90日龄的皖西白鹅和朗德鹅各20只,取肝脏组织。采用半定量逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）的方法,以β-actin为内标,对肝脏组织中生长激素受体（GHR）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、胰岛素样生长因子-1型受体（IGF-1R）的mRNA表达量分别进行比较分析,并分别与鹅的肝脏重及肝重率进行相关性分析。结果表明：皖西白鹅的肝脏重和肝重率都显著大于朗德鹅（p<0.05）;皖西白鹅肝脏中IGF-1的mRNA表达明显高于朗德鹅（p<0.01）;而GHR、IGF-1R mRNA在两品种间没有显著差异。体重与肝脏重显著正相关（r = 0.35,p<0.05）,肝重率与肝脏中IGF-1的mRNA的表达显著正相关（r = 0.67,p<0.01）,而与GHR、IGF-1R mRNA没有显著的相关性。结果提示：（1）90日龄的皖西白鹅肝脏生长优于朗德鹅;（2）两品种鹅肝脏生长的差异可能与肝脏中IGF-1 mRNA表达的差异有关。     

毛囊特异表达载体pUHS-FGF18的构建及转基因小鼠的制备

成纤维生长因子18(fibroblast growth factor 18,Fgf18)是一种分泌型的信号分子,参与小鼠(Mus musculus)和绒山羊(Capra hircus)毛发生长及毛周期的调控.本研究克隆了小鼠Fgf18基因CDS区的片段,并将其连接于超高硫角蛋白(ultra-high sulfur keratin,UHS)启动子的下游.Sac Ⅰ、BglⅡ、SphⅠ和EcoT14 Ⅰ的酶切鉴定结果表明,成功构建了Fgf18基因毛囊特异表达载体pUHS-Fgf18.原核注射线性化pUHS-FGF18,共获得3只转基因小鼠.RT-PCR检测结果表明,Fgf18基因在转基因小鼠皮肤中的表达明显高于对照小鼠(P＜0.05).转基因小鼠NO.205皮肤中Fgf18的表达量明显高于对照小鼠(P＜0.05),而肝脏、肾脏、心脏、睾丸、骨骼肌、脾、脑、肺、胃和小肠等组织则与对照小鼠无显著性差异(P＞0.05).Westem blot的结果表明,转基因小鼠皮肤的Fgf18蛋白水平显著高于对照组(P＜0.05).同时本研究利用RT-PCR的方法检测了转基因小鼠中Fgf18基因的拷贝数,其拷贝数在8～210.本研究成功建立了毛囊特异表达Fgf18基因的转基因小鼠模型,不仅可为进一步研究Fgf18基因在毛周期及毛发生长中的功能及其作用机理提供必要的工具和手段,也可为生产Fgf18基因修饰的转基因绒山羊提供一定的理论基础.     

GH、IGF1及其受体基因在蒙古马不同器官中的表达差异

生长激素(growth hormone,GH)具有调节生长节奏的能力。本研究旨在探索GH、生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF1)以及其受体IGF1R(insulin-like growth factor 1 receptor)在蒙古马(Equus caballus)不同器官中的表达差异。选取4匹平均年龄2岁的蒙古马为研究对象,利用qRT-PCR和免疫组化检测蒙古马不同器官中的GH、GHR、IGF1及IGF1R的表达水平并进行分析。qRT-PCR结果表明,GH基因在脾脏中的表达高于淋巴、心脏、肝脏、肾脏、骨骼肌、尾肌(P0.05),GHR基因在肝脏表达量最高,其次为胰腺、尾肌、睾丸、心脏、骨骼肌、淋巴、肾脏、脾脏、肺脏(P0.05),IGF1基因在肝脏表达高于其他组织器官(P0.05),IGF1R基因的表达量依次为肺、肝脏、脾脏、睾丸、心脏、肾脏、淋巴、骨骼肌、尾肌、胰腺(P0.05)。免疫组织化学检测结果显示,GH、IGF1蛋白在肝脏、肾脏、睾丸、骨骼肌和脾脏中均有分布,阳性反应强度不等。根据阳性细胞数得出,GH蛋白在肝脏、脾脏的阳性表达量高于其他组织器官(P0.05)。IGF1的阳性表达量在肝脏中最高,脾脏、肾脏、睾丸次之,骨骼肌最少(P0.05)。本实验通过RNA水平和蛋白水平两个层面的研究,发现GH、GHR、IGF1、IGF1R在蒙古马各器官中的表达具有差异性,为蒙古马的选育工作提供基础资料和科学依据。     

鸡SCD基因表达调控特性分析

硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearyl-CoA desaturase,SCD)是生物体内单不饱和脂肪酸生物合成的关键酶,在脂质合成和氧化的动态平衡调节过程中发挥重要的作用。本实验室前期工作显示,SCD基因可能与鸡(Gallus gallus)肝脏的脂质代谢过程相关。为了进一步研究该基因的表达调控规律及其生物学功能,本研究利用qRT-PCR分析了鸡SCD在不同组织和不同发育时期中的表达规律,并从个体和细胞水平分析雌激素对SCD的表达调控作用。结果表明,SCD基因在各组织中广泛表达,且在包括肝脏、腹脂和肾脏在内的与脂代谢相关组织中的表达水平相对较高;性成熟以后(产蛋期)SCD基因在鸡肝脏、腹脂和肾脏中的相对表达水平都显著升高(P0.05);雌激素处理的10周龄青年鸡肝脏、腹脂和肾脏中SCD的表达均显著升高(P0.05);雌激素处理的肝脏原代细胞中,SCD的表达也显著升高(P0.05)。研究结果表明鸡SCD基因的表达受雌激素调控,这一发现为进一步理解鸡脂肪代谢调控机制奠定了基础。     

绵羊口蹄疫病毒整联蛋白受体αv亚基基因不同组织表达差异

为了建立检测绵羊口蹄疫病毒(Foot andmouth disease virus,FMDV)整联蛋白受体αv亚基基因mRNA相对表达量的荧光定量RT-PCR方法,本研究根据报道的绵羊FMDV整联蛋白受体αv亚基(integrin,alphaV,ITGAV)基因序列设计实时定量PCR引物,以β-αctin为内参基因,采用相对荧光定量RT-PCR方法,检测分析αv基因在绵羊体内不同组织器官中的mRNA表达谱.结果显示αv基因在绵羊19种组织中均有不同程度的转录表达,在乳腺组织中表达量最高,蹄组织次之,肌肉组织最少,卵巢、瘤胃、气管、小肠、肺等组织上也有不同程度的表达.本研究成功建立了检测FMDV整联蛋白受体αv亚基基因在绵羊不同器官组织中mRNA表达水平的相对荧光定量RT-PCR方法,并明确了αv基因在不同组织间的表达差异,为FMDV组织嗜性研究及分子生物学检测方法的建立提供了资料.     

唾液腺特异表达植酸酶转基因猪的制备及分析

猪(Sus scrofa)对饲料中植酸磷的消化利用效率很低,其粪便中排放大量未吸收的磷,对环境产生严重污染,在猪唾液腺中表达分泌植酸酶是解决猪粪磷污染的一条新途径.为了制备唾液腺特异表达植酸酶的新型减磷排放转基因猪,本研究构建了一条由猪腮腺分泌蛋白基因(parotid secretory protein,PSP)启动细菌源植酸酶基因appA(acid phosphoanhydride phosphohydrolase)表达的转基因载体,并利用体细胞核移植技术获得14头原代(F0)转基因克隆猪,经PCR鉴定,其中8头为阳性猪.PCR分析显示,appA基因在转基因猪的唾液腺组织特异表达,但在肾脏、肝脏、心脏、十二指肠等组织中不表达.营养代谢分析证明,转基因猪粪磷排放量比非转基因猪显著减少了16％(P＜0.05),而转基因猪对干物质和能量的表观消化率以及对Ca、P的消化率均高于野生型猪,但未达到显著水平.外源基因从F0转基因猪稳定遗传至F1,并且Southern blot分析显示,外源基因是以单拷贝形式整合至转基因猪基因组.F1转基因猪的appA表达模式与F0转基因猪相似,其只在唾液腺中特异表达,且以颌下腺表达最高,其次是腮腺和舌下腺,在肾脏、心脏、肝脏等组织不表达.本研究成功获得唾液腺特异表达植酸酶转基因猪,为培育新型减磷排放的环保转基因猪新品种提供了科学依据.     

绍兴鸭热休克蛋白90基因(HSP90)cDNA克隆与组织表达分析

热休克蛋白(HSP)与生物机体的耐热性能相关。为研究不同热应激模式下与热应激恢复过程绍兴鸭热休克蛋白90基因(HSP90)mRNA在不同组织中表达差异,阐明HSP90基因的热应激保护的分子机理。本研究采用RT-PCR方法从绍兴鸭(Anas platyrhynchos)肝脏组织中克隆HSP90 cDNA序列(GenBank登陆号:JQ837244),编码区序列长度为2211bp,编码736个氨基酸;氨基酸序列比对结果显示,绍兴鸭与家禽(北京鸭、火鸡、鸡、日本鹌鹑)和哺乳动物(大猩猩、人、牛、灰狼等)的基因序列分别有92.6%～99%和80%～88%的同源性;荧光定量PCR结果发现,30℃长期应激能显著提高绍兴鸭垂体中HSP90 mRNA表达量;35℃长期应激能显著提高心脏、肝脏与垂体中HSP90 mRNA表达水平;40℃急性热应激时,心脏、肝脏、肾脏、垂体和胰腺中的HSP90 mRNA表达量达到最高值。恢复性实验表明,热应激恢复1h肝脏和心脏中HSP90 mRNA表达水平最高,均于3h降低到应激前水平。心脏、肝脏与垂体中HSP90 mRNA表达水平与热应激强度显著相关。本研究为以HSP90 mRNA表达水平为衡量指标进行绍兴鸭热应激预防与控制提供资料。